小鼠下颌早期牙胚体外单独培养的观察研究

摘要

目的：本研究运用改良支撑材料的颌面部器官体外培养技术,对胚胎早期小鼠下颌牙胚进行体外培养并观察其形态学的改变,进一步探索Shh对于胚胎早期小鼠下颌牙胚发育的影响. 方法：分离胚胎早期12.5天(E12.5d)的C57BL小鼠和K14-Cre,Shhfi/fl小鼠下颌牙胚(切牙、无牙区、磨牙),在体外培养7天,组织学切片HE染色观察所培养器官的生长发育情况和形态学变化,并且与E12.5相应小鼠的相应器官进行组织学比较.免疫组织化学染色观察Shh在C57BL小鼠(E12.5)下颌切牙区和无牙区体外培养7天后的表达情况.并在C57BL小鼠相应器官的培养液中加入shh蛋白,体外培养7天后,组织学切片HE染色观察其生长发育情况和形态学变化. 结果：1、C57BL小鼠(E12.5)：下颌第一磨牙单独在体外培养7天后,继续发育,达到帽状晚期的水平;无牙区单独在体外培养7天后,该区域中在自然生长条件下退化的牙胚继续发育,达到帽状期水平;下颌切牙单独在体外培养7天后可以形成2个切牙.加入外源性shh蛋白后,磨牙和无牙区继续发育,但是发育速度明显滞后于不加蛋白组;切牙区仍有2个切牙形成,但是发育也滞后于不加蛋白组.2、K14-Cre;Shhfl/fl小鼠(E12.5)：下颌第一磨牙单独在体外培养7天后,继续发育,达到帽状晚期的水平,与野生型相比无明显差异;下颌切牙和无牙区单独在体外培养7天后,未观察到牙胚形成. 结论：本研究中小鼠下颌早期牙胚体外单独培养后可进一步发育,并且在解除周围组织的限制后原本退化的牙胚可具备发育能力;Shh对于小鼠下颌早期牙胚的发育具有抑制作用,而这种抑制作用在切牙和无牙区体现更为明显.