转录因子Twist通过调控YB-1促进腹膜纤维化

摘要

目的:探讨转录因子Twist在腹膜透析患者腹透流出液人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,-HPMCs)中的作用及其可能的相关机制研究.rn 方法:将腹膜透析患者透出液离心后进行HPMCs培养,检测Twist、Bmi-1、E-cadherin、α-SMA的蛋白及免疫荧光表达.采用上调质粒pcDNA3.1-Twist和空载体pcDNA3.1分别转染HPMCs,检测E-cadherin、α-SMA以及Bmi-1的蛋白及免疫荧光表达.采用Twist或YB-1的siRNA质粒和空载体pSlience分别转染转分化的HPMCs,检测E-cadherin、α-SMA以及Bmi-1的蛋白及免疫荧光表达.生长曲线实验和细胞周期实验检测Twist或YB-1的siRNA质粒转染后,细胞的生长及周期阻滞变化情况.报告基因方法检测twist是否可直接调控YB-1表达.rn 结果:免疫荧光及Western blotting检测结果显示,随着透龄增加,E-cadherin表达降低,α-SMA、Twist及Bmi-1表达增加(P＜0.05).与空载体组相比,HPMCs过表达Twist或YB-1后,E-cadherin表达减弱,α-SMA、Twist及Bmi-1表达增加(P＜0.05).同时可导致细胞生长变慢,细胞周期阻滞.而用小干扰RNA使Twist或YB-1沉默后,E-cadherin表达增加,α-SMA、Twist及Bmi-1表达减弱(P＜0.05).同时可导致细胞生长变快,细胞周期阻滞减弱.报告基因结果提示:twist可直接结合并上调YB-1表达.rn 结论:Twist通过YB-1参与了腹膜上皮细胞EMT导致纤维化的发生发展过程,并导致细胞生长延缓及周期阻滞,其部分作用机制是通过YB-1促进了HPMCs的转分化导致的.