人神经生长因子在哺乳细胞CHO内的表达及鉴定

摘要

通过构建人神经生长因子的几种不同真核表达载体，并增加一些转录及翻译调控元件、更换信号肽序列，比较人神经生长因子的表达水平，从中选择适合高表达人NGF的真核载体。将构建的三种重组质粒pMD902-β-NGF，pcDNA3.1-β-NGF和pcDNA3.1-His-β-NGF质粒转染CHO细胞，ELISA检测NGF的表达。pMD902-β-NGF、pcDNA3.1-β-NGF、pcDNA3.1-His-β-NGF均表达NGF，pcDNA3.1-His-β-NGF的表达水平最高。鸡胚背根神经节检测法检测表达NGF蛋白的生物学活性，均能刺激鸡胚背根神经节周围长出放射状的神经纤维，表明表达的人神经生长因子有较好的生物学活性。