淫羊藿甙对胃癌细胞BGC-823迁移运动能力的影响

摘要

目的：淫羊藿是小檗科多年生草本植物，别名仙灵脾，是具补肾壮阳,祛风除湿功效的特色传统中草药。淫羊藿甙是其主要的黄酮类提取物，现代药理实验研究表明，淫羊藿甙能增强心脑血管血流量、提高免疫功能、调节骨代谢、还具有抗衰老和抗肿瘤等功效。在本实验中将着重探讨淫羊藿甙抗肿瘤的功效。以淫羊藿甙对胃癌细胞BGC-823进行处理，在划痕实验和三维细胞迁移实验观察细胞迁移运动能力的改变；并以Western blotting，RT-PCR等方法检测胞内相关蛋白Rac1，VASP表达量的改变；并筛选Rac1，VASP的有效干扰片段，设置Rac1-siRNA组，VASP-siRNA为对照组。rn 方法：rn （1）设计并合成三条Rac1，VASP特异性siRNA，分别为Rac1-99，Rac1-328，Rac1-439；VASP-942，VASP-1002，VASP-1024。rn （2）进行有效片断筛选：同时设置空白对照组，阳性组，FAM阴性对照组，经脂质体介导转染，RT-PCR检测Rac1，VASP的mRNA表达量，Western blotting检测蛋白表达，计算抑制效率，确定有效序列。rn （3）MTT 法筛选淫羊藿甙，VEGF的有效作用浓度。rn （4）设置Rac1小干扰组，VASP小干扰组，VEGF组，淫羊藿甙组及空白对照组；除空白组外，各组都以VEGF进行处理，提高Rac1，VASP表达量；之后分别以Western blotting，RT-PCR进行检测；并以二维划痕实验和三维细胞侵袭实验（Transwell migration assays）观察胃癌细胞迁移和侵袭能力的改变。rn 结果：rn （1）VEGF组相对空白组细胞迁移运动能力明显增强（P＜0.05），相关蛋白表达量增多。rn （2）以Rac1-siRNA，VASP-siRNA 转染胃癌细胞BGC-823 后，被转染细胞中Rac1，VASP的mRNA和蛋白表达水平明显下降（P＜0.05），证明 Rac1-siRNA，VASP-siRNA可抑制细胞中相关蛋白的表达。rn （3）淫羊藿甙组内Rac1，VASP 表达量明显下降（P＜0.05）；同时在划痕实验和三维细胞迁移实验中胃癌细胞的迁移运动能力都有所减弱（P＜0.05）。rn 结论：rn （1）VEGF，Rac1，VASP对胃癌细胞的迁移运动能力有着重要的影响。rn （2)VEGF 可提高胞内Rac1，VASP的表达量及细胞运动能力。（rn 3）siRNA组明显抑制胃癌细胞内Rac1，VASP的mRNA合成及其相应蛋白的表达，并且降低其迁移和侵袭能力。rn （4）淫羊藿甙可明显改变胃癌细胞BGC-823的迁移侵袭能力，并影响相关蛋白的表达。