利用反向遗传学技术获得适应RK13细胞的兔出血症病毒

摘要

本研究在前期构建的兔出血症病毒(Rabbithemorrhagicdiseasevirus,RHDV)全长cDNA分子的基础上,利用SP6RNA聚合酶系统,在体外转录合成了病毒RNA.然后用转染试剂将病毒RNA导入RK13细胞,12h后可见明显致细胞病变(CPE),用间接免疫荧光方法在RK13细胞中也检测到了病毒抗原的产生.将收获的细胞培养物再次接种RK13细胞,仍然能产生明显病变,其半数组织感染量(TCID50)可达104.6/ml.最后大量收取细胞培养物,经差速离心法纯化病毒后,在电镜下可观察到RHD病毒粒子.上述实验结果证明我们利用反向遗传学技术首次获得了可适应于RK13培养的RHDV,为将来研究RHDV的分子致病机理和新型疫苗等提供了有利的工具.