PRRSV C14-2分离株N基因的克隆与原核表达

摘要

本文通过RT-PCR特异性扩增出PRRSVC14-2分离株的N基因全序列,并进行了pUCm-T载体克隆,构建了pET-32a-N原核表达载体.重组菌pUCmT-N的PCR鉴定均获得了大小约380bp的DNA条带.质粒pUCmT-N的BamHI/SalI酶切获得了大小约380bp与2.7kb的两条带;质粒pET-32a-N的双酶切获得了大小跃380bp及5.9kb的两条带.N基因的序列比对结果表明C14-2分离株与美洲型毒株同源性较高;系统进化发育树构建结果证实了C14-2株属于美洲型毒株.Western-blotting鉴定结果表明重组N蛋白具有抗原活性,为今后建立以重组蛋白为抗原检测PRRS的方法打下基础.本研究对于PRRS的流行病学调查、病原学研究及诊断防治均提供了基础材料.