发根农杆菌

摘要： 发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)的建立对植物功能基因的验证具有重要意义,为了在桉树(Eucalyptus)中建立发根农杆菌介导的遗传转化体系,本研究以不同的发根农杆菌菌株侵染尾巨桉(Eucalyptus urophylla×E.grandis)的叶片和茎段,确定合适的农杆菌菌株和外植体类型,在此基础上开展农杆菌浓度、侵染时间对毛状根诱导的影响。结果表明:采用发根农杆菌菌株MSU440,以叶片为外植体进行发根诱导,最高获得了81.0%的毛状根诱导率,毛状根平均根长达到3.23 cm。在发根农杆菌浓度为OD_(600)=0.3、侵染时间为30 min时,共培养48 h后经过20 mg·L^(-1)卡那霉素筛选培养,通过PCR分子鉴定和GUS染色证实外源基因稳定地整合在桉树毛状根基因组中,转化率达20.2%。初步建立了发根农杆菌介导的桉树遗传转化体系,为桉树基因功能鉴定和进一步的转基因育种奠定基础。

摘要： 利用发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)C58C1诱导烟草Va116产生毛状根,建立烟草Va116毛状根-柯氏无梗囊霉(Acaulospora koskei)双重培养体系;分析不同消毒方法、培养基pH、激素对柯氏无梗囊霉萌发的影响,筛选柯氏无梗囊霉与烟草Va116毛状根建立双重培养体系的最佳条件。结果表明:发根农杆菌C58C1菌液在600nm处的吸光值为0.6~0.8、侵染时间为8~10 min,通过抑菌、除菌培养,获得烟草Va116毛状根,诱导率为53.33%。柯氏无梗囊霉孢子在体积分数75%酒精中消毒1 min, A液(质量浓度20 g/L的氯胺(T)、每0.1 L加2滴吐温20)消毒10 min,转入B液(质量浓度200 mg/L的硫酸链霉素+质量浓度100 mg/L的硫酸庆大霉素)消毒10 min,萌发率最高(为48.33%)、污染率最低(为6.67%);柯氏无梗囊霉孢子在水琼脂培养基萌发,最佳pH为6.0;在独脚金内酯(GR24)质量浓度450 pg/L、精胺(SPM)质量浓度40 mg/L时,柯氏无梗囊霉孢子萌发效果最好,萌发率分别为61.67%、58.33%。成功建立了烟草Va116毛状根-柯氏无梗囊霉双重培养体系,产生了新生孢子,使柯氏无梗囊霉完成了整个生命周期,并记录了根外菌丝和根内菌丝的形态特征、泡囊结构的形成。

摘要： 以紫花苜蓿品种WL-525HQ为材料,用发根农杆菌介导毛状根转化,分析毛状根分化率及转化率,筛选最优的转化方案,以快速获得紫花苜蓿转基因材料。结果表明:当发根农杆菌侵染苜蓿叶片的菌液浓度OD_(600)达0.5时,毛状根分化率可达72%;筛选培养基中添加5~8mg/L潮霉素时,毛状根的分化率及转化率都相对较高,分别为30.7%~33.2%和59.7%~67.9%,转化方案可靠;在以毛状根为外植体诱导全株时,采用羧苄青霉素能够有效抑制细菌,5mg/L潮霉素对愈伤组织的分化效果最好。优化了以毛状根为外植体探究紫花苜蓿全株的转化方案,并应用于耐铝基因MsLEA2研究,为紫花苜蓿功能基因研究提供了一种快速有效的手段。

摘要： 【目的】建立一种简单高效的农杆菌介导薄壳山核桃Carya illinoinensis的转化体系。【方法】以薄壳山核桃钟山的幼苗为材料,采用四因素(菌种、菌液浓度、处理部位、苗龄)三水平正交试验进行农杆菌侵染薄壳山核桃茎部诱导发根,并通过DNA检测及GFP荧光验证。【结果】影响发根农杆菌侵染薄壳山核桃生根诱导率的因素大小为苗龄>处理部位>菌液浓度>菌种,OD_(600)为0.8的K599发根农杆菌于材料子叶期时侵染距离种子3~5 cm处,毛状根植株诱导率达56.5%,阳性毛状根植株诱导率为45.2%。【结论】建立并优化了非组培依赖的发根农杆菌介导的薄壳山核桃转化体系,为薄壳山核桃新品种培育、利用基因工程改良农艺性状奠定基础。

摘要： [目的]检测新型吡唑并[1,5⁃a]嘧啶⁃3⁃碳腈类衍生物的抑菌活性。[方法]本研究以7⁃氯⁃5⁃(氯甲基)吡唑并[1,5⁃a]嘧啶⁃3⁃碳腈为原料,通过对其5位和7位结构进行改造,设计并合成了17个新型吡唑并[1,5⁃a]嘧啶⁃3⁃碳腈类衍生物,其结构经^(1)H NMR、^(13)C NMR及MS(ESI)表征,采用牛津杯法检测了17个化合物对发根农杆菌的抑制效果。[结果]所得17个化合物结构正确;通过对比化合物1~5,7a和7b对发根农杆菌的抑制效果发现,化合物7a和7b的抑菌效果较好,在12 mmol·L^(-1)的浓度下抑菌圈大小分别为32、21 mm;在此基础上对化合物7a和7b的结构进行修饰得到11个化合物8a~8k,抑菌试验结果显示化合物8a~8k中,多数化合物对发根农杆菌的抑制效果良好,并且随着化合物浓度增大,抑菌效果明显增强,呈现出了浓度依赖性,在浓度为12 mmol·L^(-1)时的抑菌效果最好。其中,化合物8f的抑菌效果最好,抑菌圈直径达到了42.7 mm。[结论]说明所合成的吡唑并[1,5⁃a]嘧啶⁃3⁃碳腈类化合物的抗菌活性与7位和5位取代基有关,当7位氨基连有3⁃氰基⁃4⁃氟苯基或3⁃乙炔基苯基,5位连有(哌啶基)哌啶时,化合物对发根农杆菌的抑菌效果最好,这为进一步研究抗菌谱更广、抗菌活性更高的新型吡唑并[1,5⁃a]嘧啶⁃3⁃碳腈类化合物提供一定的参考。

摘要： 丹参是我国传统的大宗药材,广泛用于治疗心脑血管疾病。转基因技术作为基因功能研究和转基因育种的重要手段在丰富和优化丹参种质资源方面取得了显著成效。通过利用转基因技术中常用的农杆菌介导法来转入外源基因以及探索丹参有效成分合成代谢相关基因功能,以期获得高产、高抗丹参植株的方法已较为成熟,目前研究工作主要集中于不同遗传转化体系的建立和优化。本文就农杆菌介导的丹参遗传转化的转化原理、影响因素和研究现状三方面进行详细综述,以期为今后丹参基因功能研究和新品种培育提供参考。

摘要： 以茶树'福云6号'和'铁观音'成熟种子下胚轴、未成熟种子下胚轴和愈伤组织为材料,以发状根诱导率为指标,探究菌液浓度、农杆菌菌株、外植体类型和预培养时间对发状根诱导的影响.结果表明:(1)菌液浓度OD600在0.4～1.2范围内,'福云6号'成熟种子下胚轴发状根诱导率先升高后降低,ATCC15834在OD 600为0.6时发状根诱导率最高为23.96％,A4和K599在OD 600为0.8时,发状根诱导率最高,分别为10.51％和13.11％.(2)3种发根农杆菌致根能力不同,ATCC15834侵染力最强,致根能力大小依次为ATCC15834>K599>A4.(3)发状根诱导率与外植体有关,茶树成熟种子下胚轴可被诱导产生发状根,诱导率'福云6号'大于'铁观音',未成熟种子下胚轴和愈伤组织难以产生发状根.(4)不经预培养和预培养时间为1～2 d的愈伤组织易褐变,无法产生发状根;预培养3 d的愈伤组织经侵染可产生发状根,诱导率为1.85％('福云6号')和0.59％('铁观音').(5)PCR琼脂糖凝胶电泳检测和GUS组织化学染色证实GUS基因已被整合进'福云6号'和'铁观音'愈伤组织和成熟种子下胚轴发状根基因组中并表达.研究发现,发根农杆菌ATCC15834在OD 600为0.6时,对茶树'福云6号'成熟种子下胚轴发状根诱导率最高.该研究结果对改进发根农杆菌介导的茶树遗传转化系统提供理论依据,对茶树高效遗传转化体系的优化和新型受体的开发具有重要意义.

摘要： 作为一种基因编辑的新技术,CRISPR/Cas系统已被广泛应用于各种生物的基因工程中.但CRISPR/Cas9基因编辑系统还存在着一定的脱靶现象,确定基因编辑靶点选择的可行性可提高基因编辑效率.本研究选用大豆GmCO基因为靶标,使用CRISPR/Cas9基因编辑系统来构建靶点的基因敲除载体,并且利用发根农杆菌K599菌株对大豆子叶进行侵染,再通过植物组织培养的方法促使大豆外植体长出不定根,通过不定根检测发现在靶点2处出现了碱基的缺失,说明成功实现了对大豆目标基因的编辑.此方法操作简单,周期短,实现了对大豆中选择靶点的可行性的快速鉴定,为研究大豆的GmCO基因功能和遗传改良方面提供了新的技术支持.

摘要： 为建立虎杖高效遗传转化体系,用携带有植物表达载体pCAMBIA1301的发根农杆菌ATCC15834侵染虎杖无菌苗获得毛状根.对影响虎杖毛状根诱导的因素(如外植体种类、农杆菌活力、培养基种类、超声波辅助时间)进行优化,以获得最佳培养条件;通过潮霉素筛选阳性毛状根,以确定最佳潮霉素浓度.结果表明:以叶片为外植体、1/2MS为培养基、菌液OD600=0.8、超声波辅助5 s时,虎杖遗传转化毛状根效果最佳;筛选出的毛状根经GUS染色和PCR分子鉴定,该方法的阳性转化率为92％.该研究优化了虎杖毛状根的培养条件,为后期试验探究建立了更加高效的虎杖转基因体系.

摘要： 发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)可高效诱导转化大部分双子叶植物与部分单子叶植物.通过毛状根建立的遗传转化体系为研究植物基因功能提供了重要平台,被广泛的应用于非模式植株基因功能的研究.建立发根农杆菌介导的光皮桦(Betula luminifera)毛状根高频诱导转化体系,是实现基因功能验证和表达研究的有效方法.发根农杆菌可高效诱导转化大部分双子叶植物与部分单子叶植物,本研究使用7种发根农杆菌分别侵染光皮桦叶片,筛选后发现农杆菌ArQual的发根诱导率最高(69％),且验证得出光皮桦毛状根诱导的最佳体系为:叶片在1/2 MS培养基中预培养2 d,侵染20 min,共培养乙酰丁香酮(acetosyringone,AS)浓度为400μmol/L,抑菌培养头孢噻肟钠(cefotaxime sodium,Cefo)浓度为400 mg/L.此外,不同外源载体对发根诱导率的影响不显著.基于以上体系,将含β-葡萄糖苷酸酶基因(β-glucuronidase,GUS)的pCAMBIA13011载体与含绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的pGWB5载体电转入发根农杆菌ArQual,成功诱导了光皮桦叶片产生转基因毛状根,转化率为36.4％.为验证扩大遗传转化体系的使用范围,本研究通过对光皮桦种子苗下胚轴(短周期培养)和茎段(长周期培养)进行了转化.转化30 d后对毛状根进行GUS染色、荧光体式显微镜与PCR检测,结果显示GUS与GFP基因在毛状根中成功转化并表达,实现了外源基因在光皮桦不同组织部位产生的毛状根中表达的研究目标.本研究初步建立了光皮桦毛状根高频诱导体系,转化率高、周期短,可以对木本植物基因的功能与表达进行快速验证.

摘要： 毛状根具有生长速度快、激素自主性和遗传稳定性等特点，已成为获得植物次生代谢产物的重要途径。本实验利用发根农杆菌ATCC15834和C58C1诱导广藿香外植体产生毛状根，结果表明：在预配养时间为2d，乙酰丁香酮浓度为15mg·L-1，侵染时间为25min，共培养时间为2d的条件下，发根农杆菌ATCC15834和C58C1诱导率均达到最高，分别为83.3％和80.5％。PCR扩增结果证实，发根农杆菌Ri质粒的T-DNA部分已在广藿香毛状根的基因组中整合及表达，说明广藿香毛状根已经被成功诱导。

摘要： 利用发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)转化药用植物得到的毛状根(hairy roots)具有遗传性稳定、生长迅速,合成能力强等优点,近些年来,它已被广泛应用于植物次生代谢产物生产、品种改良和特种植物栽培等领域,解决了天然药用植物资源短缺,有效成分含量低等问题.本文介绍了毛状根诱导方法及机理,并综述了农杆菌类型、外植体的部位、外植体的放置方式以及外植体的处理方式对毛状根诱导率的影响以及毛状根在转基因植物以及差异表达功能基因克隆方面的应用情况.随着毛状根培养技术的不断优化和成熟,它将在中草药现代化发展中起到更加重要的作用.

摘要： 三分三为我国特有的一种产托品烷生物碱的茄科多年生草本濒危药用植物。本研究以三分三为实验材料，采用现代生物技术构建了植株再生体系，并以此为基础建立了发根农杆菌介导的三分三遗传转化技术，为利用基因工程技术对三分三进行遗传改良奠定了基础。

摘要： 阐述了发根农杆菌的性质及Ri质粒的功能,介绍了发根农杆菌的转化及影响转化率的因素,描述了转基因植株的鉴定方法.分析了发根在线虫研究中的应用,包括无菌线虫的繁殖,植物根系线虫活动的观察,线虫抗性品种的检测及其在RNA干扰体系的应用.

摘要： 利用发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)诱导药用植物产生的毛状根具有生长迅速,合成能力强和遗传性稳定等优点,已成为一种新的培养系统。本文就影响发根农杆菌介导的药用植物遗传转化的因素作一概述。

摘要： 利用野生型15834，A4及LBA9402菌株分别感染怀牛膝幼叶切块、茎段。诱导产生了毛状根，其中发根农杆菌15834菌株对叶外植体的诱导率最高，达83％;A4菌株的次之，LBA9402菌株的最低。通过对毛状根愈伤组织诱导及芽分化所采用的培养条件筛选，结果表明：其培养条件与怀牛膝组培再生的培养条件相同，在一定程度上克服了以往组织培养再生体系与遗传转化体系不能很好匹配的障碍，并建立了农杆菌介导的怀牛膝高效遗传转化体系。在此基础上，进一步测定了怀牛膝毛状根中齐墩果酸的含量，并与栽培一年生怀牛膝根中齐墩果酸量进行了比较。结果表明怀牛膝毛状根中齐墩果酸含量可以达到25.59mg/g，高于栽培一年生牛膝根中齐墩果酸量(14.73mg/g)。

摘要： 利用发根农杆菌ATCC15834和A4,采用针刺幼茎法和外植体共培养法侵染乌拉尔甘草活体幼苗、下胚轴和子叶,成功获得了乌拉尔甘草毛状根,建立了乌拉尔甘草毛状根诱导培养体系.发根农杆菌ATCC15834最适宜甘草毛状根的诱导,株龄14d的乌拉尔甘草幼苗为最适外植体,工程菌液OD600为0.5～0.6时,添加乙酰丁香酮100mg/L时毛状根诱导率为未添加乙酰丁香酮2.43倍;针刺幼茎法毛状根诱导率达79.2％,共培养法诱导率达34.7％,不添加激素的1/2Ms培养基为最适合毛状根增殖培养的液体培养基,最适蔗糖浓度为40.0g/L,25d毛状根增殖率达到19.3倍.

摘要： 花生(Araehis hypogaea L.)是世界上重要的油料作物，也是主要的优质植物蛋白的来源。我国花生产量占世界花生总产量的30％，居世界首位，但每公顷产量比美国低4500千克。由于受地下害虫、细菌及真菌性病害等的危害，花生产量受到严重影响，仅蛴螬就可造成减产20％～40％。rn 花生再生体系周期长、遗传转化效率低等问题制约了通过分子育种技术改良花生品质及相关功能基因的研究。

摘要： 目的：研究紫锥菊毛状根的诱导及活性成分的产生。方法：用发根农杆菌Agrobacterium rhizogenes A4，R1601，1025感染紫锥菊外植体。结果：紫锥菊外植体被3种发根农杆菌感染后，外植体伤口处均能陆续分化生长出白色的毛状根。A4菌株的诱导效果明显好于其他两种菌株，A4对紫锥菊叶片的毛状根诱导率高达66.7％。紫锥菊毛状根的最佳诱导条件为：发根农杆菌A4，感染时间12min，菌液OD600值0.8，共培养温度24°C，共培养时间2d，预培养时间2d，培养基pH值6.0，此条件下紫锥菊毛状根的平均诱导率达到54％；对诱导出的毛状根进行PCR检测，证明其确为已转化的毛状根。检测得到紫锥菊毛状根中的多糖含量为15.54％，总酚的含量为2.491％。结论：本实验所建立的紫锥菊毛状根培养系统，为研究紫锥菊毛状根大量培养生产活性成分奠定了基础。

摘要： 目的：利用四种发根农杆菌R1，1601，1025，1000诱导药用植物罗勒产生毛状根，建立毛状根培养体系。方法：利用共培养法研究不同外植体、不同菌株、不同预培养时间、不同感染时间以及不同外源激素等条件对转化频率的影响。结果：利用发根农杆菌1025，预培养2d的叶片为转化材料，感染6～8min，加入O.1mg/L NAA转化率最高。经过基本培养基的筛选和毛状根生长动力学的考察，确立了罗勒毛状根在1/2MS培养基中的最佳继代时间为20d左右。结论：罗勒毛状根离体培养的建立为进一步进行药用活性成分的工业化生产奠定了基础。

摘要： 本发明公开了发根农杆菌转化植物发根培养植物寄生线虫的方法，在无菌条件下，利用不加外源激素的培养基上使发根农杆菌转化植物发根快速生长，为植物寄生线虫生长、发育和繁殖提供足够的营养，完成线虫的连续培养。通过此培养方法，能够得到大量无菌线虫，可以直接用于接种和研究应用。

摘要： 本发明涉及一种发根农杆菌介导苦瓜发根高频诱导及遗传转化的方法，选用R1000发根农杆菌菌株感染苗龄10-20d的苦瓜试管苗的茎段或子叶盘在含IBA5.0的MS培养基中共培养1-2d得到共培养的外植体，然后在含500mgL

摘要： 本发明涉及一种发根农杆菌介导茶树发根高频诱导与遗传转化的方法，将自行选育的抗酚发根农杆菌菌株的单菌落，在含卡那霉素的YEB培养液中培养得经活化的菌液；选用含多酚类含量在25％以下的的茶树品种的器官作为外植体，对外植体进行微伤预处理；对微伤预处理后的外植体在经活化的菌液中浸染；将浸染过的外植体经过共培养和脱菌培养获得茶树发根。本发明使发根农杆菌介导茶树进行遗传转化的发根频率从国内外研究的30％左右提高到近60％。这为发根农杆菌介导的遗传转化应用于茶树品种改良以及利用茶树发根培养生物合成儿茶素等次生代谢产物提供了一条有效途径。

摘要： 本发明公开了发根农杆菌转化植物发根培养植物寄生线虫的方法，在无菌条件下，利用不加外源激素的培养基上使发根农杆菌转化植物发根快速生长，为植物寄生线虫生长、发育和繁殖提供足够的营养，完成线虫的连续培养。通过此培养方法，能够得到大量无菌线虫，可以直接用于接种和研究应用。

摘要： 本发明公开了一种发根农杆菌A4菌株诱导人参根外植体产生人参发根及人参皂甙的生产方法,它包括:取人参根外植体,将发根农杆菌A4菌液直接加到根的切面上,黑暗培养,切下浸染部位长出的发根,杀菌;将诱导出的除菌发根系在不含激素的MS液体培养基中培养,大量繁殖发根系,经继代建立离体发根无性系;大量培养人参发根;从人参发根提取人参皂甙。本方法简便、实用、生长速率高,是一种大规模生产人参皂甙的新方法。

摘要： 本发明属于农药污染治理技术领域，涉及一株发根农杆菌菌株AT13及其应用。本发明从农田土壤中分离筛选获得一株发根农杆菌菌株AT13，该菌株于2021年9月23日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：61943。该菌株对莠去津、特丁津等三嗪类农药的生物降解效果显著，降解效率高，降解性能稳定，在培养24h后对100mg/L的莠去津降解率达99％以上，并可耐受较高浓度三嗪类农药，可用于莠去津等三嗪类除草剂污染的水体、土壤等污染环境的生物修复，本发明为打破现有治理农药残留污染瓶颈提供了新的开发途径，丰富了农药降解菌的种质资源库，应用前景广阔。

摘要： 本发明公开了一种利用发根农杆菌诱导红豆杉空中生根繁育的技术：1)制备发根农杆菌悬浮液；2)配制基质：取田间土壤﹕珍珠岩﹕营养土﹕蛭石﹕营养液混合配制为基质；3)选取曼地亚红豆杉健硕树种中1‑3年生枝条，用环割刀去除宽度3～6mm的树皮及维管束形成层；4)环割后立即用发根农杆菌悬浮液喷施/涂抹环割伤口处；5)用容器盛装基质并用发根农杆菌悬浮液喷湿基质表面后包裹环割伤口；6)剪掉处理枝上的新枝；7)将枝条扶正；8)根冒出基质5‑8cm时即可以剪取枝条种到田间。本发明诱导曼地亚红豆杉枝干生根(空中生根)，不仅能缩短人工繁育周期，更能为后续可持续、高效利用紫杉醇含量较高的根部奠定基础。

摘要： 本发明公开了一种发根农杆菌介导的获得转基因除虫菊毛状根的方法，属于植物组织培养技术领域，其技术方案要点是，步骤如下：S1、切下除虫菊组培苗叶片，用菌液侵染叶片；S2、滤出叶片，接种于MS基本培养基中，暗培养2天；S3、将叶片移至固体培养基Ⅰ中培养20天，形成叶片根；S4、将叶片根的根尖切下，放置在固体培养基Ⅱ上，根尖朝上，培养7天，获毛状根；S5、选取不具向地性的毛状根，将毛状根的根尖切下放置在固体培养基Ⅲ上，培养20天，获抗性根；S6、选取抗性根，切成多段水平放置在固体培养基Ⅳ上，然后进行继代培养。本发明主要用于获得转基因除虫菊毛状根，建立了高效迅速的除虫菊毛状根转化体系，能够为除虫菊的科研及育种工作提供有效技术支撑。

摘要： 本发明公开了一种植物高效启动子PAtGCS，该启动子的核苷酸序列是序列表1所示的核苷酸序列。研究表明将该启动子插入到pRdCas9载体中驱动Cas9基因表达，通过发根农杆菌介导的毛状根转化，在转基因毛状根中可以高效地进行基因编辑，两条染色体的基因位点同时发生突变比35S启动子驱动Cas9基因编辑载体的效率1.7‑8.3倍。

摘要： 本发明提供一株促进采后马铃薯块茎愈伤的发根农杆菌Agrobacterium rhizogenes，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No：24361。本发明所涉及的发根农杆菌Agrobacterium rhizogenes菌株，分离自愈伤的马铃薯组织，具有繁殖快、菌种容易收集、易于马铃薯块茎采后的处理、加速马铃薯块茎愈伤表皮封闭层(即次生周皮，次生周皮主要由木质素、聚酚软木脂和聚酯软木脂的细胞层组成)的生成速度等优点，从而降低了马铃薯块茎的重量损失速度和镰刀菌侵染病斑扩展程度。