基于芳烃受体揭示NOR抗类风关骨损伤的机制

摘要

目的:基于芳烃受体(AhR)调节的破骨细胞分化,探索NOR抗类风关骨损伤的机制。rn 方法:采用分子对接法考察NOR与AhR的结合;Q-PCR检测CYP1A1和CYP1B1mRNA表达;TRAP染色法检测类风关骨损伤效应细胞-破骨细胞分化;免疫共沉淀法检测AhR泛素化及AhR-Amt、AhR-NF-κB-p65复合物的形成;western blotting法检测胞浆及胞核中NF-κB-p65的表达.此外,以Ⅱ型胶原诱导建立大鼠CIA模型,灌胃给予NOR或NOR+AhR拮抗剂α-奈黄酮:采用H&E染色及X射线衍射法检测CIA大鼠关节局部炎症及骨损伤情况;TRAP染色法检测CIA大鼠关节局部破骨细胞数目。rn 结果:分子对接试验显示,NOR能够与AhR稳定结合.AhR拮抗剂α-奈黄酮和白黎芦醇与NOR合用后几乎完全逆转后者的抗破骨细胞分化作用。机制研究发现，NOR能够明显促进AhR-Arnt复合物的形成，并浓度依赖性上调RAW264.7中CYP1A1和CYP1B1等AhR靶基因的表达，但对AhR的泛素化无明显影响，表明NOR能够激动AhR，但不影响其后续的泛素化降解过程。NF-κB-p65入核是RANKL诱导的破骨细胞分化和活化中的关键事件，NOR显著抑制RANKL诱导的RAW264.7细胞中NF-κB-p65的入核，而α-奈黄酮和白藜芦醇均可明显干扰NOR对NF-κB-p65入核的抑制。此外，NOR能够促进AhR-NF-κB-p65复合物的形成。进一步研究发现，NOR虽几乎不影响CIA大鼠关节局部滑膜炎症却显著抑制其软骨/骨损伤，且与α-NF联用后作用几乎消失。NOR可明显减少CIA大鼠关节局部破骨细胞数目，且该作用同样可被α-NF所抑制。提示，NOR具有直接的抗RA骨损伤作用且该作用的发挥与激动AhR，进而减少破骨细胞数目密切相关。rn 结论:NOR抗类风关骨损伤作用的发挥与活化AhR、促进AhR与NF-κB-p65形成复合物、阻止NF-κB-p65入核，进而抑制破骨细胞形成密切相关。