花粉管通道法

摘要： 为探讨花粉管通道法加聚乙二醇(PEG)介导、加细胞穿膜肽(CPPs)介导与直接导入外源基因3种方式间的转化率差异,对2种玉米自交系材料京2416和京92进行花粉管通道法转化并统计分析。结果表明,3种方式均能获得草甘膦抗性植株,在京2416受体中PEG介导较直接导入高0.45百分点,CPPs介导的较直接导入的高0.66百分点,三者间转化率差异达显著或极显著水平;对T_(0)代草甘膦抗性植株PCR进行检测,发现因外源基因丢失或沉默,草甘膦抗性植株未必都含有目的基因,因此田间筛选应与PCR检测相结合;北京市农林科学院房山转基因基地转化验证结果发现3种导入方式其草甘膦抗性率和转化率高低顺序一致,均为CPPs介导>PEG介导>对照,与海南省三亚市崖城基地转化相同,且CPPs介导和PEG介导二者间差异极显著,京2416中二者相差0.26百分点,京92中相差0.36百分点。因此,在花粉管通道法转化玉米过程中加入介导物质有助于提高转化率,且加CPPs比加PEG更具有优势。

摘要： 以月季石榴为试验材料,结合花粉管通道法和农杆菌介导法进行浸染转化,探究了不同浸染介质及不同授粉方式对坐果率、出芽率、阳性率的影响.对授粉后花粉管的萌发进行观察,发现在授粉后24 h进行菌液浸染可能使菌液深入到花粉管,从而提高转化效率.对转化后的1819棵实生苗进行GUS染色和初步筛选,获得了82棵待检测植株;使用PCR扩增技术对转基因阳性植株进行鉴定,得到了14棵转PgLCBF1基因的月季石榴植株.对不同处理组合所获得的月季石榴的坐果率、出芽率、阳性率的研究结果表明:当浸染介质为5％蔗糖、授粉方式为授粉后24 h浸染时,月季石榴的遗传转化效果较好.

摘要： 针对花粉管通道法导入苦瓜DNA的籼稻子代D9和受体RT,采用Illumina HiSeqTM平台进行全基因组重测序,分析了精米的基本营养成分、总皂苷成分以及膨胀势和米饭的食味品质.结果表明:苦瓜的部分DNA片段被整合进了受体水稻的DNA中,使生理活性成分总皂苷含量显著提高;苦瓜基因对水稻的营养成分有改善作用,使脂肪含量增加,膳食纤维与灰分的含量有所减少.

摘要： 陇中5号是定西市农业科学研究院以本单位选育圃F2代杂交组合200616[F2代200510(苏引10号×9715-2-2-1)]×[9767-1-1-2-1(88113-28-4×陇原935)]为受体进行回交,以外源偃麦草DNA为供体通过花粉管通道法人工导入,经过多年“多代集团混合选择技术”选育而成,原代号200707-4-2。2018年通过甘肃省品种审定委员会审定,审定编号:甘审麦20180007。

摘要： 为鉴定epsps-G6基因成功导入棉花基因组并分析转基因抗草甘膦棉花的拷贝数和遗传特性,以花粉管通道法获得的8个转epsps-G6基因抗草甘膦棉花株系(G6-1、G6-4、G6-5、G6-7、G6-11、G6-19、G 6-20、G6-25)为材料,通过Southern点杂交、双酶切和单酶切的Southern杂交后进行分析,结果表明,外源epsp s-G6基因已成功整合到棉花基因组上,且其中4个转化株系含有单拷贝插入的epsps-G6基因.选用其中3个单拷贝插入、自交纯合且草甘膦抗性强的株系G6-1、G6-5、G6-19,分别与转基因遗传背景材料(中棉所49)和陆地棉标准系(TM-1)进行正反交,遗传分析结果表明,这3个转基因株系均符合3:1的孟德尔分离规律,不受细胞质效应的影响.

摘要： 为探讨转脂蛋白在非生物逆境中的作用,将ZmLTP3基因利用花粉管通道法转入玉米自交系京2416中,在PCR和EPSPS速测试纸鉴定基础上连续自交获得转基因阳性株系.以转基因株系OE6、OE10、OE18作为试验组,以自交系京2416为对照(WT),进行盐胁迫处理,比较二者之间在形态指标和生理指标方面的差异.结果显示,在正常生长条件下,转基因株系与野生型的各项指标均无显著差异.在盐胁迫条件下,与野生型相比,转基因株系的株高、茎基宽、根长、鲜质量、干质量及叶绿素含量均显著增加,表现出较好的生长状态;超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)及过氧化氢酶(CAT)活性也显著升高,显示出较高的活性氧清除能力;同时,丙二醛(MDA)含量及相对外渗电导率水平则显著下降,暗示其体内较低程度的细胞伤害水平.以上结果表明,ZmLTP3基因的过量表达可提高玉米的耐盐胁迫能力.

摘要： 提取辣椒(洛椒9号)幼苗总DNA,用花粉管通道法导入小麦(兰考906),共导入500个小花,收获397粒种子,To代种子(T1)发芽率为55.9％.T1代材料受粉5d后观察其表型性状变异情况,主要变异类型:不分蘖,变异率为2.0％(对照为0.8％);畸形穗,变异率为6.1％(对照为2.4％);畸形旗叶,变异率为7.6％(对照为0.8％);育性降低(花药发育异常),变异率为1.0％(对照为0);黄条斑叶,变异率为2.0％(对照为0);植株变高,变异率为1.0％(对照为0);穗无蜡质,变异率为4.1％(对照为0);主次分蘖不同步,变异率为1.0％(对照为0).总体而言,对照材料主要表现为畸形穗、畸形旗叶和不分蘖,总变异率为4.0％,而处理材料T1代的总变异率为21.3％.无论在变异谱还是变异率上,经辣椒总DNA转化的小麦材料与对照组有明显差异,辣椒总DNA导入小麦能够引起较大的变异谱,产生对照组没有出现的表型变异类型,为丰富小麦种质资源提供较好的方法.

摘要： 为了克服亚麻属不同种间存在的生殖隔离,从而利用亚麻野生种优异基因进行资源创制,采用花粉管通道法将亚麻野生种垂果亚麻的基因组DNA导入到栽培种坝选三号中,获得T0种子.T1播种后所获24个单株中有3株发生明显变异,转化后代的株高、工艺长度、分茎数、分枝数及单株蒴果数与受体坝选三号相比较,均发生明显增加.利用18条引物对供体、受体及24株T1导入材料的基因组DNA进行了RAPD扩增分析,从中筛选到6条多态性引物(OPH20、OPK14、S103、S118、OPJ4、OPT6)对8个样品的DNA扩增产物带型出现明显差异,占全部所用引物的33.3％.RAPD分析表明,D14、D17、D223个植株的RAPD谱带中均有来自于供体的特异条带,结合考种数据,认为是供体DNA片段成功整合进了受体基因组中引起了表型上的变化.利用花粉管通道法向胡麻栽培种中导入野生种基因组DNA能够在当代引起多种变异,同时也可在分子水平上检测到基因组的差异,推测大片段外源DNA同源重组可能是变异的主要原因.

摘要： By pollen-tube pathway method,pCMBIA3300-Cry1Iem gene was transferred into JN28 soybean.Preliminary determination of positive plants was conducted by PCR detection of transgenic plants with glufosinate resistant screening.Detection of the transgenic plants was conducted by Southern blotting and hybridization signal appeared in 5 strains.The results show that Cry1Iem gene integrated into the genome of receptor materials.Expression of Cry1Iem gene at the mRNA level was measured by real-time fluorescence quantitative PCR.It was proved that the CrylIem gene was expressed in the receptor material.%通过花粉管通道法将pCMBIA3300-Cry1Iem载体中的Cry1Iem基因转入大豆品种“吉农28”中,对经过抗草铵膦筛选的转基因植株进行PCR检测,初步确定阳性植株,对转基因阳性植株进行Southern blotting检测,结果发现有5株出现杂交信号,证明Cry1Iem基因整合到受体的基因组中.利用实时荧光定量PCR测定T1代阳性植株的Cry1Iem基因在mRNA水平上的表达量,证明Cry1Iem基因在受体材料中获得了表达.

摘要： 为了克服黑杨派与白杨派间的远缘杂交障碍,本研究利用花粉管通道法将银白杨总DNA导入辽宁杨×N001,获得的植株经形态学鉴定,得到4株明显具有银白杨表型特征的转化植株,其中授粉后30h未切拄头的处理获得1株;授粉后60h未切柱头处理获得2株;授粉后72h切柱头导入处获得到1株,并采用荧光显微技术对黑杨花粉粒的萌发及花粉管的生长动态进行研究.研究结果表明,黑杨授粉后1h花粉粒开始萌发,授粉后24h时,大量花粉管进入胚囊,花粉管通道形成,确定外源DNA导入黑杨的适宜时间为授粉后24～72h.

摘要： 针对我国抗虫棉抗虫基因单一、抗性风险日趋增加的状况,依据棉花密码子偏好,人工合成Cry5 Aa抗虫基因,通过花粉管通道法转入棉花,并通过组织化学法及PCR方法对不同世代转化株进行鉴定,同时进行了抗虫性测试.结果表明,通过花粉管通道法成功获得转Cry5 Aa基因植株,T1代转化效率为7.76％,T2代为73.1％,T3代为95.5％.结合PCR检测,T1代阳性率为2.35％,T2代为55.8％,转化株对第二、三、四代棉铃虫校正死亡率分别为85.42％、75.35％和62.79％,与GK19差异不显著,能够替代目前主要抗虫基因成为新的棉铃虫抗源.

摘要： 介绍了花粉管通道转化法的起源与发展，概述了花粉管通道法的转化机理，以及导入DNA的方法，主要有微注射法、柱头滴加法、花粉粒携带法等，介绍了花粉管通道法转基因的操作程序，花粉管通道法已经成功地运用于棉花育种中，并得到了抗病、抗虫、高品质的后代。

摘要： 为充分保护和利用茶陵野生稻基因资源,利用花粉管通道法将茶陵野生稻总DNA导入栽培稻中,获得表型各异的后代.利用随机引物扩增以及同源序列克隆的方法克隆基因片段,得到了耐寒与抗稻瘟病相关的一些基因片段,为后续试验提供了重要依据与试验材料.

摘要： 通过花粉管通道法将菜豆几丁质酶基因(chitinase,ch)转化5个玉米自交系,D0代获得35株卡那霉素阳性植株,其中13株PCR阳性植株,田间抗病性鉴定结果表明,转化植株的抗玉米大小斑病能力有所提高,3株表现高抗。研究发现DNA溶液浓度影响转化率,当浓度为100μg/ml时,转化率最高,为2.61%。DNA导入时间距人工授粉时间的延长,结实率升高,但转化率显著下降,人工授粉后1 d导入DNA产生的转化株最多,为19株,平均转化率为1.35%。

摘要： 通过花粉管通道法将野生稻DNA导入栽培稻中，获得D3代稳定遗传表现的导入系。与受体相比，导入系在产量、抽穗期、株高等生物学性状方面都存在着优势。鉴于对数量性状定位的复杂性，采用花粉管通道法构建定位群体，可以将复杂的数量性状简化为质量性状，从而提高QTL定位的精确度和灵敏度。

摘要： 该文综述了花粉管通道法导入外源DNA技术的创立、发展以及应用现状，指出花粉管通道法可以克服农杆菌介导、基因枪等遗传转化方法对组织培养的依赖，通过收获种子获得遗传多样性丰富的转化群体，选择余地大，可满足林木多无性系造林的要求；加之该方法与林木授粉后施加理化处理诱导三倍体技术同样是操作雌花序，可以将两种育种技术联合使用选育实现遗传转化的三倍体林木品种，从而通过一轮次选育过程实现多目标性状遗传改良。随着研究的深入以及技术的日臻完善，花粉管通道法必将在林木育种领域发挥更大的作用。

摘要： 为了筛选一种更加适用于陆地棉转导外源基因的方法,以新疆陆地棉新农早104为受体,利用农杆菌菌液喷雾法和花粉管通道2种转化方法转导抗旱基因DREB和ALDH,通过对棉花成铃率、F1代卡检阳性率和分子检测阳性率的统计分析,结果表明:农杆菌菌液喷雾法转DREB基因和转ALDH基因的成铃率比质粒注射法分别高29.9和28.6百分点,卡检阳性率分别高1.6和2.2百分点,PCR阳性率分别高27.7和20百分点.转片段较短的DREB基因的棉花后代无论是成铃率、卡那霉素检测阳性率还是PCR检测阳性率均比转片段较长的ALDH基因高.从而得出结论,农杆菌喷雾法优于质粒注射法,且短片段基因相对长片段基因获得转基因植株的转化率较高.

摘要： 为了筛选一种更加适用于陆地棉转导外源基因的方法,以新疆陆地棉新农早104为受体,利用农杆菌菌液喷雾法和花粉管通道2种转化方法转导抗旱基因DREB和ALDH,通过对棉花成铃率、F1代卡检阳性率和分子检测阳性率的统计分析,结果表明:农杆菌菌液喷雾法转DREB基因和转ALDH基因的成铃率比质粒注射法分别高29.9和28.6百分点,卡检阳性率分别高1.6和2.2百分点,PCR阳性率分别高27.7和20百分点.转片段较短的DREB基因的棉花后代无论是成铃率、卡那霉素检测阳性率还是PCR检测阳性率均比转片段较长的ALDH基因高.从而得出结论,农杆菌喷雾法优于质粒注射法,且短片段基因相对长片段基因获得转基因植株的转化率较高.

摘要： 为了筛选一种更加适用于陆地棉转导外源基因的方法,以新疆陆地棉新农早104为受体,利用农杆菌菌液喷雾法和花粉管通道2种转化方法转导抗旱基因DREB和ALDH,通过对棉花成铃率、F1代卡检阳性率和分子检测阳性率的统计分析,结果表明:农杆菌菌液喷雾法转DREB基因和转ALDH基因的成铃率比质粒注射法分别高29.9和28.6百分点,卡检阳性率分别高1.6和2.2百分点,PCR阳性率分别高27.7和20百分点.转片段较短的DREB基因的棉花后代无论是成铃率、卡那霉素检测阳性率还是PCR检测阳性率均比转片段较长的ALDH基因高.从而得出结论,农杆菌喷雾法优于质粒注射法,且短片段基因相对长片段基因获得转基因植株的转化率较高.

摘要： 本发明涉及一种海岛棉品质改良技术。更具体地，本发明涉及一种海岛棉花粉管通道转基因方法，该方法简便、经济、有效，改变了现有花粉管通道技术在海岛棉上转化率低的现状。另外，本发明涉及用此方法获得的转化了外源目的基因的海岛棉。

摘要： 本发明公开了一种运用花粉管通道转化法培育耐寒热带睡莲的方法，收集开花第三天的花粉，用柱头液制备含有CodA基因的农杆菌侵染液，以开花第一天的热带睡莲为受体进行侵染，种子成熟后，用潮霉素筛选溶液进行种子萌发培养和筛选，抗性植株育苗后进行大田种植，露地越冬筛选抗冻植株，再以转基因植株为父本，非转基因热带睡莲优良单株作为母本进行杂交，露地越冬筛选出耐寒优良后代。本发明为彻底解决在温带地区热带睡莲露地自然越冬问题奠定了坚实基础，同时也将推动热带睡莲基因工程的发展。

摘要： 本发明涉及一种海岛棉品质改良技术。更具体地，本发明涉及一种海岛棉花粉管通道转基因方法，该方法简便、经济、有效，改变了现有花粉管通道技术在海岛棉上转化率低的现状。另外，本发明涉及用此方法获得的转化了外源目的基因的海岛棉。

摘要： 本发明属于玉米转基因技术领域，具体为一种借助花粉管通道在玉米中实现基因编辑的方法，包括步骤一：玉米果穗选取，选取自授粉后的24‑28h，抽丝期一致的玉米果穗；步骤二：基因编辑质粒的制备；步骤三：花粉介导转化：借助花粉管通道将基因编辑载体导入，用待转化的质粒溶液处理花粉粒，使花粉粒携带含有Cas9基因和sgRNA的质粒，然后授粉；步骤四：后代材料的抗性筛选；步骤五：后代遗传性特征研究和PCR检测结果，本发明利用花粉管进入胚囊时所形成的通道，将外源DNA导入受体，实现基因编辑，具有无基因型限制和易于实现大规模转化的特点，可以对玉米实现基因编辑，而且不需要昂贵的仪器设备和繁复的组织培养，并省去了组织培养过程。

摘要： 本发明公开了一种基于花粉管通道导入的水稻基因定向编辑方法，属于生物技术领域。本发明利用花粉管通道将CRISPR/Cas9载体导入水稻胚囊，实现tms5目的基因的定向编辑。本发明建立的基于花粉管通道的基因定向编辑方法不依赖愈伤组织的遗传转化，并能获得目的基因突变，操作过程简单及可靠。

摘要： 本发明公开了一种基于萱草花粉管通道导入EMS诱变育种的方法，包括如下步骤：(1)于田间选取萱草花朵自交进行授粉；(2)将授粉的花剥离雄蕊和花瓣，截取并保留2mm长的花柱，用微量注射器吸取10μl诱变剂，沿花柱柱头纵轴注射，然后用湿棉花包住子房；诱变剂为浓度0.00001‑0.00005％的EMS溶液，以磷酸缓冲液作为溶剂；(3)35d后收获种子，将种子在水中浸泡12h后剥去外种皮，在育苗盒中于植物培养间25°C条件下培养，本发明通过花粉管通道注射诱变剂的方法，授粉后使EMS溶液能够沿着花粉管通道形成的途径渗透，经过珠心进入胚囊，最终诱变尚不具备正常细胞壁的合子或早期胚胎细胞，相比于传统的诱变育种方法，该方法操作简单，容易掌握，省时省力。

摘要： 本实用新型涉及农业种植技术领域，涉及一种杂交用花粉管通道设备，包括储液仓整体以及安装在储液仓整体上的推进加压装置，储液仓整体包括储液仓，储液仓呈圆柱形，储液仓内部为空腔结构，储液仓内部安装有活塞，活塞与储液仓内壁尺寸相匹配，活塞与储液仓滑动连接，活塞顶端连接有滑动柱，滑动柱上开设有限位槽，限位槽内部设置有滑动限位柱，滑动限位柱与滑动柱滑动连接，滑动限位柱一端一体成型有限位柱，通过设置的储液仓整体和推进加压装置，使得在使用装置相植物注射目的基因DNA溶液时，可以控制注射溶液的数量，避免人工控制导致注射溶液数量不准确，导致溶液浪费或注射溶液过少，影响注射效果。

摘要： 本发明涉及一种利用农杆菌毒蛋白基因提高花粉管通道法的转化效率的方法，主要利用农杆菌介导植物转化机理，利用农杆菌协助转化的毒蛋白基因，在体外同需要转化的目的基因(绿色荧光蛋白基因)组装或混合，经脂质体包装后，采用花粉管通道技术，对植物进行转化，并利用上述的方法对植物、尤其是对棉花进行转化。本发明将农杆菌－脂质体－花粉管通道技术有机的结合起来，原生质体的转化率明显提高，质粒不仅在进行入胚囊阶段受脂质体保护，而且在进入卵细胞后，能被表达的毒蛋白包被，提高了外源DNA在细胞转化过程中的稳定性，能够精确的在T－DNA区加工切割，提高了转化效率。

摘要： 本发明属于植物或获得新植物的方法；通过组织培养技术的植物再生技术领域，公开了一种利用箭竹DNA结合花粉管通道水稻新种质的获取方法，利用禾本科高山箭竹全基因组DNA结合花粉管通道法处理水稻品种恩恢142产生变异，从450朵颖花产生的318棵苗中筛选表型与对照有明显差异的单株经过连续自交，获得表型稳定的变异株系13个；利用49对SSR分子标记对变异株系与对照进行分析，发现变异株与对照之间以及变异株系间的遗传背景都存在差异；将变异材料和对照分别与光温敏核不育系杂交配组。利用箭竹DNA结合花粉管通道法可以为水稻育种创制新种质，为水稻的种质资源创新提供一种新途径。

摘要： 本实用新型公开了一种提高玉米花粉管通道转化效率的装置，所述装置包括注射器（1）和漏斗（5），所述注射器的活塞末端有活塞皮垫（2），所述漏斗的咀部通过塑料管（4）与注射器针筒末端的排气小孔（3）相连，漏斗的斗部与乳胶管（6）粘连。所述装置可以安置在已剪掉苞叶和花丝的玉米雌穗顶端，通过快速吸取雌穗内部的水分，使花丝处于一种相对干爽的状态，这样便可保证DNA溶液和花丝的完全接触，增加DNA片段进入花粉管内的几率，最终提高花粉管通道法的转化效率。