花生白藜芦醇合成酶基因克隆及在大肠杆菌中表达

摘要

20d苗龄的花生种质H2007经紫外光照射2h后放置12h抽提RNA作为模板,以兼并引物扩增得到大小约为1200bp片段,测序结果表明,此片段是花生的RS-cDNA,并且是一个完整的ORF。将此片段正向插入到大肠杆菌表达载体pET-32a(+)中,对重组子进行筛选和鉴定,证明了RS-cDNA已经正确插入到pET-32a(+)中。将重组子转入到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析结果表明,重组蛋白为45kDa,随诱导时间增加,表达量递增。