猪圆环病毒2型分子标记毒株的构建及生物学特性研究

摘要

以临床分离的猪圆环病毒2型(PCV2)为材料，利用PCR法扩增病毒基因组，将2个基因组顺式连接插入到质粒载体中构建感染性分子克隆。通过引物设计替换碱基，在病毒基因组内插入SalⅠ制性内切酶位点作为遗传标记，经重组质粒转染细胞获得带有遗传标记的新毒株。采用免疫过氧化物酶单层细胞试验、免疫电镜、核酸序列分析表明，在病毒感染细胞中检出病毒特异抗原，其抗原性、病毒形态学及基因序列与亲本毒株一致。鉴于新病毒基因组内插入一个SalⅠ酶切位点，可用限制性片断长度多态性分析法可与野生型病毒相鉴别。新毒株经细胞连续传80代，体外培养增殖性能稳定，毒价可达107.0TCID50/mL。取第60代病毒培养物经肌肉和滴鼻途径接种35日龄抗体阴性仔猪4头，接种后表现出体温升高、进行性消瘦、被毛粗糙及体表淋巴结肿胀症状，迫杀后多种脏器中均能检测到病毒抗原与核酸。研究表明，利用感染性分子克隆手段构建带有遗传标记的PCV2新毒株，为进一步开展该病毒的致病性、疫苗免疫、分子诊断等研究奠定了基础。