烟草野火病原菌hrpZpsta基因的克隆与表达

摘要

根据Genebank序列(登录号为AB112555)hrpZ基因的ORF序列设计—对引物,以烟草野火病原菌的基因组DNA为模板,经PCR扩增获得423bp基因片段。将此片段克隆测序,结果显示所获得的烟草野火病菌的hrpZ序列,与Genbank的hrpZ基因同源性为100%,把所获得基因命名为hrpZpsto。根据质粒pGEX-4T-I和hrpZpsta设计引物进行PCR扩增,将PCR产物和质粒pGEX-4T-I用EcoRI/BamHI双酶切、连接,成功构建重组表达质粒pGEX-hrpZpsta,把重组质粒转化至大肠杆菌BL12(DE3)菌株,经筛选得到的阳性克隆菌,IPTG诱导表达HrpZpsta蛋白。SDS-PAGE显示,目的蛋白在重组菌株中得到了可溶性高效表达。该重组蛋白分子量为41.2kD与理论值相符。采用注射法,融合蛋白具有引起番茄叶片过敏性坏死的生物活性。