靶向抑制Sox4基因对宣威女性肺癌裸鼠皮下移植瘤的影响

摘要

目的:探讨抑制宣威女性肺癌细胞系XWLC-05中转录因子Sox4的表达对裸鼠皮下移植瘤生长的影响.方法:构建靶向抑制Sox4基因的shRNA干扰质粒pGFP-V-RS-Sox4shRNA并转染XWLC-05细胞;采用实时荧光定量PCR和Western blot检测Sox4的表达水平;将稳定转染重组质粒的XWLC-05细胞接种于裸小鼠皮下,建立移植瘤模型;观测裸小鼠一般情况、成瘤情况和肿瘤生长情况,计算肿瘤抑制率;对小鼠行CT扫描以观察肿瘤的转移情况;免疫组化学染色检测移植瘤中Sox4和ki-67的表达.结果:成功构建了能高效抑制Sox4基因表达的pGFP-V-RS-Sox4shRNA重组干扰质粒,并筛选出稳定转染的XWLC-05细胞.除接种生理盐水组外,接种稳定转染干扰质粒pGFP-V-RS-Sox4shRNA的XWLC-05细胞组、接种稳定转染pGFP-V-RS-scramshRNA的XWLC-05细胞组和接种亲本XWLC-05细胞组小鼠的成瘤率均为100％.空白对照组(不加任何试剂的亲本细胞)、阴性对照组(转染质粒pGFP-V-RS-scramshRNA)和实验组(转染质粒pGFP-V-RS-Sox4shRNA)小鼠的体重均有不同程度的增长,但差异无统计学意义(P＞0.05).与空白对照组和阴性对照组比较,抑制Sox4基因表达后的实验组小鼠移植瘤的增长趋势明显受到抑制,差异均有统计学意义(均P＜0.05).实验组离体移植瘤体积为(2.30±0.34)cm3,与阴性对照组(3.99±0.45)cm3和空白对照组(4.03±0.42)cm3比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).实验组离体移植瘤重量为(0.86±0.14)g,低于阴性对照组(1.84±0.27)g和空白对照组(1.86±0.22)g,差异均有统计学意义(均P＜0.05).Sox4和ki-67蛋白主要表达于细胞核,实验组移植瘤细胞中Sox4蛋白的表达低于阴性对照组和空白对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).影像学和病理学检查结果显示,在实验期内成瘤小鼠的肿瘤均未发生远处转移.结论:成功建立了宣威女性肺癌细胞系XWLC-05的裸鼠移植瘤模型,干扰Sox4基因的表达可抑制移植瘤的生长.