溶血对血清标本进行FQ-PCR核酸定量检测的干扰

摘要

目的：评价溶血对血清标本FQ-PCR核酸定量检测结果的影响,分析发生影响的机理。方法 建立扩增效率Grubbs离散值分析法、扩增效率置信区间估计法及测定值比较法,评价不同血红蛋白含量的溶血血清标本进行FQ-PCR法HBV-DNA定量检测的效率。结果 血红蛋白含量为0.6、3、5、10、20G/L的样本扩增曲线分析显示,包括待测标本、质控样本、标准参考品在内的同批次反应样本扩增效率E0.05-0.1数值组均未检出离散值;不同HBV-DNA浓度水平的含血红蛋白组的扩增效率计算值均在同批次正常血清样本的数值分布的90﹪分布范围内;对于高浓度(1.330E+7拷贝/ml)样本浓度测定值分别为无血红蛋白样本的83﹪、51﹪、22﹪、15﹪、8﹪;对于低浓度(3.425E+3拷贝/ml)样本浓度测定值则未见显著差异。结论 扩增曲线分析提示含血红蛋白血清样本扩增效率与正常血清标本无显著差异,但对于HBV-DNA高浓度样本则其FQ-PCR核酸定量检测结果产生严重干扰,导致测定值偏低,偏离程度与血红蛋白浓度成正相关,提示干扰的产生最主要可能不是来自于抑制扩增反应,而来自于有效模板的损失。