猪流感病毒HA基因原核表达及其初步应用

摘要

利用RT-PCR方法扩增猪流感病毒A/Swine/Henan/11/2005(H1N1)HA基因，克隆于PMD18-T载体进行测序。以PMD18-HA为模板、利用带酶切位点的引物再次扩增HA基因的开放阅读框(ORF)，克隆到表达载体pET32a中，经双酶切、测序及PCR鉴定得到阳性重组表达质粒pET-HA，将质粒转化到表达宿主菌BL21(DE3)中，经终浓度为1mM的IPTG诱导，SDS-PAGE结果显示，HA蛋白获得了高效表达，经Western blot检测证实表达产物具有良好的免疫学活性，经间接ELISA预试验表明具有良好的抗原反应性。本研究为以重组HA蛋白为抗原建立H1亚型猪流感抗体的ELISA检测方法奠定了基础。