脲梯度排阻色谱复性E.coli表达的rhG-CSF

摘要

排阻色谱(SEC),又称凝胶过滤色谱(GFC)是目前研究最多的用液相色谱对蛋白进行复性的方法之一.1992年,耿信笃教授等首次用排阻色谱(SEC)对溶菌酶(Lys)、核糖核酸酶(RNase)和牛血清白蛋白(BSA)进行了复性并同时进行了分离,虽然当时并不认为用SEC能对这三种蛋白完全复性,但这是首次对用SEC法复性蛋白进行报道.Batas等对用SEC进行蛋白质复性进行了较为详细的研究，与常用的稀释复性法相比,SEC复性具有很多优点,已有专门论述SEC复性的综述文章发表.目前这一方法已用于多种蛋白质的复性,效果较好.在普通的SEC复性中,变性剂浓度变化突然,这使得复性过程中因变性蛋白分子聚集而损失的蛋白较多.谷振宇等提出了脲梯度SEC复性法,在复性过程中脲浓度是线性降低的,因此更有利于变性蛋白的复性.前文用不含脲梯度的SEC对重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)进行了复性,本文在此基础上采用脲梯度SEC对rhG-CSF进行了复性,研究了脲梯度的长度、脲梯度中的最终脲浓度以及进样体积对复性过程的影响,并比较了脲梯度SEC和普通SEC对rhG-CSF的复性效率。