植原体

摘要： 板栗黄化皱缩病是一种植原体病害,近年来北京怀柔在2007年发现了板栗上的植原体,并定名为板栗黄化皱缩病(Chinese chestnut yellow crinkle,Cn YC)[1]。朱晓清等[2]分别于2009和2010年板栗生长季节对北京市怀柔区渤海镇和九渡河镇2个板栗主产区进行板栗黄化皱缩病抽样调查,证实了发病植株中植原体的存在。植原体是不具备细胞壁结构的原核生物,目前已发现与植原体相关病害多达1000余种,在我国发生的也有100多种,常引起如丛枝.

摘要： 黄化病是1种严重危害海南槟榔产业的毁灭性传染病害,在海南槟榔主产区均有发生,给槟榔产业造成了严重的经济损失。概述了槟榔黄化病的发生危害、地理分布、病原的鉴定和检测、综合防控措施及存在的问题等,以期为黄化病的深入研究和持久防控提供参考。

摘要： 为探明云南蔗区甘蔗白叶病植原体的昆虫介体及优势种群,丰富甘蔗植原体病害相关理论和技术基础,制定适用于甘蔗白叶病的综合防控措施,2019年采用寻集法和扫网法对甘蔗白叶病发病最为严重的云南省临沧市耿马蔗区进行甘蔗白叶病植原体昆虫介体调查和巢式PCR检测分析。调查检测结果显示,采集到的大青叶蝉(Tettigoniella viridis)和条纹平冠沫蝉(Clovia conifer)2种昆虫介体均被检测为阳性,是甘蔗白叶病植原体的自然携带者,说明2种叶蝉可能为甘蔗白叶病植原体潜在昆虫介体;大青叶蝉若虫呈强阳性,初步确定为优势种群。鉴于目前云南蔗区甘蔗白叶病植原体传播方式主要是带毒蔗种和叶蝉类昆虫介体,建议建立甘蔗无病健康种苗繁育基地,及时杀灭蔗园中叶蝉类昆虫介体,从源头上控制甘蔗白叶病的扩散蔓延,降低田间自然传播速度。

摘要： 为研究WPR基因家族在泡桐丛枝病叶片黄化中的作用,在泡桐全基因组水平上,采用生物信息学方法对WPR基因家族成员进行鉴定、进化分析、染色体定位、共线性、基因结构、蛋白性质、顺式作用元件和表达量的研究。结果表明,白花泡桐基因组中共存在16个WPR基因,分布在9条染色体上,其中,12个基因具有种内共线性,9个基因与拟南芥具有共线性;所有WPR家族成员均含光响应、防御响应及激素响应元件。通过对植原体侵染后的转录组和互作蛋白分析,发现PfWEB3、PfWPRb2、PfWPRb3和PfPMI2可能与丛枝植原体侵染后泡桐叶片黄化有关。

摘要： 为明确引起板栗黄化皱缩病(Chinese chestnut yellow crinkle,CnYC)的病原菌及分类地位,探索一套有效的综合防控技术,利用形态学和分子生物学相结合的方法对引起该病害的病原菌进行了鉴定,并采用田间打孔吊袋输液的方法筛选农用抗生素。结果表明:引起板栗黄化皱缩病病原菌为Candidatus Phytoplasma castaneae,属于16SrXIX-A亚组,菌株编号为CnYC-Hebei;盐酸四环素对该病害防治效果较好,其防效达到85.3%。采收后落叶前利用盐酸四环素打孔吊袋输液方法,并结合落叶后修剪发病枝条、展叶期叶面喷施芸苔素内酯和叶面肥以及生长期诱杀刺吸式昆虫,从病害诊断、防病虫以及壮树3个方面集成了板栗黄化皱缩病三位一体的综合防控技术,对该病害进行了田间综合防控示范试验。调查分析显示,综合防控组的防治效果达到86.4%、单果重为8.1 g、饱果率为91.9%、栗蓬大小为49.3 mm×42.3 mm,叶片大小为18.1 cm×7.5 cm,这些指标均显著好于对照组(P<0.05),使发病植株恢复了生产,为开发安全有效的CnYC综合防控技术提供了参考。

摘要： 为确定贵州主栽樱桃品种玛瑙红、黑珍珠发生的花变叶、丛枝现象的病原分布、种类及其分类地位,本研究优化植原体16 S rDNA基因通用引物对R 16 mF 2/R 16 mR 2和R 16 F 2 n/R 16 R 2的巢氏PCR反应体系,同时对86个樱桃样品总DNA进行巢式PCR扩增,对扩增PCR产物进行克隆、测序及序列分析。结果表明,纳雍县、福泉市、乌当区等地样品植原体检出率高达100%;威宁县、沿河县、大方县分别为40.74%、66.67%和40%;序列同源性比较表明,获得的GZ-1、GZ-2植原体序列属于16 Sr V组;系统进化树及虚拟RFLP分析显示,GZ-1植原体序列属于16 Sr V-B亚组成员,GZ-2序列为16 Sr V组新的亚组。本研究确定了贵州主栽樱桃品种的植原体病害侵染情况,明确了其分类地位,为该病害检测和防控提供一定理论依据。

摘要： 1当前常见的大枣病虫害1.1病害1.1.1枣疯病枣疯病在某些地区又被称为丛枝病,其主要由植原体引发,该病会导致枣树的激素系统出现失衡,进而导致叶片黄化和果实畸形等情况。1.1.2枣锈病枣锈病由担子菌亚门锈菌所引起,其危害主要表现在叶片,在枣锈病发生初期,叶片背部会出现斑点,斑点颜色由浅灰色逐渐发展为黄褐色,如果此阶段降水量大,则病斑将进一步发展,甚至导致枣树叶片大量脱落。

摘要： 2020年在广东省湛江市遂溪县田间发现表现明显丛枝、小叶,类似植原体感染症状的花生病株。本研究利用分子生物学技术对其病原进行鉴定。以花生病叶的总DNA为模板,利用植原体16S rRNA和SecY基因通用引物进行PCR扩增,获得广东花生丛枝病植原体(PnWB-GDSX-2020)16S rRNA基因片段(1 430 bp,GenBank登录号为MZ427281)和SecY基因片段(1 709 bp,GenBank登录号为MZ437794)。序列一致性和系统进化分析显示,PnWB-GDSX-2020的16S rRNA序列与16SrⅡ-A、16SrⅡ-D和16SrⅡ-V亚组植原体一致性最高,亲缘关系最近;进一步利用iPhyClassifier对16S rRNA序列进行在线虚拟RFLP分析,结果显示,PnWB-GDSX-2020的虚拟RFLP图谱与16SrⅡ-V亚组的参照株系‘Praxelis clematidea’ phyllody phytoplasma (GenBank登录号:KY568717)酶切图谱一致,相似系数为1.00。因此,PnWB-GDSX-2020属于16SrⅡ-V亚组成员。所获得的PnWB-GDSX-2020 Sec Y基因序列与花生丛枝植原体的一致性最高,亲缘关系最近。本文确定了广东花生丛枝病相关植原体的分类地位,为当地病害诊断、检测以及防控提供科学依据。

摘要： 为研究新疆7个地区柳树花变叶病为何种病原物所造成,本研究以分子生物学技术对其进行鉴定。通过CTAB法提取柳树总DNA,对其16S rRNA基因和tuf基因进行PCR扩增,将测序得到的基因片段通过Blast比对、同源性比较,构建系统进化树和16S rRNA虚拟RFLP分析。结果显示,PCR扩增分别获得16S rRNA(1238 bp)和tuf(824 bp)的片段,证明该病害与植原体有关,将其命名为柳树花变叶植原体(WPP);16S rRNA序列分析表明,WPP与中国桃黄化植原体(‘Prunus persica’yellows phytoplasma)、枣疯病('Ziziphus jujuba’witches'-broom phytoplasma)、杏褪绿卷叶植原体(Apricot leaf roll phytoplasma)同源性均为99.68%;16S rRNA虚拟RFLP分析结果表明,WPP与枣疯病株系(GenBank登录号:AB052876)有99.8%的相似性,虚拟RFLP模式与16SrV-B亚组的参考模式相同,相似系数为1.00,进一-步证明WPP为16SrV-B亚组成员。WPP tuf基因与榆树黄化组(EY)同源性达99%以上,系统进化树显示,柳树花变叶植原体与榆树黄化组(16SrV)植原体聚为--枝。柳树花变叶植原体属于16SrV.B.tuf-B亚组。

摘要： 槟榔是海南省重要的热带经济作物,受多种病害组成的槟榔病理性黄化的影响,尤其是槟榔黄化病,使槟榔产量造成严重损失。为明确当前海南省槟榔病理性黄化的发生分布情况及槟榔黄化病的危害情况,本研究对全省槟榔病理性黄化的发生分布进行调查,并对全省采集的槟榔黄化样品进行植原体检测分析。结果显示,当前海南省槟榔病理性黄化发生面积为38300.04hm^(2),占全省槟榔种植面积的33.27%,主要发生在海南东部、南部及中部市(县),三亚市发生率最高,为77.48%,万宁市发生面积最大,为9734.66 hm^(2),西部市(县)的病理性黄化发生率均低于10%;当前海南省槟榔黄化病发生面积为32 102.38 hm^(2),占全省槟榔种植面积的27.89%,全省各市(县)均有槟榔黄化病发生,主要在海南中部和东部地区的发病率较高,琼海市、定安县、文昌市、屯昌县及琼中县的植原体检出率分别高达100%、100%、100%、98%、95.38%,除临高县、白沙县及东方市外,其余市(县)检出率均高于50%,万宁市槟榔黄化病发生面积最大,为7909.41 hm^(2),其次为琼海市;每个市(县)槟榔植原体在各树体间的含量分布差异较大,定安县植原体的平均含量最高,为1443.36copies/μL,向周边市(县)递减,除了在海南东北部市(县)的槟榔植原体含量较高外,其他市(县)植原体含量较低。以上研究表明,当前海南槟榔病理性黄化发生严重,植原体是造成海南省槟榔病理性黄化的主要病原之一。

摘要： 本研究采用巢式PCR检测方法,首次在云南保山蔗区的甘蔗上检测到检疫性病害SCWL植原体,证实SCWL植原体已传入云南.从检测阳性的样品中随机选取17个Nest-PCR产物进行测序与分析,17个序列完全一致(GenBank登录号KC662509),BLAST检索结果表明该序列是导致甘蔗白叶病植原体基因组16S rRNA基因间隔区序列,其与GenBank中公布的SCWL植原体基因组相应区段序列高度同源,同源性在99.05％～100％之间.田间调查结果显示:粤糖86-368高度感病,病株率一般为13.11％～52.46％,严重田块高达100％;甘蔗感染SCWL植原体后,株高、茎径、成茎率和单茎重明显降低或减少,造成大幅度减产减糖.每公顷蔗茎产量降低8685kg～42600kg,平均降低22425kg;甘蔗糖分降低4.68％～7.58％百分点,平均降低5.54％百分点.SCWL是极其危险的一种植原体病害,可对甘蔗造成毁灭性灾害.建议有关部门立即采取相应的预防与管理措施,防止其扩散蔓延,确保甘蔗安全生产和蔗糖产业可持续发展.

摘要： 植原体(Phytoplasma)是一类侵染植物维管束韧皮部、无细胞壁的细菌，尚不能在人工培养基上培养。引起众多植物病害，其典型症状包括丛枝、花变态、叶片黄化、植株矮化等。本研究在病害发生规律和防治对策上，结合传统普查和分子技术手段，明确了野生酸枣丛枝与枣疯病发生和流行的重要关系;证实了无症带毒和营养繁殖方式(种根、种苗、嫁接接穗和砧木等)是病害传播和流行的关键因子;鉴定了小麦蓝矮、泡桐丛枝植原体的其他寄主植物;确定了桃树黄化的一种新虫传媒介。在病害防治方面，泡桐和枣树脱毒快繁技术及推广技术体系趋于完善;病健组培苗间以及在田间病树砧木上嫁接待测品系的抗性鉴定技术新颖、有效，对抗病品系筛选和抗病品种选育产生了重要作用，现己获得了一批泡桐和枣树抗性资源或优质抗病品种。提出了以脱毒苗木和抗病品种推广利用为基础的病害综合管理对策，己对这类病害的综合治理水平的提高产生深远的影响。

摘要： 由植原体引起的樱桃致死黄化病害首先在四川西昌发现，根据16S rRNA基因序列将其划分为组榆树黄化组(16S rV)。通过实验检测樱桃致死黄化植原体(CLY)在樱桃各组织内的分布规律，实验结果推测从健康樱桃中扩增到的DNA片段为樱桃叶绿体的部分序列。在进行非特异性RT-qPCR时，感病和健康樱桃中都有荧光变化曲线，但其溶解曲线峰值不同，因此可以通过溶解曲线的峰值加以区分RT-qPCR中的特异性和非特异性扩增。将扩增的樱桃叶绿体部分序列与CLY植原体16S rDNA(684～1000)片段进行比对，相似性为71.38%。进一步比对CLY的全长16SrDNA序列与野生草莓叶绿体序列相似性为69.22%。从比对序列中选取差异较大的序列作为特异探针R16Sprb_CLY行特异性RT-qPCR检测，除了能够检测樱桃致死黄化植原体外还能检测到同组枣疯植原体，其他泡桐丛枝、苦楝丛枝和板栗黄化皱缩植原体中都检测不到。而用引物R16nF/R16nR进行非特异RT-qPCR，该引物能够检测出16Sr1组的泡桐丛枝、苦楝丛枝及16SrXIX组的板栗黄化皱缩植原体，因此，用引物R16nF/R16nR进行非特异性RT-qPCR可以定量检测不同组的植原体。用特异性RT-qPCR检测嫁接传病樱桃不同部位植原体含量，结果表明嫁接樱桃苗部位最近的新发腋芽浓度最高，其次为病组培苗，再次为田间样品，嫁接部位同侧细根也检测到植原体，但浓度很低，而其他部位皆未检测到植原体存在。

摘要： 本文对国内几种由植原体引起的植物病害的分布、寄主、症状、病原分类及其综合防治措施进行综述,展望了植原体防治的前景。

摘要： 介绍植原体分类和植原体病害检测的概况及研究现状,概述了植原体检测相关的各种分子技术的基本方法和特点.

摘要： 植原体病原的鉴定目前主要依靠PCR-RFLP电泳技术，结果重复性差，操作繁琐，而且在没有大量对照植原体材料的情况下很难准确鉴定。本文建立了植原体数字化基因标准电子图谱库及比对鉴定软件DNA-FP Clusterl.0。利用该软件在指纹图谱数据库的基础上对未知的植原体序列进行分析比对，分析得到的植原体RFLP指纹图谱相似度树状图与用传统方法(MEGA 4.1)生成的植原体系统进化树结果一致，与LeeIng-Ming等人提出的分类方法一致。

摘要： 本文利用植原体16S rDNA基因保守序列通用引物对P1/P7与R16F2n/R16R2对河南焦作、祁县地区发生的表现叶片黄化症状的杨树植株总DNA进行巢式PCR扩增，结果得到约1.2kb的特异性DNA片段，而未表现症状植株以及空白对照中均未扩增出特异性条带。将扩增到的DNA克隆并测序，利用最大简约法构建16S rDNA系统进化树。经过序列同源性比较，结果表明克隆到的植原体归属于植原体16SrI组。

摘要： 对采自昆明寻甸的泡桐丛枝病材料,利用巢式扩增,得到16SrDNA基因片段约1.2kb.通过将16SrDNA基因片段与已知植原体16Sr各组成员进行同源性比较,确定寻甸泡桐丛枝病植原体归属于植原体16SrDNA I-D亚组,从而确定了其分类地位.

摘要： 通过组织培养初步建立了不同品种枣的组培苗，在获得感染枣植原体的病组织培养苗和健康组培苗的基础上，无菌条件下开展组培苗间嫁接传病试验。通过不同的嫁接组合接种反应比较，以及用直接和套式多聚酶链式反应检测病原，发现枣对植原体侵染的早期反应会出现过敏性坏死，病菌在植株体内的运转等。丛枝症状的产生和严重程度与植原体浓度的增加呈正相关性，而且反应强度受到品种的抗病性和生理状态、病菌接种浓度、培养基中激素和其他成分的比例及环境条件的影响。

摘要： 中国板栗属壳斗科栗属是我国重要的经济树种之一。1990年首先在怀柔区马道峪种植的板栗上发现一种叶部病害，表现症状为叶片沿叶脉黄化、皱缩、枝条变脆、节间明显缩短，严重时导致板栗果皮褶皱、瘪小乃至空壳甚至整株不结果实，长期以来被推断为生理性或病毒性病害。在前期确定了怀柔板栗黄化皱缩病原为植原体侵染的基础上，对该病害的症状发展和变化进行了系统的观察和识别，调查了该病在怀柔板栗主产区的分布和为害程度，并通过药剂治疗试验、植原体检测及刺吸式昆虫调查，进一步明确了该病为我国板栗上新报道的植原体病害。虽然涉及该病害防治相关的一些关键问题尚待研究，但根据已获得的试验结果和结论，参考其他植原体防治经验，怀柔板栗黄化皱缩病的防治对策应包括划定不同程度病区，杜绝从病区、病树上采集接穗做嫁接繁殖材料，建立无病苗繁育基地和无病良种采穗圃，彻底清除零星发生栗园病树，重病园应该接抗病穗、开展药剂治疗、加强水肥管理以提高抗病性等措施。本研究为下一步深入研究该病害的发生发展规律、开展检疫性风险分析、制定有效地防治对策和为生产提供适用防治技术和咨询奠定了良好的基础。

摘要： 本发明公开了桑树植原体ltrA基因及其在桑树植原体分子检测中的应用。本发明首先提供了一种桑树植原体的ltrA基因，该基因可用于桑树植原体的检测。并以ltrA基因为靶基因设计了一组桑树植原体特异性检测引物，进一步构建了桑树植原体检测用试剂盒和检测方法，该方法以及试剂盒的操作简便快速，检测结果准确可靠，特异性强、灵敏度高，检测灵敏度高达1.0×10‑6ng/μL，能够在桑树植原体引起的相关病害出现明显的病症、病害大爆发前，及时对桑园中桑树植原体引起的相关病害进行监测和控制，为检验检疫工作提供了技术支持，具有非常好的推广应用前景。

摘要： 本发明涉及植原体探针，包含该探针的基因芯片以及利用该基因芯片检测植原体的方法。该植原体探针为针对11种植原体的特异性探针，点样制成基因芯片，检测植原体包括以下步骤：植物DNA样品提取；利用通用引物对样品特异性片段扩增并对产物进行标记；杂交：将待测标记的样品加入杂交缓冲液中，混匀成杂交混合液，将混合液滴加入基因芯片的杂交区域，放入杂交盒杂交；取出杂交后的芯片并干燥后，进行扫描及数据分析，判断样品中有无植原体的存在。利用本发明的探针制成的基因芯片可快速、高效、高通量检测11种植原体。

摘要： 本发明公开了桑树植原体ltrA基因及其在桑树植原体分子检测中的应用。本发明首先提供了一种桑树植原体的ltrA基因，该基因可用于桑树植原体的检测。并以ltrA基因为靶基因设计了一组桑树植原体特异性检测引物，进一步构建了桑树植原体检测用试剂盒和检测方法，该方法以及试剂盒的操作简便快速，检测结果准确可靠，特异性强、灵敏度高，检测灵敏度高达1.0×10‑6ng/μL，能够在桑树植原体引起的相关病害出现明显的病症、病害大爆发前，及时对桑园中桑树植原体引起的相关病害进行监测和控制，为检验检疫工作提供了技术支持，具有非常好的推广应用前景。

摘要： 本发明涉及植原体探针，包含该探针的基因芯片以及利用该基因芯片检测植原体的方法。该植原体探针为针对11种植原体的特异性探针，点样制成基因芯片，检测植原体包括以下步骤：植物DNA样品提取；利用通用引物对样品特异性片段扩增并对产物进行标记；杂交：将待测标记的样品加入杂交缓冲液中，混匀成杂交混合液，将混合液滴加入基因芯片的杂交区域，放入杂交盒杂交；取出杂交后的芯片并干燥后，进行扫描及数据分析，判断样品中有无植原体的存在。利用本发明的探针制成的基因芯片可快速、高效、高通量检测11种植原体。

摘要： 本发明公开了一种植原体病害的柯氏法则验证方法，包括以下步骤：(1)鉴定：提取疑似感染植原体病害的植株总DNA，利用PCR技术检测，测序，从分子水平确定该病害属于植原体病害；(2)传染：将疑似感染植原体病害的植株通过菟丝子与长春花连起来，观察长春花的表现症状，确认感病；(3)回接：将感病长春花通过菟丝子与步骤(1)的植株相同的健康植株相连，观察健康植株的表现症状，提取感病后的健康植株总DNA，PCR扩增测序；(4)比对：将步骤(3)的测序结果与步骤(1)的测序结果进行同源性比较，完成植原体病害的“柯氏法则”验证。本发明提供了一种对植原体病害间接的检测手段，为植原体病害的鉴定提供更进一步的证据。

摘要： 本发明提供了泡桐丛枝植原体胸苷激酶基因的扩增引物，扩增获得了两种基因型；构建了泡桐丛枝植原体胸苷激酶的原核表达载体，诱导表达并纯化获得了6×His/PaWB TDK‑1融合蛋白和6×His/PaWB TDK‑2融合蛋白；以融合蛋白为免疫原免疫兔获得了兔多克隆抗体；该多克隆抗体与PaWB TDK‑1蛋白和PaWB TDK‑2蛋白均可发生免疫反应；借助免疫印迹法、免疫荧光显微镜法、免疫电子显微镜法，证明该多克隆抗体可较好地用于泡桐丛枝植原体及其胸苷激酶表达的检测。本发明为进一步研究植原体增殖致病机理奠定了基础，也为农林生产中检测泡桐丛枝植原体提供了新的技术手段。

摘要： 本发明公开了一种基于染色质开放性测序技术研究植原体病害的方法，属于分子生物学领域；包括下述步骤：(1)样本处理：分别取健康植物样本与植原体侵染植物样本，裂解植物细胞获得细胞核；(2)文库制备及测序：利用步骤(1)获得的细胞核，使用Tn5转座酶酶切并纯化，回收DNA片段，构建高通量测序文库后进行测序；(3)生物信息学分析：对健康植物样本与植原体侵染植物样本的测序结果进行Peak分析，筛选植原体病害相关基因。本发明方法可为研究植原体病害发病相关转录因子功能的预测和验证奠定基础，提供借鉴。

摘要： 本发明公开了一种通过免疫标记建立植原体在介体和植株间循回传播的方法。所述植原体为小麦蓝矮病植原体，所述介体为异沙叶蝉；所述方法包括：在异沙叶蝉饲毒后不同时间，利用小麦蓝矮植原体表面免疫膜蛋白抗体免疫标记感染小麦蓝矮植原体的异沙叶蝉组织，观察不同时间段小麦蓝矮植原体在异沙叶蝉不同组织的分布，明确循回传播过程。本发明探明了小麦蓝矮植原体在介体异沙叶蝉体内循回传播途径，为后续研究病原与介体的互作奠定基础。

摘要： 本发明公开了一种通过免疫共沉淀建立植原体与微管蛋白互作的方法。所述目标蛋白为微管蛋白，所述植原体为小麦蓝矮植原体，所述介体为异沙叶蝉；所述方法包括：介体目标蛋白基因全长克隆，免疫共沉淀验证植原体免疫膜蛋白与介体目标蛋白的互作，植原体免疫膜蛋白与介体目标蛋白在Sf9昆虫细胞共定位，酵母双杂交复验，明确植原体与微管蛋白互作。本发明探明了小麦蓝矮植原体与异沙叶蝉微管蛋白产生互作作用，该方法避免了验证植原体与介体目标蛋白的互作作用时出现假阳性的情况，并对植原体与介体目标蛋白发生互作的位置进行了定位。

摘要： 本发明具体涉及泡桐丛枝植原体PaWB thyA基因扩增与分型的引物、试剂盒及方法。本发明提供了：(1)PaWB thyA基因扩增方法和引物PIthyAF/PIthyAR，所述方法和引物可扩增PaWB thyA基因ORF全长及其上游97bp和下游95bp的序列；(2)PaWB thyA基因分型引物PathyA F/PathyA ORFR，所述引物可把PaWB thyA基因分为两种基因型；(3)PaWB thyA基因的两种基因型PaWB thyA‑1和PaWB thyA‑2及序列；(4)PaWB thyA基因快速分型试剂盒及方法。相比于通过测序鉴定基因型的方法，本发明提供的试剂盒与方法更简单、更快速、成本更低。本发明为后续研究PaWB thyA基因型功能以及PaWB thyA基因型与植原体增殖致病的相关性奠定了基础。