人巨细胞病毒gp52蛋白与pp65蛋白融合表达及初步应用

摘要

建立以重组表达ＨＣＭＶ蛋白为抗原的检测试剂盒，提高试剂盒的敏感性及特异性。从病毒及质粒中分别扩增ｇｐ５２（２８１￣４３３ａａ，ｆ〈，１〉）及ｐｐ６５（３６１￣４７３ａａ，ｆ〈，２〉）２个片段，以不同酶切位点同时插入到ｐＴｒｃＨｉｓＢ载体上，筛选正确的重组质粒并在大肠杆菌中诱导表达。表达蛋白ｒｐ〈’５２￣６５〉占菌体总蛋白的３０℅，以包涵体的形式存在，分子量为３５０００。以金属螯合亲和层析（ＩＭＡＣ）及分子筛方法纯化表达蛋白，纯度达到９６℅，得率为２２．９℅。以间接法检测ＨＣＭＶＩｇＭ阳性血清，敏感性达到９０．４℅（１９／２１）。融合蛋白具有良好的抗原性，可代替ｇｐ５２及ｐｐ６５作为ＨＣＭＶ ＩｇＭ抗体检测试剂盒的包被抗原。