阿魏酸酯酶

摘要： 本研究旨在筛选出体外预消化复合酶制剂的最佳作用条件,比较复合酶预消化前后饲粮的差异,为无抗饲粮的研发提供参考。试验选用蛋白酶、淀粉酶、非淀粉多糖(NSP)类酶(纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶和α-半乳糖苷酶)、葡萄糖氧化酶(GOD)、阿魏酸酯酶(FAE)和阿拉伯呋喃糖苷酶(AF)10种酶,组成复合酶制剂,根据酶的理化特性,探索酶的作用温度和时间对预消化仔猪饲粮的影响,应用扫描电镜和激光共聚焦拍照技术评定酶解前后饲粮的结构变化,并通过细菌生长曲线观察酶解预消化饲粮对肠道有害菌的影响。结果表明:1)与未添加酶相比,添加蛋白酶,在pH=3的缓冲液中预消化,50°C作用0.5 h时,氨基酸和小肽分子含量显著升高(P<0.05);添加淀粉酶和NSP酶,在pH=5的缓冲液中反应,预消化1.0 h后,二硝基水杨酸(DNS)法检测得到50°C时还原糖含量极显著升高(P<0.01),酶联免疫吸附试验(ELISA)检测发现50°C时部分抗营养因子含量也显著降低(P<0.05)。2)本试验分析木聚糖主链酶与其支链酶的协同作用,结果显示先添加AF和FAE,再添加木聚糖酶后酶解饲粮,还原糖的释放量比单独添加木聚糖酶提高了79.07%(P<0.01)。此外,再添加GOD,产生的葡萄糖酸含量为1.32μg/mL,并且降低了饲粮的pH。3)扫描电镜和罗丹明B染色结合激光共聚焦拍照检测发现,经过复合酶制剂预消化,饲粮的细胞壁损伤严重,完整结构遭到破坏。4)本试验选用从腹泻猪肠道中分离出的大肠杆菌和沙门氏菌来检验饲粮酶解产物的抑菌作用,结果表明酶解预消化后可以抑制大肠杆菌和沙门氏菌的生长。综上所述,酶制剂的最佳组合条件为:首先在pH=3、50°C下,加入蛋白酶,作用时间为0.5 h;接着上调pH为5,加入AF、FAE和GOD,40°C作用1.0 h;最后加入淀粉酶和NSP酶群50°C作用1.0 h。酶解后的饲粮,其可利用的营养物质含量提高,抗营养因子含量降低,并可以抑制有害菌的生长。

摘要： 基于高效液相色谱法测定产物阿魏酸含量的方法,建立了阿魏酸酯酶酶活力的测定方法。实验采用ZORBAX Eclipse Plus C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,Agilent),以甲醇∶1%乙酸=70∶30作为流动相,等度洗脱(柱温35°C,流速1.0 ml/min,进样量10μl),在254 nm下测定阿魏酸含量。结果表明,该法测定酶反应产物阿魏酸含量的检测限为69.15μg/L,定量限为234.78μg/L,且在10~100 mg/L范围内呈良好的线性关系,R^(2)=0.9999,重复性RSD小于1%,加标收回率为99.25%。在此基础上进一步确定阿魏酸酯酶酶活力测定时的酶反应终止液为30%的乙酸溶液。当阿魏酸生成量在15~25 mg/L时,酶反应处于动力学上的线性区。试验待测酶样的最适温度为55°C,最适pH5.0。经检验,该酶活力检测方法的精密度RSD小于3.0%,达到酶活力检测要求。

摘要： 为提高白酒酿造过程中阿魏酸的含量,该研究从浓香型白酒大曲中分离筛选产阿魏酸酯酶的菌株,通过形态观察、生理生化试验及分子生物学技术对其进行菌种鉴定,并以阿魏酸酯酶活力为评价指标,采用单因素试验及响应面试验对其发酵条件进行优化。结果表明,筛选得到一株产阿魏酸酯酶的菌株,编号为M2。经鉴定,其为一株蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus),该菌株产阿魏酸酯酶的最佳发酵条件为接种量5%,发酵温度30°C,初始pH值5.5,发酵时间72 h。在此优化条件下,阿魏酸酯酶活力为33.89 U/L,比优化前提高10.03%,具有较强的产阿魏酸酯酶能力。

摘要： 阿魏酸酯酶(FAE)是植物粗纤维降解中重要的辅助酶,它可以协助半纤维素酶和纤维素酶对粗纤维底物进行降解。研究FAE的晶体结构、作用机理及与其他酶的相互作用,对秸秆等非粮饲料资源的高效利用具有重要意义。本文对FAE的分类和来源、作用机理及其与其他木质纤维素酶之间的协同作用进行了综述,并提出了FAE在饲料加工中的应用策略,为其资源开发与生产应用提供参考。

摘要： 为了进一步降解水稻秸秆青贮饲料中的纤维,提高青贮饲料品质,从湖羊瘤胃液中筛选产阿魏酸酯酶的乳酸菌,鉴定菌株特性,并将其接种到水稻秸秆青贮中,研究其对青贮水稻秸秆纤维降解率和化学成分的影响。结果表明,从湖羊瘤胃液中共筛选出2株高产阿魏酸酯酶的乳酸菌,菌株SR1与鼠李糖乳杆菌的同源性最高,SR2与香肠乳杆菌的同源性最高;SR2的产酸速度比SR1快,培养24 h后培养液的pH值为3.83;2株乳酸菌在pH值4.0~7.0、温度25~37°C、3.0%NaCl条件下的生长状况良好,都能利用多种糖源物质。与CK相比,接种菌株SR2组的水稻秸秆青贮饲料中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维和纤维素含量均显著降低(P<0.05),而接种菌株SR1对水稻秸秆青贮饲料纤维含量的影响不大;接种菌株SR2组的水稻秸秆青贮饲料pH值、铵态氮含量最低,乳酸含量最高。综上,香肠乳杆菌SR2可作为水稻秸秆青贮的备选菌株。

摘要： 阿魏酸酯酶(ferulic acid esterase,FAE)广泛存在于自然界,属于羧酸酯水解酶的一个亚类.经过一系列反应,其能将天然半纤维素和果胶中的酚酸、阿魏酸(ferulic acid,FA)及对香豆酸等释放出来,是一种具有应用潜力的酶.因此,各行业通过相关科学技术来利用FAE,以获得如人畜食品、纸浆和纸张、燃料乙醇和药物制剂等产品.该文对阿魏酸酯酶的酶学特性、生产研究、结构解析及生物技术中的潜在应用等方面进行综述,旨在工业需求的推动下,加快阿魏酸酯酶的科学研究发现,进行知识转移,对该类物质实现高效利用,并致力于植物生物质转化和生产高附加值分子的生物合成.

摘要： 本研究分别从浓香型白酒的大曲、窖泥和糟醅中筛选出一株产阿魏酸酯酶的细菌,并对其生理生化特性进行了研究.通过平板划线对目的菌株进行了分离纯化,再根据形态特征和16S rRNA 同源序列分析对分离菌株进行鉴定.结果表明,所分离筛选的产阿魏酸酯酶的菌株为考氏科萨克氏菌(Kosakonia cowani),产阿魏酸酶活为25.85 U/L.生物学特性为:菌株在16 h 时生物量达到最大,最适生长温度为32°C,最适生长培养基初始pH 为5,在NaCl 浓度1％～9％、酒精浓度1％～4％范围内可以正常生长.

摘要： 以考氏科萨克氏菌(Kosakonia cowanii)为试验菌株,对其产酶条件、酶活性质以及初步应用进行研究.结果表明,最佳产酶条件为装液量90 mL/250 mL、培养基初始pH值为5.5、接种量4％、温度34 °C.在此优化条件下,酶活为28.27 U/L,比优化前提高了20.92％.该酶最适反应温度、pH值分别为50°C、5.6,在30～40 °C及pH 5.0～6.8范围内稳定性良好.将该菌株应用到麸皮、大曲和糟醅中,麸皮中发酵至第7天时阿魏酸含量比最初提高了22.42％,糟醅中阿魏酸含量呈先增后减趋势,大曲中阿魏酸含量呈递增趋势,表明添加菌株有利于释放麸皮、糟醅和大曲中的阿魏酸.

摘要： 天然阿魏酸酯酶存在酶活较低,难以工业化利用等缺点.本文从阿魏酸酯酶基因在不同宿主中的异源表达,不同来源的阿魏酸酯酶菌种筛选,基因工程育种,等进行概述,为高产阿魏酸酯酶菌种筛选,工程菌构建,提高酶活等提高方向.

摘要： 通过向黑曲霉ZJUQH液体深层发酵培养基中添加不同质量浓度的滑石粉、氧化铝和高岭土,探究添加微颗粒对黑曲霉产阿魏酸酯酶酶活的影响。结果表明:添加微颗粒提高了黑曲霉产阿魏酸酯酶的酶活,其中添加0.5 g/L滑石粉、氧化铝和高岭土使黑曲霉产阿魏酸酯酶的比酶活达到最高。该研究提供了一种优化和设计高产量丝状真菌形态的新途径,同时对黑曲霉ZJUQH产阿魏酸酯酶酶活的提高具有很大的价值。

摘要： 本研究用平板法从热带牧草青贮饲料中筛选出两株阿魏酸酯酶活性较强的乳酸菌W16及H22,经过生理生化及16S rDNA序列同源性分析,这两株乳酸菌分别被鉴定为戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)及发酵乳杆菌(Lactobacillus fer-menlum).

摘要： 从黄酒麦曲中初筛出9株具备产阿魏酸酯酶能力的菌株,对初筛得到的株菌用麦麸培养基复筛,进一步筛选出高阿魏酸酯酶活性的菌株,对该菌株进行形态观察、rDNA ITS1-5.8S-ITS2序列比对,系统发育树构建分析,鉴定为枝状枝孢霉菌株.菌株在28°C、pH6.5、150r/min培养72h,达到生长最旺期.菌株麦麸发酵培养基产阿魏酸的最适温度30°C、最适pH4.8、最适接种量4％、最适麦麸添加量5％.目前国内外还未见枝孢霉产阿魏酸酯酶的相关报道,这对产阿魏酸酯酶微生物研究具有重要意义,并对枝孢霉在阿魏酸生产中的应用提供理论基础.

摘要： 阿魏酸(Ferulic acid,简称FA)化学名称为4-羟基-3-甲氧基肉桂酸,为植物界普遍存在的一种酚酸,是川芎、当归、阿魏等中药材的有效成分之一,具有抗氧化、降血脂、抗血栓、抗菌消炎、抗突变、防癌和防冠心病等生理功能,已经被广泛应用于医药、化妆品、保健品和食品添加剂等领域.本研究以麦麸和玉米麸为对象，采用黑曲霉（Aspergillus niger）固体发酵的方法制备阿魏酸酯酶(feruloyl esterase)，并结合来源于Trichoderma longibrachiatum的木聚糖酶X1对麦麸和玉米麸进行水解，从而提取出植物细胞壁中的阿魏酸。此法既有利于减少环境污染，又能对资源进行充分利用，开发出具有保健功能的产品。本研究自制的黑曲霉阿魏酸酯酶具有良好的生理活性，适用于麦麸和玉米麸皮中阿魏酸的提取工艺，结合原料预处理及酶解条件的优化，获得了植物源阿魏酸的酶法制备技术，这为合理高效的利用农林废弃物，提升产品附加值提供了新的方向。

摘要： 本研究采用黑曲霉固体发酵法制备混合酶(阿拉伯木聚糖酶和阿魏酸酯酶),确定了最佳发酵工艺.由时间温度曲线得到最佳时间温度组合:72h,36°C;采用四因素三水平正交试验得出最佳的培养基组成:麦麸和蔗渣比为2:1,添加硫酸铵量为干重的4％,硫酸镁量为干重的2.33％,固液比为1:1时,接种量增加对产酶有负影响,但影响不大.

摘要： 本文用截留相对分子质量2万的中空纤维膜超滤阿魏酸酯酶与阿拉伯木聚糖酶的混合酶制剂,研究了超滤进口压力、超滤温度对膜通量和酶活的影响,确定了进口压力0.1～0.15MPa,超滤温度25～30°C为最佳操作工艺参数.酶的浓缩倍数可达7倍以上,使酶制剂更加方便保存.采用二次超滤的方法可以去除浓缩酶液中90％的低聚糖和阿魏酸等小分子物质,解决了酶制剂使用中的产物抑制问题.

摘要： 本发明属于生物工程技术领域，提供了一株阿魏酸酯酶高产菌株及利用该菌株进行液体发酵制备阿魏酸酯酶的方法；本发明所涉及的阿魏酸酯酶生产菌株为丝状真菌，经16SrDNA鉴定为一株绿色木霉（Trichodermaviride），菌株代码为JBSH-001，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC No.5612。可利用该菌株液体发酵生产阿魏酸酯酶，该方法发酵所得阿魏酸酯酶酶活可达200mU/ml以上,纯化后的阿魏酸酯酶酶活可达50000mU/g以上。

摘要： 本发明公开了一种阿魏酸酯酶及其在生产阿魏酸中的应用，属于微生物技术领域。本发明提供了一种氨基酸序列如SEQIDNO.2所示的阿魏酸酯酶，此阿魏酸酯酶的比酶活高达519U/g，因此，此阿魏酸酯酶在生产阿魏酸中具有巨大的应用前景。

摘要： 本发明属于生物工程技术领域，提供了一株阿魏酸酯酶高产菌株及利用该菌株进行液体发酵制备阿魏酸酯酶的方法；本发明所涉及的阿魏酸酯酶生产菌株为丝状真菌，经16SrDNA鉴定为一株绿色木霉（Trichodermaviride），菌株代码为JBSH-001，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCCNo.5612。可利用该菌株液体发酵生产阿魏酸酯酶，该方法发酵所得阿魏酸酯酶酶活可达200mU/ml以上,纯化后的阿魏酸酯酶酶活可达50000mU/g以上。

摘要： 本发明公开了一种阿魏酸酯酶基因asfae、该基因编码的AsFAE蛋白、含该基因的重组表达载体和重组基因工程菌及其应用，所述基因的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示。本发明通过基因重组技术获得的阿魏酸酯酶可在体外高效表达且稳定性好，能够有效水解阿魏酸甲酯，芥子酸甲酯和香豆酸甲酯，产生阿魏酸等功能性酚酸。本发明的新型阿魏酸酯酶，在发掘和利用肠道菌群编码的阿魏酸酯酶基因资源方面具有科学价值，同时为实现该酶的工业化生产奠定基础，在利用生物质生产的阿魏酸等酚酸在饲料、造纸、食品、制药等领域，也具有广泛的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种阿魏酸酯酶及其在生产阿魏酸中的应用，属于微生物技术领域。本发明提供了一种氨基酸序列如SEQIDNO.2所示的阿魏酸酯酶，此阿魏酸酯酶的比酶活高达519U/g，因此，此阿魏酸酯酶在生产阿魏酸中具有巨大的应用前景。

摘要： 本发明涉及具有阿魏酸酯酶活性的分离的多肽，以及编码所述多肽的多核苷酸。本发明亦涉及包含所述多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞，以及产生和使用所述多肽的方法。

摘要： 本发明涉及具有阿魏酸酯酶活性的分离的多肽和编码所述多肽的分离的多核苷酸。本发明还涉及包含所述多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞，以及用于制备和使用所述多肽的方法。

摘要： 本发明公开了一种利用具有pH响应型的聚合物固定化阿魏酸酯酶的方法，包括酶的固定化、固定化酶条件优化、酶活检测、固定化酶pH优化、交联剂含量优化、交联时间优化、固定化温度优化、最适pH值测定、pH稳定性测定、最适反应温度测定、热稳定性测定、可重复使用性测定；将阿魏酸酯酶固定化在Eudragit L‑100上，与游离阿魏酸酯酶相比，使用本发明制备的固定化酶具有更高的热稳定性和pH稳定性。

摘要： 本发明公开了一种阿魏酸酯酶及其突变体N.9‑98与应用。所述的阿魏酸酯酶具有如SEQ ID No.3所示的氨基酸序列，其性质稳定，反应pH为6‑8，反应温度为37‑54°C。本发明在所述的阿魏酸酯酶的氨基酸序列的基础上分别通过增加阿魏酸酯酶中二硫键的数量、改变其碳水化合物结合模块的侧链基团以及改变催化结构域电荷，得到了阿魏酸酯酶突变体N.9‑98，与原始阿魏酸酯酶相比，此突变体的比酶活均得到明显提高。本发明得到的阿魏酸酯酶以及突变体性质稳定，有助于阿魏酸酯酶的工业化应用。

摘要： 本发明公开了一种阿魏酸酯酶及其突变体N.7‑16与应用。所述的阿魏酸酯酶具有如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列，其性质稳定，反应pH为6‑8，反应温度为37‑54°C。本发明在所述的阿魏酸酯酶的氨基酸序列的基础上分别通过增加阿魏酸酯酶中二硫键的数量、改变其碳水化合物结合模块的侧链基团以及改变催化结构域电荷，得到了阿魏酸酯酶突变体N.7‑16，与原始阿魏酸酯酶相比，此突变体的比酶活均得到明显提高。本发明得到的阿魏酸酯酶以及突变体性质稳定，有助于阿魏酸酯酶的工业化应用。