中华眼镜蛇毒及其组分神经毒抑制皮肤移植急性排斥反应

摘要

目的:探究中华眼镜蛇毒NNAV及其单一组分神经毒素NTX是否能够抑制皮肤移植所引起的急性免疫排斥反应,并探究其作用机制.rn 方法:1.给药方式：口服灌胃给药,中华眼镜蛇毒(20-80μg/kg),神经毒素(10-40μg/kg),阳性药雷公藤多苷片(15mg/kg)；2.建立大鼠皮肤移植模型：以雌性SD大鼠为供体,雄性Wistar大鼠为受体,建立大鼠背部皮肤移植模型；3.病理检查：取各组移植皮片，脾脏，胸腺固定包埋，HE染色观察病理变化；4.细胞因子检测；5.T淋巴细胞增殖；6.T淋巴细胞分化；7.混合淋巴细胞培养：以丝裂霉素处理过的SD大鼠脾淋巴细胞为刺激细胞，Wistar大鼠脾淋巴细胞为反应细胞，进行混合淋巴细胞培养；8.T细胞增殖与细胞周期：正常大鼠NTX给药21天，CFSE标记脾淋巴细胞，ConA刺激培养72h，流式检测细胞增殖情况;ConA刺激脾淋巴细胞培养48h，PI染色，流式检测细胞周期状况。rn 结果:1.NNAV及NTX可延缓移植皮片脱落，减轻移植部位炎症反应，促进植床表皮恢复生长；2.NNAV及NTX可显著抑制Th1细胞因子IL-2，IFN-γ的表达；3.NNAV及NTX可逆转由移植排斥引起的T淋巴细胞增殖；4.NTX可通过抑制CD4+T细胞的比例，来抑制由排斥引起的CD4+/CD8+比值的升高；5.NTX体外给药可在非毒性剂量内抑制T淋巴细胞增殖及混和淋巴细胞中的淋巴细胞增殖；6.正常大鼠NTX在体给药21天后可通过将细胞周期阻滞在G0期抑制T淋巴细胞增殖。rn 结论：皮肤移植引起的急性排斥反应主要是由T淋巴细胞所介导的，CD8+细胞毒性T细胞直接作用于移植物，破坏移植物，CD4+辅助性T细胞通过分泌细胞因子或特异性抗原抗体反应参与排斥进程。本研究实验结果表明NNAV及NTX可通过抑制T细胞增殖，抑制IL-2和IFN-γ表达上调，减少移植部位炎症细胞浸润，抑制CD4+/CD8+比值升高来抑制排斥反应，延缓移植皮片的脱落。体外研究表明神经毒素在非细胞毒性剂量内可抑制淋巴细胞增殖。正常大鼠NTX长期给药可通过将细胞周期阻滞在G0期而非毒性作用来抑制T细胞增殖。现有临床免疫抑制剂通常伴有脏器损伤和诱发肿瘤的副作用，NNAV及NTX长期给药并未产生不良反应，很有潜力成为一种安全的免疫抑制剂，并且其具有确切的抗炎作用，可更好地抑制免疫排斥反应。