十二烷基苯磺酸钠增敏富勒醇标记麦胚凝集素亲和吸附固体基质室温燐光法测定ALP

摘要

基于富勒醇在硝酸纤维素膜(nitrocellulose membrane,简称NCM)上于λex/λem=542.00/709.36 nm处能发射强而稳定的固体基质室温燐光(solid substrate-room temperature phosphorimetry,简称SS-RTP)信号,十二烷基苯磺酸钠(dodecyl benzene sulfonic acid sodiumsalt,简称DBS)能修饰富勒醇(fullerol,简称F)而发射更强的室温燐光,由DBS-F标记的麦胚凝集素(Triticum vulgarelectin简称WGA),不仅仍能在硝酸纤维素膜上与碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,简称ALP)发生定量的特异性亲和吸附反应,而且亲和吸附反应产物(WGA-ALP-WGA-F-DBS)能发射强而稳定的室温燐光信号,其ALP的含量与△Ip成线性关系,据此建立了DBS修饰富勒醇-麦胚凝集素-碱性磷酸酶-亲和吸附固体基质室温燐光测定ALP的一种新方法(WGA-ALP-WGA-F-DBS method).WGA-ALP-WGA-F-DBS method的线性范围为0.040～45.00 fg spot-1(样品体积0.4 μl spot-1,对应浓度0.10～112.50 pg·mL-1),工作曲线的回归方程为△IP=32.68+5.514 mALP fg spot-1 r=0.999 4.分别对0.10和112.50 pg·mL-1ALP工作液重复测定11次,RSD为4.5％和3.6％,其检出限为0.011 fg·spot-1(对应浓度为2.8×10-14 g/mL,即2.8×1019 mol/).本方法灵敏、准确、精密度好,已成功用于人血清中ALP的测定及对人体疾病的监测与预报.