Dnmt 1基因在不同倍性鲫鲤中表达研究

摘要

为研究性DNA甲基化转移酶化酶DNMT1(dnmt1基因编码)在不同倍性鲫鲤成鱼组织以及胚胎发育过程中的作用,本实验采用同源克隆方法,获得了鲤鱼(COC)、二倍体红鲫(RCC)、三倍体湘云鲫(3nAT)和四倍体鲫鲤(4nAT)的dnmt1基因cDNA编码区序列.结果表明在RCC,3nAT,4nAT中,dnmt1基因都存在两种亚型,而鲤鱼dnmt1基因存在一种类型.通过序列比对发现,3nAT,4nAT dnmt1基因都存在两种亚型都来自母本RCC,但在3nAT dnmt1基因一种亚型中发现融合了鲤鱼的dnmt1基因片段,发生重组现象.采用RT-PCR分析dnmt1基因mRNA在3种不同倍性鱼类组织中的表达情况,结果显示,dnmt1基因主要在实验鱼的性腺中表达,而在其他组织有少量表达.采用实时荧光定量PCR对dnmt1基因mRNA在不同倍性鱼性腺中的表达进行分析,结果发现,dnmt1基因在不同倍性鱼的繁殖期卵巢的表达都高于非繁殖期卵巢,并且在繁殖期和非繁殖期,dnmt1基因在三倍体湘云鲫的表达量低于二倍体红鲫和四倍体鲫鲤.采用实时荧光定量PCR对dnmt1基因mRNA在不同倍性鱼胚胎发育不同时期的表达进行分析,结果发现受精卵发育至多细胞期,dnmt1基因表达最高,随着胚胎的发育过程,dnmt1基因表达水平显著递减,最终维持一个低水平至出膜.研究表明,DNMT1在不同倍性鲫鲤组织中的表达存在一定的差异性,三倍体鱼dnmt1基因卵巢mRNA水平表达异常,推测与其不育有关联性.