酶联免疫分析法

摘要： 目的分析酶联免疫分析法检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)常见影响因素。方法回顾性分析汝阳县中医院2019年10月至2021年5月接收的慢性乙型肝炎患者44例血清样本作为研究对象。抽取患者肘静脉血5 mL,离心处理后留下血清,将44份血清平均分成四等份,计为A、B、C、D,使用酶联免疫分析法检测HBsAg。比较不同时间HBsAg阳性血清样本滴度OD值、不同温度HBsAg阳性血清样本滴度OD值、不同洗扳HBsAg阳性血清样本滴度OD值和三种不同酶标记抗体加入量HBsAg阳性血清样本滴度OD值。结果不同时间点5 min、10 min、15 min、20 min、25 min、30 min、35 min、40 min平均OD值比较差异有统计学意义(P<0.05)。其中40 min平均OD值(0.71±0.02)最高,5 min平均OD值(0.41±0.02)最低。37°C下HBsAg阳性血清样本滴度OD值高于12°C(P<0.05)。自来水HBsAg阳性血清样本OD值高于试剂盒洗液(P<0.05)。40μL、50μL、60μL酶标记抗体加入量的OD值比较差异有统计学意义(P<0.05),其中50μL酶标记抗体加入量OD值(0.77±0.19)最高,40μL酶标记抗体加入量OD值(0.72±0.12)最低。结论时间、洗板、温度是酶联免疫分析法检测乙肝表面抗原常见影响因素,要准确处理。

摘要： 生鲜食品的检验技术关系到我国的食品安全问题,现阶段还需要加强并完善相应的检测技术。微生物酶技术中的酶联免疫法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA)可以用于食品中拟除虫菊酯类农药的残留检测。试验利用间接竞争ELISA技术对拟除虫菊酯类农药及其代谢产物的检测,并对该方法进行了优化。优化后的拟除虫菊酯类检测条件:离子强度10 mmol/L,pH值7.4,10%甲醇,标准曲线的线性范围2.65~28.55 ng/mL,灵敏度为8.69~344.97 ng/mL;优化后的代谢产物检测条件:包被浓度125 ng/mL,抗体稀释倍数1︰2000,pH值6.6,吐温浓度0.005%,离子浓度40 mmol/L,S-HPR稀释倍数1︰4000,标准曲线的线性范围为0.37~7.40 ng/mL,检测限为0.15 ng/mL。结果表明,试验建立的间接竞争ELISA可以有效地进行多种拟除虫菊酯类农药及其代谢产物的残留检测,且准确性和灵敏度高。

摘要： 目的 基于纳米金棒刻蚀的多色可视化传感器快速检测乌头碱.方法 采用H2O2-辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)-3,3',5,5'-四甲基联苯胺(3,3',5,5'-tetramethyl benzidine,TMB)体系的氧化产物TMB2+刻蚀纳米金棒,产生不同颜色的溶液,并将其与酶联免疫吸附测定法联用,构建一种酶联免疫多色可视化传感器应用于乌头碱快速半定量分析.结果 在最优条件下,纳米金棒溶液的局域表面等离子体共振吸收峰的位移与乌头碱浓度在5～35 ng/L范围内呈现较好的线性关系,检出限为1.67 ng/L.结论 该方法具有快速、选择性好、灵敏度高、裸眼可视化半定量等优点,对乌头碱的快速检测有一定的实际应用价值.

摘要： 氟喹诺酮类药物(FQS)是第3代喹诺酮类抗生素,具有良好的生物利用度和耐受性,不仅对革兰氏阳性菌和阴性菌有杀菌作用,还具有抗真菌和抗病毒活性,因此被广泛应用于治疗畜牧动物养殖过程中的细菌性感染.但当人类过多食用含有FQS残留的食品后,将会损害身体多个系统并引起细菌耐药性,因此建立灵敏度高、简便的检测方法十分必要.本文综述了FQS残留的检测标准和常用的检测方法及优缺点,酶联免疫分析法(ELISA)具有灵敏度高、操作简便等优势,预测ELISA法在今后FQS残留检测中发挥重要作用.

摘要： 目的 了解西安地区某三甲医院221名健康体检人群肠道病毒71型(EV71)隐性感染情况,为EV71感染预防提供依据.方法 以2018年3月至6月于西安交通大学第二附属医院进行体检的健康人群为研究对象,共7个年龄组221名,其中0～5岁37人,6～10岁26人,11～20岁38人,21～30岁30人,31～40岁30人,41～50岁30人,51～60岁30人.采用酶联免疫分析(ELISA)方法检测外周血EV71-IgM.结果 221名健康体检者EV71-IgM隐性感染率8.14％(18/221),其中男性EV71-IgM隐性感染率为8.15％(11/135),与女性的8.14％(7/86)比较,差异无统计学意义(χ2=0.000,P=0.998);各年龄段隐性感染率比较,差异无统计学意义(χ2=9.641,P=0.095).0～5岁隐性感染率为8.11％(3/37),11～20岁隐性感染率最高,为21.05％(8/38),21～50岁隐性感染率稳定在6.67％(2/30).结论 221名健康体检人群存在中等水平的EV71隐性感染,这可能成为EV71流行的重要传染源,建议针对3岁以下易感人群按时接种EV71灭活疫苗,更好地预防EV71流行.

摘要： 杀菌剂在农业领域的长期滥用,造成了其在农产品中的残留超标,而长期摄入这种超标食品会对人体健康造成很大危害,因此需要对农产品中的杀菌剂残留进行分析检测.本文总结了这类杀菌剂半抗原的设计与合成过程,综述了检测杀菌剂残留的ELSA、胶体金免疫层析法、时间分辨荧光免疫分析法和免疫传感器,并对检测技术的存在问题及发展趋势进行了讨论.

摘要： [目的]研究牛初乳冻干粉(LBC)及其产品中表皮生长因子(EGF)、转化生长因子-α(TGF-α)和类胰岛素生长因子-1(IGF-1)含量的变化.[方法]采用冷冻干燥工艺制备0～7 d的LBC和常乳冻干粉(LM),采用酶联免疫分析法测定EGF、TGF-α和IGF-1的含量.[结果]2 d内牛初乳冻干后平均干物质含量为200 g/L.第1天LBC中EGF(7.0 ng/g)、TGF-α(16.8 ng/g)和IGF-1(3.36μg/g)的含量最高,此后快速下降,第7天接近LM水平.第0～4天LBC中EGF、TGF-α和IGF-1的平均含量分别为5.6 ng/g、9.6 ng/g和2.42μg/g,分别为LM的7.0倍、13.7倍和6.1倍.3种牛初乳保健食品的EGF和TGF-α含量显著高于LM和2种市售奶粉.初乳素的EGF和TGF-α含量高于其他2种牛初乳保健食品.初乳素的IGF-1含量为1.11μg/g,极显著高于LM.[结论]研究可为牛初乳产品的进一步开发利用提供理论和试验依据.

摘要： 目的:制备肺炎衣原体(Chlamydia pneumonia,CP)IgG抗体检测试剂的国家参考品.方法:利用国内外9个厂家ELISA试剂和免疫印迹法试剂对候选血浆样本进行筛选和确认,确定肺炎衣原体检测试剂国家参考盘.通过5家试剂生产厂家的协作标定最终确定国家参考品的质量标准,用一种试剂盒对确定的参考品盘的均匀性和稳定性进行全面考察.结果:参考品由10份支阴性参考品、10份阳性参考品、5份最低检测限参考品和1份重复性参考品组成.质量标准为:阴性参考品符合率至少为9/10;阳性参考品符合率至少为9/10;检出下限样本稀释度不低于1∶4;连续检测重复性参考品10次,其A值的RSD不高于10.0％.该参考盘均匀性较好,-20°C长期保存稳定性较好,37°C保存影响其稳定性.结论:建立一套适用于ELISA方法的肺炎衣原体IgG抗体检测试剂用国家参考品,可用于该类试剂盒的质量评价.

摘要： 以4-氨基邻苯二甲酸为原料,通过酯化反应合成半抗原4-氨基邻苯二甲酸二丁酯,将合成的半抗原通过重氮化反应与钥孔血蓝蛋白(KLH)进行偶联制备免疫抗原,与牛血清白蛋白(BSA)进行偶联制备包被抗原.通过免疫新西兰大白兔获得邻苯二甲酸二丁酯抗血清,利用纯化获得的抗体和包被抗原建立邻苯二甲酸二丁酯间接竞争酶联免疫检测方法(ELISA).该方法的IC 50为40.68μg/L,最低检测限IC 15为1.98μg/L,方法对邻苯二甲酸二丁酯具有较好的特异性.经对白酒、牛奶、食用油样品进行检测,添加回收率为84.57％～102.40％,用气相色谱—质谱法(GC-MS)进行验证,两种方法均呈现良好的线性相关性(R 2=0.9908).研究建立的方法可以被应用于食品中塑化剂邻苯二甲酸二丁酯的快速检测.

摘要： 采用免疫亲和层析净化高效液相色谱法与酶联免疫分析法(ELISA)试剂盒免疫亲和净化柱对添加了特定的黄曲霉毒素B1标样的花生和玉米样品进行黄曲霉毒素B1检测分析。实验显示采用德国LCTech公司的AflaCLEAN免疫亲和净化柱高效液相色谱法对加标玉米样品的平均回收率为80-103%；对加标花生样品的平均回收率为90-103%。AflaREAD Fast黄曲霉毒素B1酶联免疫分析法试剂盒对同样加标玉米样品的回收率介于99-127%;对加标花生样品的回收率介于86-97%。此俩种方法回收率高，重新性好，准确性高，灵敏度高、特异性强等特点，并且操作简单、快速，是分析黄曲霉毒素十分理想的检测方法。

摘要： 展青霉素是由曲霉和青霉等真菌产生的一种次级代谢产物,酸性条件下较为稳定,广泛存在于各种霉变水果和青贮饲料中,具有致畸性,对人体的危害很大,可导致呼吸和泌尿等系统的损害,使神经麻痹、肺水肿、肾功能衰竭.乳及乳制品中展青霉素残留能够严重影响奶及奶制品的品质,特别是随食物链进入人体后,对人及动物均具有较强的毒性作用,对呼吸有妨害作用.本文利用间接竞争酶联免疫分析法(ELISA)对乳品中的展青霉素进行测定.从样品的处理、ELISA的实验检测等方面进行试验,得到相关系数为0.9993,IC50为0.74μg,标准品浓度为0～5.4μg,灵敏度为0.5μg.该法测定展青霉素简便,特异性高,灵敏度高,重复性好,适合用于检测乳品中的展青霉素.

摘要： 组装型金磁微粒(GoldMag Particles),兼有在外磁场中可分离性以及生物分子快速固定化等特点,以其为载体开展免疫学检测工作已经开始被人们所关注,磁分离酶联免疫分析法(Magnetic affinity immunoassay,MAIA)具有高敏感性、快速稳定和无放射性污染等特点,是一种极具潜力的免疫学检测新方法,笔者利用西北大学生物芯片研发中心暨国家微检测系统工程技术研究中心研制开发的梅毒抗体磁分离酶联免疫分析试剂,在2007年10月用国家卫生部临检中心梅毒考核血清盘及西安市无偿献血者梅毒抗体阴性血清为标准,对其真实性与可靠性进行了评价,本文就其结果做出了报道。

摘要： 目的:探讨血栓形成指标-血栓前体蛋白(TpP)与血脂在急性冠脉综合征(ACS)患者中的浓度变化及对预后的预测价值. 方法:选择ACS患者107例,正常对照组40例,采用酶联免疫分析法(ELISA)测定血浆TpP,酶法测定血脂浓度;随访1年,记录心血管事件的发生率. 结果:在ACS各组中,TpP及脂蛋白a(LP(a))测定值高于正常对照组(P＜0.05),且在AMI组中,TpP的测定结果要明显高于UA组(P＜0.05).100例ACS患者发生心血管事件32例,TpP与LP(a)在上四分位数的OR值分别为8.64、4.59(P＜0.01).通过回归分析显示,TpP、LP(a)、高血压史、糖尿病史是影响ACS患者预后的危险因素,其OR值分别为1.12、1.08、1.23、1.06(P＜0.05). 结论:TpP与LP(a)对ACS患者的预后有预测价值,且TpP、LP(a)、高血压和糖尿病是影响ACS患者预后的危险因素.

摘要： 建立可检测水牛乳和羊乳中掺伪牛乳的双抗夹心酶联免疫检测方法.分别以牛IgG和牛IgG的Fc片段为抗原,制备抗牛IgG的多克隆和高特异性单克隆抗体,并将以此蛋白作为包被抗体,构建双抗夹心ELISA方法.本方法标准曲线的IC50为4.3μg/mL,方法的灵敏度为0.1μg/mL.添加回收率在95％-105％之间,相对标准偏差小于12％.该方法无需复杂的前处理,检测时间为60min,能准确检测水牛乳和羊乳中掺伪牛乳,避免了传统免疫方法在乳制品属性掺伪检测上的假阳性.

摘要： 建立可检测水牛乳和羊乳中掺伪牛乳的双抗夹心酶联免疫检测方法.分别以牛IgG和牛IgG的Fc片段为抗原,制备抗牛IgG的多克隆和高特异性单克隆抗体,并将以此蛋白作为包被抗体,构建双抗夹心ELISA方法.本方法标准曲线的IC50为4.3μg/mL,方法的灵敏度为0.1μg/mL.添加回收率在95％-105％之间,相对标准偏差小于12％.该方法无需复杂的前处理,检测时间为60min,能准确检测水牛乳和羊乳中掺伪牛乳,避免了传统免疫方法在乳制品属性掺伪检测上的假阳性.

摘要： 建立可检测水牛乳和羊乳中掺伪牛乳的双抗夹心酶联免疫检测方法.分别以牛IgG和牛IgG的Fc片段为抗原,制备抗牛IgG的多克隆和高特异性单克隆抗体,并将以此蛋白作为包被抗体,构建双抗夹心ELISA方法.本方法标准曲线的IC50为4.3μg/mL,方法的灵敏度为0.1μg/mL.添加回收率在95％-105％之间,相对标准偏差小于12％.该方法无需复杂的前处理,检测时间为60min,能准确检测水牛乳和羊乳中掺伪牛乳,避免了传统免疫方法在乳制品属性掺伪检测上的假阳性.

摘要： 建立可检测水牛乳和羊乳中掺伪牛乳的双抗夹心酶联免疫检测方法.分别以牛IgG和牛IgG的Fc片段为抗原,制备抗牛IgG的多克隆和高特异性单克隆抗体,并将以此蛋白作为包被抗体,构建双抗夹心ELISA方法.本方法标准曲线的IC50为4.3μg/mL,方法的灵敏度为0.1μg/mL.添加回收率在95％-105％之间,相对标准偏差小于12％.该方法无需复杂的前处理,检测时间为60min,能准确检测水牛乳和羊乳中掺伪牛乳,避免了传统免疫方法在乳制品属性掺伪检测上的假阳性.

摘要： 方法：论文以新型抗病毒剂创制品种毒氟磷为研究对象,通过杂交瘤技术建立抗毒氟磷及其类似物的高特异性杂交瘤细胞系,通过体内诱生腹水制备单克隆抗体,开发了检测毒氟磷及其类似物的酶联免疫分析.rn 方法.利用2-甲酰苯氧乙酸、氨基酸合成半抗原,通过碳二亚胺法合成了人工抗原,免疫动物并通过杂交瘤技术得到一株杂交瘤细胞株DHS3A2.rn 结果：在制备的单克隆抗体mAb-DHS3A2的基础上,通过对固相载体、有机溶剂、pH值、离子强度、封闭物种类、点板时间、工作浓度等因素的筛选比较,优化了毒氟磷间接竞争ic-ELISA,方法的IC50值分别为9.62±0.59 ng/mL,检出限分别为0.3±0.05 ng/mL.rn 结论：该方法快速、准确,适用于不同基质中毒氟磷农药残留快速检测.

摘要： 本发明公开了一种硫氰酸钠的化学发光酶联免疫检测试剂盒，包括盒体，设在盒体内的酶标板和设在盒体内的试剂；其特征在于，所述酶标板的各孔包被有包被抗原即硫氰酸钠类母核与载体蛋白的偶联物；所述试剂包括：硫氰酸钠类单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体、硫氰酸钠类系列标准溶液、浓缩磷酸盐缓冲液、浓缩洗涤液、化学发光液；本发明的化学发光酶联免疫检测试剂盒具有高灵敏度、简便快速、准确度高、检测药物种类多的特点，与传统的比色ELISA法比较，操作时间大幅度减少；该方法可直接用于检测乳制品中的硫氰酸钠含量。

摘要： 本发明公开了一种马杜霉素的化学发光酶联免疫检测试剂盒，包括盒体，设在盒体内的酶标板和设在盒体内的试剂；其特征在于，所述酶标板的各孔包被有包被抗原即马杜霉素类母核与载体蛋白的偶联物；所述试剂包括：马杜霉素类单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体、马杜霉素类系列标准溶液、浓缩磷酸盐缓冲液、浓缩洗涤液、化学发光液；本发明的化学发光酶联免疫检测试剂盒具有高灵敏度、简便快速、准确度高、检测药物种类多的特点，与传统的比色ELISA法比较，操作时间大幅度减少；该方法可直接用于检测肌肉组织（鸡肉、猪肉、鱼肉等）中的马杜霉素含量。

摘要： 本发明公开了一种沙拉沙星的化学发光酶联免疫检测试剂盒，包括盒体，设在盒体内的酶标板和设在盒体内的试剂；其特征在于，所述酶标板的各孔包被有包被抗原即沙拉沙星类母核与载体蛋白的偶联物；所述试剂包括：沙拉沙星类单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体、沙拉沙星类系列标准溶液、浓缩磷酸盐缓冲液、浓缩洗涤液、化学发光液；本发明的化学发光酶联免疫检测试剂盒具有高灵敏度、简便快速、准确度高、检测药物种类多的特点，与传统的比色ELISA法比较，操作时间大幅度减少；该方法可直接用于检测肌肉组织（鸡肉、猪肉、鱼肉等）中的沙拉沙星含量。

摘要： 本发明提供了一种人促卵泡激素同源竞争酶联免疫分析方法来检测与量化促卵泡激素药物或相关促卵泡激素样品的体外生物学活性。本发明是一种利用抗原‑‑抗体免疫亲和性来检测、量化和反映人促卵泡激素体外生物学活性的分析方法。本发明与临床上化学发光免疫分析法检测人促卵泡激素的效果相比，其易于操作，生产成本较低，能同时检测多个样品浓度，并在一定范围内根据酶标仪检测的吸光值可直接反映出测试的人促卵泡激素的体外生物学活性。本发明所检测的曲线范围宽广，且标品或样品稀释梯度符合线性规律(直接采用倍比稀释)。此外检测灵敏度虽然以IU/ml为单位，实质性达到了以mIU/ml为单位计算促卵泡激素体外生物学活性。

摘要： 本发明公开了一种氯丙嗪的化学发光酶联免疫检测试剂盒，包括盒体，设在盒体内的酶标板和设在盒体内的试剂；其特征在于，所述酶标板的各孔包被有包被抗原即氯丙嗪类母核与载体蛋白的偶联物；所述试剂包括：氯丙嗪类单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体、氯丙嗪类系列标准溶液、浓缩磷酸盐缓冲液、浓缩洗涤液、化学发光液；本发明的化学发光酶联免疫检测试剂盒具有高灵敏度、简便快速、准确度高、检测药物种类多的特点，与传统的比色ELISA法比较，操作时间大幅度减少；水产品(鱼肉、虾肉)中吩噻嗪药物残留检测。

摘要： 本发明公开了一种地克珠利的化学发光酶联免疫检测试剂盒，包括盒体，设在盒体内的酶标板和设在盒体内的试剂；其特征在于，所述酶标板的各孔包被有包被抗原即地克珠利类母核与载体蛋白的偶联物；所述试剂包括：地克珠利类单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体、地克珠利类系列标准溶液、浓缩磷酸盐缓冲液、浓缩洗涤液、化学发光液；本发明的化学发光酶联免疫检测试剂盒具有高灵敏度、简便快速、准确度高、检测药物种类多的特点，与传统的比色ELISA法比较，操作时间大幅度减少；水产品(鱼肉、虾肉)中地克珠利药物残留检测。

摘要： 本发明公开了一种丙草胺的化学发光酶联免疫检测试剂盒，包括盒体，设在盒体内的酶标板和设在盒体内的试剂；其特征在于，所述酶标板的各孔包被有包被抗原即丙草胺类母核与载体蛋白的偶联物；所述试剂包括：丙草胺类单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体、丙草胺类系列标准溶液、浓缩磷酸盐缓冲液、浓缩洗涤液、化学发光液；本发明的化学发光酶联免疫检测试剂盒具有高灵敏度、简便快速、准确度高、检测药物种类多的特点，与传统的比色ELISA法比较，操作时间大幅度减少。

摘要： 本发明公开了一种多菌灵的化学发光酶联免疫检测试剂盒，包括盒体，设在盒体内的酶标板和设在盒体内的试剂；其特征在于，所述酶标板的各孔包被有包被抗原即多菌灵类母核与载体蛋白的偶联物；所述试剂包括：多菌灵类单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体、多菌灵类系列标准溶液、浓缩磷酸盐缓冲液、浓缩洗涤液、化学发光液；本发明的化学发光酶联免疫检测试剂盒具有高灵敏度、简便快速、准确度高、检测药物种类多的特点，与传统的比色ELISA法比较，操作时间大幅度减少；该方法可直接用于检测蔬菜植物中的多菌灵含量。

摘要： 本发明属于生物医学检测技术领域，具体涉及一种检测血清癌症抗原量的等离子体共振显色酶联免疫分析法。本发明方法是将待测样品和HRP酶标记物置于微孔板内培育后进行固液相分离，使酶标记物结合部分和游离部分分离，向酶标记物结合部分加入显色底物，发生酶催化显色反应，再通过紫外吸收光谱测定样品中癌胚抗原含量。本发明方法具有检测灵敏度高、选择性好、操作简单等优点。

摘要： 本发明提供了一种用于定量检测人促卵泡激素(hFSH)的双抗夹心酶联免疫分析法，主要解决现有技术灵敏度低、系统稳定性差、检测范围受限和可重复性不高，以及操作繁琐等技术问题。本发明采用配对的两种特异性单克隆抗体(即anti‑FSH alpha抗体和anti‑FSH beta抗体)来检测与量化人促卵泡激素或相关促卵泡激素样品。该种方法易于操作、灵敏性高、特异性强和系统稳定可重复，以及检测FSH的范围广，并可根据酶标仪检测的吸光值(OD值)直接反映出FSH标品或样品的浓度或体外生物学活性。