鸡艾美耳球虫3-1E基因的克隆与表达

摘要

应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,分别从柔嫩艾美耳球虫甘肃株(E.tenella GS,Et GS)和堆型艾美耳球虫青海株(E.acervulina QH,Ea QH)孢子化卵囊的子孢子中提取的总RNA扩增得到鸡球虫子孢子表面抗原3-1E基因(Et GS 3-1E和Ea QH 3-1E).将Et GS 3-1E与原核表达载体pGEX-6P1连接,构建了的pGEX-3-1E原核表达质粒,并获得融合蛋白的高效表达和纯化.序列分析表明:Et GS 3-1E和Ea QH 3-1E的ORF均为513个碱基,共编码171个氨基酸.Et GS 3-1E的蛋白分子量为18.5KDa,Ea QH 3-1E的蛋白分子量为18.6KDa.ORF比较,Et GS 3-1E与文献报道的Ea 3-1E比较,共有2个核苷酸发生变异,核苷酸同源性为98.8﹪,有1个氨基酸发生变异,氨基酸同源性为99.4﹪;Ea QH 3-1E与文献报道的Ea 3-1E比较,共有4个核苷酸性变异,核苷酸同源性为97.7﹪,有3个氨基酸变异,氨基酸同源性为98.3﹪;Et GS 3-1E与Ea QH 3-1E比较,有3个核苷酸发生变异,核苷酸同源性为98.2﹪,有2个氨基酸发生变异,氨基酸同源性为98.8﹪.获得了Et GS 3-1E融合蛋白的高效表达和纯化,表达率达43.2﹪.