精原细胞

摘要： 目的探究转录因子Jun在小鼠睾丸发育过程中的表达模式。方法采用半定量PCR和免疫印迹方法检测Jun在小鼠睾丸发育过程中的表达模式,采用免疫荧光染色方法观察Jun在成年小鼠睾丸生精上皮周期中的定位。结果半定量PCR和免疫印迹结果显示,Jun在小鼠出生6 d后的睾丸中已有表达,在第8 d达到峰值,之后随着睾丸发育其表达量逐渐下降。免疫荧光染色结果发现Jun在生精上皮各期与睾丸支持细胞细胞核的标志物SOX9均存在共定位,其在Ⅰ-Ⅶ期的支持细胞核中表达水平较低,Ⅷ-Ⅹ期支持细胞核中表达水平显著升高,进入Ⅺ-Ⅻ期后水平又下降;此外Jun在生精上皮Ⅷ期开始表达于精原细胞细胞核中,并一直持续到Ⅻ期。结论Jun在小鼠睾丸发育早期即开始表达,在成年小Ⅺ鼠睾丸中主要定位于支持细胞与精原细胞的胞核中,提示其可能对于睾丸支持细胞发挥正常功能和维持精原细胞增殖分化具有重要作用。

摘要： 一、雄蜂生殖生物学研究概述精子形成发生在雄蜂幼虫期后期和预蛹期,精子分化发生在蛹期。精子形成始于胚胎形成和精巢的发育。精巢由精小管组成,精小管中充满初级精原细胞或未分化的生殖细胞。在幼虫发育的最后阶段(第5日龄),初级精原细胞经历4次有丝分裂形成16个次级精原细胞。次级精原细胞经历一系列有丝分裂成为初级精母细胞。从幼虫期后期到预蛹期,精子形成包含两轮减数分裂。第一次减数分裂发生在幼虫期后期,第二次减数分裂发生在预蛹期。

摘要： 电离辐射不仅发生在辐射性恐怖事件或核事故中,也广泛存在于医疗和日常生活中。目前大量研究集中在电离辐射导致的骨髓和消化道损伤防护,但对其在雄性生殖功能损伤的有效防护研究甚少。睾丸的正常生殖功能是维持雄性终生生育能力的根本,其位置浅且对电离辐射敏感,探究睾丸生殖功能的辐射损伤机制有助于提出高效的辐射损伤防护策略。精原干细胞是实现睾丸生殖功能的基础,在支持细胞和间质细胞等组成的干细胞微环境中生长发育,其功能受到胶质细胞源性神经营养因子(glial cell-derived neurotrophic factor,GDNF)和早幼粒细胞白血病锌指蛋白(promyelocytic leukemia zinc finger,PLZF)等多种因子的调节。电离辐射可通过DNA损伤、氧自由基、不同形式的细胞死亡、激活哺乳动物雷帕霉素靶复合物1(mammalian rapamycin target comple x1, mTORC1)和p8丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen activated protein kinase, p38MAPK)等信号通路对精原细胞及其微环境造成损伤。因此,抑制细胞凋亡、抗氧化损伤、抑制mTORC1和p38MAPK信号通路激活为现有的常见睾丸辐射损伤的防护措施。多肽类药物和精原干细胞移植等在电离辐射导致雄性生殖功能损伤防护中有较好的潜力。电离辐射导致雄性生殖功能损伤机制研究的深入有利于探索多种潜在且高效的睾丸辐射损伤防护新思路。

摘要： 目的 建立3种小鼠睾丸精原细胞株GC-1细胞DNA损伤模型并分析其异同.方法 分别采用UVB辐照、D-半乳糖(D-Galactose,D-Gal)、博来霉素(bleomycin,BLM)刺激GC-1细胞不同时间,Western blot和免疫荧光法检测 γ-H2AX表达及定位;免疫荧光法检测8-OHdG表达及定位;Western blot法检测p-p53和p21表达水平.结果 UVB辐照和D-Gal处理后,γ-H2AX蛋白表达分别在4 h和6 h达高峰BLM刺激后,γ-H2AX蛋白表达逐渐上升且BLM浓度越高,其达到高峰时间越短.UVB辐照和BLM刺激后,胞核胞质内均有8-OHdG表达,且时间越长,核内表达越多;D-Gal处理后,8-OHdG主要表达在胞质,且在6 h达高峰.UVB辐照后,p-p53和p21蛋白表达不断上升,p21表达较滞后;D-Gal处理后,p-p53和p21表达分别在6 h和12 h达高峰;BLM刺激后,p-p53和p21蛋白表达呈同步上升趋势,BLM浓度越高,其达高峰时间越短.结论 成功建立3种GC-1细胞DNA损伤模型,且D-Gal处理GC-1细胞DNA损伤较轻,而UVB辐照和BLM刺激DNA损伤较重.

摘要： 目的 观察大黄素对精索静脉曲张缺氧模型精原细胞的保护作用.方法 选用小鼠GC-1精原细胞,设置对照组(A组)、对照+大黄素组(B组)、模型组(C组)、模型+大黄素组(D组).C组和D组加入氯化钴(CoC12)至终质量浓度为100 μmol/L,然后培养细胞24h构建精索静脉曲张缺氧模型.B组和C组加入大黄素至终质量浓度为40 μmol/L.采用细胞计数试剂-8(CCK-8)法及流式细胞仪测定细胞凋亡水平,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase-3)和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)的蛋白质表达水平,采用实时定量反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞Caspace-3和bax的基因表达水平,组间比较采取t检验.结果 CCK-8实验示C组和D组细胞存活率低于A组[(51.70±3.52)％、(77.84±5.18)％比(100.00±0.00)％,t=23.767、7.410,P值均＜0.05],差异有统计学意义,且D组细胞存活率高于C组[(77.84±5.18)％比(51.70±3.52)％,t=7.229,P＜0.05],差异有统计学意义.流式实验示D组凋亡细胞比例低于C组[(10.54±0.68)％比(21.23±1.01)％,t=15.207,P＜0.05],差异有统计学意义.Western blot结果示D组Caspace-3和bax蛋白表达水平低于C组(0.713±0.020、0.819±0.022比1.134±0.025、1.271±0.019,t=22.722、26.813,P值均＜0.05),差异有统计学意义.RT-qPCR结果示D组Caspace-3和bax表达水平低于C组(1.52±0.18、1.80±0.21比3.53±0.23、4.27土0.31,=11.920、11.426,P值均＜0.05),差异有统计学意义.结论 大黄素通过抑制细胞凋亡对精索静脉曲张缺氧模型的精原细胞起保护作用.

摘要： 目的探讨藻蓝蛋白(C-PC)对H_(2)O_(2)诱导的小鼠精原细胞(GC-1 spg)氧化损伤的保护作用及其机制。方法制备H_(2)O_(2)诱导的GC-1 spg氧化损伤模型。实验分为对照组、模型组及C-PC低、中、高3个剂量预处理组。C-PC各剂量组用不同浓度C-PC预处理24 h后,除对照组以外,其余各组细胞培养液中均加入H_(2)O_(2),37°C孵育24 h。采用CCK-8方法检测各组细胞的增殖活性;采用二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)染色检测各组细胞产生活性氧(ROS)情况;采用流式细胞术检测各组细胞的坏死情况;采用Western blot方法测定各组细胞中受体相互作用蛋白-1(RIP-1)、RIP-3的表达情况。结果与对照组比较,模型组GC-1 spg增殖活性下降(F=76.86,q=23.01,P<0.05),细胞内ROS水平显著升高,坏死细胞增多(F=206.9,q=60.07,P<0.05);与模型组比较,C-PC低、中、高剂量组细胞增殖活性显著增加(q=4.45~10.83,P<0.05),细胞内ROS水平显著降低,坏死细胞减少(q=9.09~32.41,P<0.05)。Western blot分析显示,与模型组比较,C-PC预处理可下调细胞中RIP-1、RIP-3表达(F=541.2、297.5,q=27.97~62.98,P<0.05)。结论C-PC对H_(2)O_(2)诱导的GC-1 spg氧化损伤具有明显的保护作用,可能与C-PC提高GC-1 spg的抗氧化能力,抑制GC-1 spg中RIP-1、RIP-3蛋白表达,降低细胞坏死有关。

摘要： 目的 探讨藻蓝蛋白(C-PC)对H2 O2诱导的小鼠精原细胞(GC-1 spg)氧化损伤的保护作用及其机制.方法 制备H2 O2诱导的GC-1 spg氧化损伤模型.实验分为对照组、模型组及C-PC低、中、高3个剂量预处理组.C-PC各剂量组用不同浓度C-PC预处理24 h后,除对照组以外,其余各组细胞培养液中均加入H2 O2,37°C孵育24 h.采用CCK-8方法检测各组细胞的增殖活性;采用二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)染色检测各组细胞产生活性氧(ROS)情况;采用流式细胞术检测各组细胞的坏死情况;采用Western blot方法测定各组细胞中受体相互作用蛋白-1(RIP-1)、RIP-3的表达情况.结果 与对照组比较,模型组GC-1 spg增殖活性下降(F=76.86,q=23.01,P<0.05),细胞内ROS水平显著升高,坏死细胞增多(F=206.9,q=60.07,P<0.05);与模型组比较,C-PC低、中、高剂量组细胞增殖活性显著增加(q=4.45～10.83,P<0.05),细胞内ROS水平显著降低,坏死细胞减少(q=9.09～32.41,P<0.05).Western blot分析显示,与模型组比较,C-PC预处理可下调细胞中RIP-1、RIP-3表达(F=541.2、297.5,q=27.97～62.98,P<0.05).结论 C-PC对H2 O2诱导的GC-1 spg氧化损伤具有明显的保护作用,可能与C-PC提高GC-1 spg的抗氧化能力,抑制GC-1 spg中RIP-1、RIP-3蛋白表达,降低细胞坏死有关.

摘要： 精子发生包括精原细胞有丝分裂、精母细胞减数分裂及精子形成3个过程,该过程涉及众多相关特异表达基因的精细调控。研究提示转录因子Foxj2表达于睾丸生殖细胞。为明确睾丸中过表达Foxj2对雄性生育的影响,本研究利用Cre-loxP重组系统构建了睾丸生殖细胞条件性敲入Foxj2的小鼠模型(Stra8-cre;Foxj2-cKI),发现Foxj2杂合敲入雄鼠生育率下降、Foxj2纯合敲入雄鼠不育。

摘要： 精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)位于睾丸曲细精管基底膜上,既能自我更新又能定向分化产生精子.SSCs这一特性在辅助生殖技术应用中发挥关键作用.多年来,从啮齿类动物SSCs到人类SSCs的体外增殖分化研究取得了极大的进步,这在一定程度上取决于体外培养法的不断改进和完善,目前SSCs体外培养已从最初的二维培养发展到各种类型的三维培养,如:软琼脂三维培养法、甲基纤维素三维培养法、纳米纤维支架三维培养法、脱细胞生物支架三维培养法.SSCs体外培养法的不断改进对揭示雄性生殖细胞发生机制、治疗男性不育症等具有重要意义.为了探索提高SSCs体外培养效率的技术方法,建立长期稳定的SSCs培养体系,本文主要综述了SSCs体外三维培养法的研究进展.

摘要： 本文研究结果表明，克隆的绵羊Gfral的序列与牛、人、小鼠、大鼠Gfral序列有很高的同源性。克隆绵羊Gfral基因编码区的全序列，制备Gfral基因的抗原蛋白并诱导产生多克隆抗体，从而对体培养体系中的绵羊精原干细胞进行免疫荧光抗体染色，对绵羊曲细精管进行免疫染色，可以鉴定绵羊精原干细胞，检测绵羊曲细精管中精原细胞的形态和分布，为更好的研究哺乳类家畜特别是绵羊的精子发生过程打下基础。

摘要： 精原细胞的增殖分化是整个精子发生过程的开端,它决定了一名男性产生精子的数量和质量,是男性生殖能力的根本所在.因此,研究精原细胞的特性对于阐述男性不育的病理基础是非常重要的一环.因此,近年关于精原细胞分离、纯化及体外培养方面的研究成了该领域的一个热点，本文介绍精原细胞培养技术研究进展。

摘要： 为了阐明半番鸭性腺发育特征及Dmrtl在鸭性腺中的表达模式,利用HE染色比较半番鸭、番鸭、白改鸭胚胎期性腺不同发育阶段的组织形态特征,利用TUNEL试剂盒检测半番鸭、番鸭、白改鸭不同发育阶段胚胎期细胞凋亡情况,利用定量PCR分析Dmrt1在半番鸭、番鸭、白改鸭不同发育阶段胚胎期的表达,利用HE染色观察成年半番鸭睾丸的发育情况及睾丸的组织结构特征,IHC检测SSEA-1和Dmrt1蛋白在成年半番鸭睾丸中的表达.结果表明:半番鸭胚胎发育至1/2时期时半番鸭睾丸和卵巢结构出现异常,半番鸭、番鸭、白改鸭胚胎发育不同阶段单位面积性腺中细胞凋亡没有可比性,胚胎发育至1/2时半番鸭、番鸭、白改鸭雄性性腺中Dmrt1的表达达到最高值,显著高于雌性性腺中的表达(P＜0.05),之后Dmrt1在胚胎性腺中的表达下降.成年半番鸭睾丸发育异常,个体差异较大,所有个体睾丸占体重比例均低于3％,左右两侧睾丸组织形态结构基本一致.左右侧睾丸间质细胞组织和曲精细管依稀可见,曲精细管之间相隔很近,数目很多,每个曲细精管切面面积较小,发育不充分,间质细胞较少,曲精细管之内有单层细胞排列或多层细胞充满管腔,睾丸中未见成熟的精子.SSEA-1主要表达于精原细胞.DMRT1在不同半番鸭睾丸间质细胞中均未见表达,DMRT1主要表达部位集中于曲精细管精原细胞的细胞核.根据研究结果,推测半番鸭孵化1/4至1/2胚胎期时性腺发育处于关键时期.Dmrt1在半番鸭、番鸭、白改鸭1/2胚胎期时性腺发育中起重要作用.Dmrtl能促进成年半番鸭睾丸发育.

摘要： 哺乳动物X、Y精子虽然来源于相同的精原细胞,在精子形成过程中,细胞间桥使两类精子具有大部分基因的表达产物,但是雄性性别传递偏移、性别偏移及其他相关研究表明,X、Y精子膜蛋白差异仍然存在。随着蛋白质组学和蛋白质分离技术的研究进展,使这种细微差异膜蛋白的分离成为可能。X、Y精子差异膜蛋白的分离为利用免疫反应控制家畜性别提供新的技术途径。

摘要： 在哺乳类,精原干细胞是成体内唯一可将遗传信息传递给下一代的干细胞,它对生物学、医学和生物技术等方面的研究具有很重要的意义.但国内与之相关的研究甚少,本研究的目的在于寻找一种体外长期培养小鼠精原干细胞的方法.为本实验室更深入地进行精原干细胞方面的研究奠定基础.将经Percoll不连续密度梯度分离的7～8日龄小鼠的精原细胞(纯度为37.02﹪和69.06﹪),接种到两种不同体系中进行培养:A培养体系是以自身的支持细胞为饲养层.补充添加10﹪、10﹪→2.5﹪和2.5﹪三个不同浓度的血清.B培养体系是以小鼠胎儿成纤维细胞为饲养层,补充添加2.5﹪和10﹪的血清.研究结果表明:(1)A体系中,采用10﹪→2.5﹪的血清更适合于精原细胞的体外长期培养.在整个培养过程中都可观察到精原细胞的增殖,并最终可形成集落.(2)B体系中,采用2.5﹪的血清更适合于精原细胞的体外长期培养.精原细胞的增殖能力有限,仅在培养的前3d可见到细胞的明显增殖行为,形成的集落维持4个月左右无明显变化.尽管两体系中精原细胞均可增殖,但二者的增殖行为及形成的集落的形态都不尽相同.

摘要： 干细胞研究已成为21世纪现代生命科学研究的最终汇集点之一.精原干细胞可以体外培养、冷冻保存、遗传操作及移植,因而,在医学、生物学及动物科学方面均有广泛应用前景.本文根据目前较为公认的精原干细胞理论,主要论述了生精上皮中精原细胞的分类,精原干细胞的定义、起源、分布、识别及其生物学特性,以促进国内在人类及动物雄性生殖细胞方面的研究和利用.

摘要： 本文介绍了精原细胞(spermatogonium)的分类及一般生物学特性，讨论了精原干细胞移植的研究进展，探讨了精原干细胞移植在治疗男性不育症过程中的应用前景。

摘要： 本发明属于鱼类生殖细胞的分离技术领域，具体涉及一种精原细胞分离液及其在分离纯化云斑尖塘鳢精原细胞中的应用，为开发一种适用于云斑尖塘鳢精原细胞的分离纯化方法，本发明提供一种精原细胞分离液，该分离液包括精巢消化液和percoll梯度溶液，所述精巢消化液包括L‑15培养基、Ⅳ型胶原酶、DNA酶I、胰酶、EDTA，所述percoll梯度溶液由perocll稀释液对100％percoll储存液稀释不同倍数后得到，该分离液用于分离纯化云斑尖塘鳢精原细胞，可以获得高纯度和高活性的云斑尖塘鳢精原细胞，可以在体外增殖和分化。

摘要： 本发明属于基因工程技术领域，涉及一种敲除小鼠Tet3基因的SgRNA导向序列、条件性诱导小鼠精原细胞Tet3基因敲除细胞系及其构建方法及其应用，基因编辑脱靶效应是困扰基因编辑技术应用的一个重要方面，本专利筛选获得的Tet3基因靶点是以整个小鼠基因组筛选出唯一靶向序列的靶点，基因组内无其他类似序列，所以理论上不存在脱靶效应，同时采用诱导型敲除的方法，及时关闭Cas9蛋白表达，也可以有效防止脱靶产生，当添加Dox 24h后小鼠精原细胞基因组得到97％以上敲除，Dox诱导前后作为很好的试验组和对照组，本发明所建立的细胞系和方法可以广泛应用于Tet3和其他基因功能研究。

摘要： 本发明公开一种3D体外培养中华乌塘鳢精原细胞产生功能精子的方法，包括以下步骤：（1）对分离的中华乌塘鳢精巢进行消毒、清洗、剪碎，加入精巢消化液进行消化，然后经过滤网过滤去除未消化的细胞碎片或者细胞团，制得精巢单细胞悬液；精巢单细胞悬液加入percoll梯度溶液中进行离心，分离得到精原细胞；percoll梯度溶液由22~30%和35~45%两种浓度组成percoll溶液；（2）精原细胞转移到3D培养皿中，用精子诱导培养基进行培养；精子诱导培养基包括基础精子培养基和性激素，进一步还包括褪黑素。该方法从精原细胞的分离、培养和诱导条件进行了优化和改良，提高体外培养精原细胞产生具有功能的精子的效率。

摘要： 本发明公开了一种与用于检测精原细胞瘤的试剂盒，其含有能能够检测与精原细胞瘤相关的分子标记的检测试剂。本发明的精原细胞瘤的试剂盒具有检测简单、准确、快速，特异性强等优点。

摘要： 本发明属于鱼类生殖细胞的分离技术领域，具体涉及一种精原细胞分离液及其在分离纯化云斑尖塘鳢精原细胞中的应用，为开发一种适用于云斑尖塘鳢精原细胞的分离纯化方法，本发明提供一种精原细胞分离液，该分离液包括精巢消化液和percoll梯度溶液，所述精巢消化液包括L‑15培养基、Ⅳ型胶原酶、DNA酶I、胰酶、EDTA，所述percoll梯度溶液由perocll稀释液对100％percoll储存液稀释不同倍数后得到，该分离液用于分离纯化云斑尖塘鳢精原细胞，可以获得高纯度和高活性的云斑尖塘鳢精原细胞，可以在体外增殖和分化。

摘要： 本发明属于基因工程技术领域，涉及一种敲除小鼠Tubb4b基因的SgRNA导向序列、诱导精原细胞Tubb4b基因敲除细胞系及其构建方法。本发明提供了高效的Tubb4b基因敲除导向序列，敲除效率高，达到理想效果。本发明所建立的细胞系及其构建方法可以广泛应用于Tubb4b和相关基因功能研究和产品开发应用。

摘要： 本发明属于基因工程技术领域，涉及一种敲除小鼠Tet3基因的SgRNA导向序列、条件性诱导小鼠精原细胞Tet3基因敲除细胞系及其构建方法及其应用，基因编辑脱靶效应是困扰基因编辑技术应用的一个重要方面，本专利筛选获得的Tet3基因靶点是以整个小鼠基因组筛选出唯一靶向序列的靶点，基因组内无其他类似序列，所以理论上不存在脱靶效应，同时采用诱导型敲除的方法，及时关闭Cas9蛋白表达，也可以有效防止脱靶产生，当添加Dox 24h后小鼠精原细胞基因组得到97％以上敲除，Dox诱导前后作为很好的试验组和对照组，本发明所建立的细胞系和方法可以广泛应用于Tet3和其他基因功能研究。

摘要： 本发明公开一种3D体外培养中华乌塘鳢精原细胞产生功能精子的方法，包括以下步骤：（1）对分离的中华乌塘鳢精巢进行消毒、清洗、剪碎，加入精巢消化液进行消化，然后经过滤网过滤去除未消化的细胞碎片或者细胞团，制得精巢单细胞悬液；精巢单细胞悬液加入percoll梯度溶液中进行离心，分离得到精原细胞；percoll梯度溶液由22~30%和35~45%两种浓度组成percoll溶液；（2）精原细胞转移到3D培养皿中，用精子诱导培养基进行培养；精子诱导培养基包括基础精子培养基和性激素，进一步还包括褪黑素。该方法从精原细胞的分离、培养和诱导条件进行了优化和改良，提高体外培养精原细胞产生具有功能的精子的效率。

摘要： 本发明涉及大泷六线鱼的精原细胞培养基及培养方法，属于细胞生物学领域，所述的精原细胞培养基包括以下成分：混合培养基、体积比为1％MEM非必需氨基酸、体积比为1％双抗、体积比为1％鱼血清、生长因子、营养物质、5％胎牛血清。所述的混合培养基为L‑15和DMEM/F12以质量比1：1混合。利用所述培养基和培养方法对体外分离和纯化的大泷六线鱼精原细胞进行培养，能够获得纯度较高且具有干性和增殖活性的精原细胞，为海水鱼类精原细胞移植及精原细胞增殖分化的调控机制研究提供基础实验材料。

摘要： 本发明属于昆虫生物学领域，具体涉及一种快速鉴定家蚕精巢中有核精子和精原细胞的方法。该快速鉴定家蚕精巢中有核精子和精原细胞的方法为：先将解剖得到的家蚕精巢置于TC‑100完全培养基中去除精巢表面粘附组织后，撕开所述家蚕精巢，对含有有核精子和精原细胞的样品进行涂片、固定、染色操作后置于荧光显微镜下观察。本发明的快速鉴定家蚕精巢中有核精子和精原细胞的方法在操作过程中可有效维持有核精子和精原细胞的完整轮廓，在荧光显微下拍照观察即可实现有核精子和精原细胞的鉴定。