猪β2-微球蛋白基因在大肠埃希氏菌中的表达与纯化

摘要

目的:构建猪β2-微球蛋白(Sβ2m)基因的原核表达载体,使其能在大肠杆菌中得到高效表达并能纯化,为构建猪MHC-Ⅰ类分子肽四聚体奠定基础.方法:采用RT-PCR技术从猪外周血单核细胞(PBMC)中扩增出去信号肽的S2m基因,克隆至pET-28a(+)高效表达载体后进行化学诱导表达,利用Ni2+NTA鏊合物树脂柱对表达产物进行了纯化,用SDS-PAGE和Western blotting法对表达产物进行鉴定.结果:成功构建了pET-Sβ2m表达载体,表达产物以包涵体的形式存在,分别占全菌和不溶性蛋白的40.4％和91.7％,并在变性条件下对包涵体中的重组Sβ2m进行了纯化,获得了高纯度的Sβ2m,结论:成功表达、纯化了Sβ2m,为进一步利用亲和素在体外构建猪MHC-Ⅰ类分子肽四聚体奠定基础.