弓形虫野毒株ROP5蛋白基因的克隆、表达及反应原性研究

摘要

目的克隆和表达弓形虫虎源野毒株ROP5蛋白基因。方法运用RT-PCR技术从弓形虫感染虎腹水中扩增出ROP5基因，将其克隆入T载体中进行测序和分析，并将目的基因亚克隆到大肠杆菌表达载体pET28a中进行诱导表达。结果该基因全长1650bp，编码549个氨基酸。其中前24个氨基酸构成信号肽序列。与GenBank中报道的RH株相比，有12个核苷酸有差异，导致7个氨基酸发生改变，两者核苷酸和推导氨基酸序列的同源性分别为99.2%和98.9%。转化重组质粒pETROP5的大肠杆菌BL21(DE3)在IPTG的诱导下，可表达出分子量为64.8ku的重组蛋白，并且能与弓形虫抗体发生血清学反应，表达量占菌体蛋白的15.6%。结论成功克隆和表达了弓形虫野毒株ROP5蛋白基因，表达的重组蛋白具有良好的反应原性。