金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae HN1)几丁质酶基因的克隆及高效表达

摘要

几丁质酶是昆虫病原真菌金龟子绿僵菌致病力的主要因子之一.本实验用RT-PCR方法,从本实验室分离筛选到的高毒力金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae HN1中,扩增得到几丁质酶基因全长,此基因全长为1275bp,登录号为DQ011865,经Blast分析此基因序列与M.anisopliae E6的chi1基因(AF02749)同源率为96％.以pET-22b(+)为基础载体,构建pET-chi重组表达载体,在大肠杆菌(Escherichia.coli)BL 21中进行表达.经SDS-PAGE分析,获得了42kDa大小的重组目的蛋白,目的蛋白占表达总蛋白含量的63.3％.菌体经冷冻与超声波破碎后,按DNS法可测得几丁质酶的活性.