狮头鹅Myostatin cDNA的克隆及其融合蛋白基因工程疫苗的制备

摘要

本研究克隆了狮头鹅Myostatin编码区cDNA,核苷酸序列经分析与其它畜禽Myostatin高度同源.再将狮头鹅Myostatin成熟肽cDNA序列插入到表达质粒pRSET A的BamHⅠ和SacⅠ克隆位点之间,构建重组质粒pMstn SCAU(单体).然后利用质粒上存在的BamHⅠ和位于SacⅠ下游的BglⅡ两同尾酶,构建成重组质粒pMstn2 SCAU(二聚体).将两重质粒转化入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)株进行Myostatin融合蛋白的表达,用IPTG诱导后分别表达出分子量约为18kDa的单体和31kDa的二聚体Myostatin融合蛋白,在最佳条件下表达量分别占全菌总蛋白质的20.48％和5.52﹪.两融合蛋白分别可以用Ni-NTA凝胶进行层析纯化,说明分子中含有6 X His标记.用兔抗鸡Myostain抗体进行的免疫印迹分析结果证明所表达的两种蛋白为Myostatin融合蛋白.以上结果表明本研究成功克隆了狮头鹅肌肉生长抑制素编码区cDNA并依此成功构建、表达和纯化了Myostain成熟肽单体和二聚体的融合蛋白,以用作免疫促进动物的肌肉生长的基因工程疫苗.