人蛋白C转基因小鼠的建立及乳腺表达

摘要

目的：为了获得乳腺定位表达人蛋白C(hPC)的转基因动物.方法：采用分步克隆的方法,构建了大鼠乳清酸蛋白(WAP)启动子调控的人蛋白C质粒,命名为pWPC.将系统鉴定过的该质粒,用PvuI+SmaI双酶切,回收4.6kb的注射片段(WAP-hPC-PolyA).通过显微注射技术,将其注入昆明小鼠受精卵雄原核内;共注受精卵810枚,存活640枚,移植给28只假孕母鼠,怀孕的18只母鼠共产仔81只.结果：提取鼠尾基因组DNA进行PCR检测,结果34只阳性.Southernblotting检测上述PCR阳性基因组DNA,结果20只整合阳性;将7只整合阳性母鼠传代,产仔7日后收集乳汁,进行ELISA检测,结果均有表达.结论：以上研究表明成功建立了人蛋白C转基因鼠乳腺生物反应器,为hPC乳腺表达研究奠定了基础.