禽呼肠孤病毒感染禽和疫苗免疫禽ELISA鉴别方法的建立

摘要

采用已构建好的PGEX-4T-1-δNS和PGEX-4T-1-P17质粒,原核表达了禽呼肠孤病毒(ARV)的两个非结构蛋白δNS和P17,将这两个蛋白进行包涵体纯化后作为包被用抗原,分别进行间接ELISA,并确定它们的最佳抗原包被浓度分别为9.3μg/mL和11.5μg/mL;一抗血清的稀释度都是1:200;HRP酶标二抗羊抗鸡IgG稀释度为1:5000.初步建立了能检测ARV感染的δNS-ELISA、P17-ELISA方法,此外以δNS、P17两蛋白按以上确定的条件同时包被,建立δNS-P17-ELISA.然后分别用δNS-ELISA、P17-ELISA以及δNS-P17-ELISA三种方法对接种过ARV活病毒或灭活疫苗的33份SPF鸡血清进行检测,并分析其检测结果,结果表明以非结构蛋白建立的三种ELISA方法均能区分ARV活病毒感染与灭活疫苗免疫的抗体,进一步对这三种方法进行敏感性、特异性以及Excel分析比较,表明δNS-P17-ELISA方法能更有效的区分ARV感染与灭活疫苗免疫抗体.