表达破伤风毒素C片段的减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建与鉴定

摘要

为构建表达破伤风毒素C片段基因的减毒鼠伤寒沙门氏菌,将编码破伤风毒素C片段的基因插入到asd+的组成型表达载体pYA3333,转化asd基因突变的E. coli X6212,获得重组质粒pYA3333-TetC,再将重组质粒通过电穿孔法转入宿主菌,构建成表达破伤风毒素C片段基因的平衡致死的鼠伤寒沙门氏菌X4550(pYA3333-TetC).免疫印迹试验证实了该重组菌表达的蛋白与预期的目的蛋白一致.重组菌X4550(pYA3333-TetC)的稳定性试验表明,在体外培养100代后,随机挑选的重组菌落全部都能生长,重组菌X4550(pYA3333-TetC)的生长曲线测定表明,X4550(pYA3333-TetC)和X4550(pYA3333)的生长状态基本一致.动物试验证明该重组菌是安全的,破伤风毒素攻击后能提供良好的保护作用,为进一步的疫苗研发奠定了基础.