H5和H7亚型禽流感多重RT-PCR快速鉴别诊断方法的建立

摘要

本研究参考GenBank公开的基因组序列,设计针对AIV的NP基因、片段大小为250bp的AIV通用引物和分别针对AIVH5和H7亚型的HA基因分别设计了特异性引物,扩增片段大小为541bp和309bp,通过对引物浓度、退火温度和Ex Taq酶用量等反应条件进行优化后建立了H5和H7亚型AIV的多重RT-PCR检测方法.特异性和敏感性试验表明该方法具有较高的特异性、敏感性和重复性,应用该多重RT-PCR检测方法对人工发病临床样品进行RT-PCR检测,并与病毒鸡胚分离法作比较,结果表明,AIV-H5亚型棉拭子多重RT-PCR检测结果与鸡胚分离结果符合率约为86.9％;AIV-H7亚型的符合率约为85.7％.