夏枯草抗单纯疱疹病毒活性研究

摘要

目的:单纯性疱疹是由单纯性疱疹病毒(Herpes simplex virus,HSV)所引起的一种急性疱疹性皮肤病, HSV分为两型,即单纯性疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)和单纯性疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2).Ⅰ型主要引起腰部以上部位,包括口腔、唇、眼和脑部的感染;Ⅱ型主要引起生殖器部位皮肤粘膜感染,己成为最流行的性传播疾病之一.要引起生殖器部位皮肤粘膜感染，己成为最流行的性传播疾病之一。目前临床上治疗药物为核昔类抗疤疹病毒药物，只能抑制病毒复制，对初发的疤疹有很好的抗病毒作用，但无法阻断病毒感染和传播，对潜伏期和复发性疙疹疗效较差，不能在治疗终止后根除潜伏病毒及预防复发;并且临床上己证明长期用药会产生耐药性病株，使其治疗作用大大降低。中药可同时兼具抗病毒和提高免疫等作用而日益备受关注。夏枯草为唇形科植物夏枯草Prunella vulgaris L.的干燥果穗，因“夏至后即枯”而得名。始载于《神农本草经》，具有清肝泻火，明目，散结消肿等功效。用于治疗目赤肿痛，目珠夜痛，头痛眩晕，痕痈，瘦瘤，乳痈，乳癖，乳房胀痛等，民间饮用的历史己有1000多年。《中华本草》记载着夏枯草提取物有体外有抗Ⅰ型单纯疙疹病毒的作用。需要进一步确证夏枯草中抗疤疹病毒的成分。rn 方法:通过体外CPE, MTT及空斑实验技术，研究夏枯草抗疤疹病毒活性的成分及作用机制，并通过体内HSV-1及HSV-2动物实验确证夏枯草抗疤疹病毒的作用及安全性。采用超滤技术纯化夏枯草多糖，进一步评价抗疤疹病毒作用。rn 结果:(1)通过对300多种中药的抗病毒活性进行了较系统的体外CPE筛选，发现夏枯草的水提液具有抗HSV活性;将夏枯草热水浸提、乙醇沉淀后得到的夏枯草粗多糖通过空斑减数试验发现其具有抗 HSV的活性，而上清液却没有发现抗HSV的作用。进一步分离纯化得到具有抗HSV活性的夏枯草多糖组分，其分子量为3500 Da，其中多糖含量为42%,为一种阴离子多糖，抑制HSV的能力呈现浓度依赖关系，二者的IC50为18和10μg/ml。(2)夏枯草多糖对HSV-1感染豚鼠皮肤的保护作用:夏枯草多糖对HSV-1感染豚鼠皮肤的治疗作用呈现浓度依赖关系，15%夏枯草多糖治疗作用与阿昔洛韦相似，可以使小鼠的感染情况在8d即出现明显好转，lld疤疹症状完全消失。(3)夏枯草多糖对HSV-2感染小鼠阴道炎的保护作用:体外给予夏枯草多糖能够降低HSV-2感染小鼠死亡率，延长存活时间。夏枯草高剂量组的治疗作用与阿昔洛韦乳膏组相似，中、低剂量夏枯草多糖组的存活率与病毒组相比也有显著性差异，同时对各组小鼠阴道分泌物的病毒检测发现，夏枯草多糖高剂量组小鼠阴道分泌物呈阳性数量与阿昔洛韦乳膏组相似，与病毒组存在显著性差异。(4)无细胞毒性:采用小鼠小肠上皮细胞(RIE-1)测试夏枯草水提物对哺乳动物细胞的毒性，当把水提物的浓度提高到500μg/ml时，未发现有毒性。采用凝血酶原反应时间来测试纯化后夏枯草多糖组分的抗凝血活性，结果显示纯化后夏枯草多糖组分没有抗凝血活性。(5)体外给药无刺激性:将夏枯草多糖组分用适量高分子材料混合后，涂抹于豚鼠破损皮肤表面，给药后24h，用温水将乳膏搽洗干净，夏枯草多糖组分对皮肤没有刺激性。(6)采用超滤技术制备的夏枯草样品，多糖纯度和抗单纯性疤疹病毒活性均优于传统的醇沉工艺。rn 结论:从夏枯草中分离纯化的多糖有抗I型单纯性疮疹病毒(HSV-1)和II型单纯性疤疹病毒(HSV-2)的作用，其作用机制不同于目前临床药物阿昔洛韦(ACV)，不是直接作用于病毒的复制环节，而是阻止病毒吸附和穿入宿主细胞，以及促进淋巴细胞转化增值和诱生干扰素等免疫调节作用的结果，其中活性成分及作用机制有待进一步研究。