引物延伸-变性高效液相色谱法检测去甲基化活化16型乳头状瘤病毒

摘要

目的:建立1种检测16型乳头状瘤病毒(HPV16)7862nt上CpG位点非甲基化的方法.rn 方法:培养宫颈癌SiHa和CaSki细胞系,提取基因组DNA,通过亚硫酸氢钠修饰将未甲基化的胞嘧啶转化成尿嘧啶,PCR法预扩增包含该位点的HPV序列,针对该CpG位点5'端序列设计并合成延伸引物,再在同时含ddTrP和ddCTP的体系中进行延伸反应,用变性高效液相色谱法同时分离检测2种延伸产物.rn 结果:在SiHa细胞的延伸产物中仅能够检测到代表未甲基化位点的ddTTP延伸产物(保留时间6.7 min),而在CaSki细胞的延伸产物中不仅能够检测到ddTTP的延伸产物,还能检测到代表甲基化位点的ddCTP的延伸产物(保留时间6.3 min).rn 结论:所建立的引物延伸-变性高效液相色谱联合检测法能够同时检出感染细胞中非甲基化活化和甲基化失活的HPV病毒拷贝,灵敏度达1/500(0.2％).