鹅细小病毒vp3基因真核表达载体的构建及其在Vero细胞中的表达

摘要

根据已发表的鹅细小病毒(GPV)B株核苷酸序列，设计并合成了一对引物，PCR扩增GPV吉林分离株主要结构蛋白vp3基因，获得与预期大小相符约1.6ku核苷酸片段。将该片段纯化后克隆入pMD18-T载体，转化感受态大肠杆菌JM109，双酶切鉴定，筛选阳性重组质粒并测序。经过酶切和连接反应，将vp3基因克隆入真核表达载体pVAXI，转化感受态大肠杆菌DH5α，筛选阳性克隆，提取质粒，进行了PCR和酶切鉴定。通过脂质体法将pVAXI-VP3转染Vero细胞，RT-PCR和间接免疫荧光法检测。结果显示，vp3基因克隆成功，与GPV B株核苷酸序列同源性为96.2%；PCR和酶切鉴定结果证实，成功构建了含GPV vp3基因的真核表达载体pVAXI-VP3。提取转染该质粒的Vero细胞RNA，RT-PCR扩增，在1000bp～2000bp之间可见一明显DNA条带；间接荧光抗体染色转染细胞，在细胞表面可见特异荧光。