猪繁殖与呼吸综合征病毒5'非翻译区序列的反向遗传操作

摘要

在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)北美株感染性克隆pCBC2的基础上,利用突变PCR技术成功构建了在病毒基因组5'端非编码区(5'UTR)和ORF1起始密码子之间插入NdeⅠ的全长克隆pTLNd4,并在此基础上将北美株病毒的5'UTR替换为欧洲株的5'UTR,成功构建了全长克隆pTLV8。以体外转录的RNA转染MARC-145细胞,pTLNd4产生了细胞病变(CPE),pTLV8未产生.对这两株突变病毒进行RT-PCR和Northem Blot试验,分别对病毒基因组PNA复制和亚基因组mRNA转录水平进行分析；同时,还对产生CPE的pTLNd4进行了病毒学试验,结果表明它与亲本病毒无论从分子生物学水平或病毒学水平都无明显差异,而pTLV8虽表产生CPE,但用RTPCR在病毒传代细胞中检测到了基因组RNA,说明替换欧洲型5'UTR的突变病毒丧失了复制能力与感染性,但目前仍然能够提供病毒RNA合成所需要的顺式调控因子。本研究为进一步解析5'UTR的调控机制奠定了基础。