RGD-TH融合蛋白的生产及功能研究

摘要

血栓形成是引发心、脑血管疾病的重要原因，溶栓抗凝药物的研究具有重要意义。构建了由凝血酶的识别序列LGPR将RGD重复序列与HV连接在-起的重组双功能水蛭素(RGD-LGPR-Hirudin)cDNA的表达质粒RGD-TH-DPIcrn9K，转化入毕赤酵母中，经筛选得到高表达的阳性克隆。种子菌经过发酵培养，其培养液上清经超滤浓缩、凝胶过滤层析和离子交换层析后，得到纯度大于97％的RGD-TH，发酵产率为0.8lm/ml。纯化后的RGD-TH经过SDS-PAGE，抗凝血酶活力分析、抗血小板聚集、N末端测序分析等方法鉴定，证明该表达产物为水蛭索的衍生物，具有抗凝和抗血小板聚集的功能。