小肠上皮细胞

摘要： 本试验旨在研究精氨酸(L-Arginine,L-Arg)对热应激奶牛原代小肠上皮细胞增殖和凋亡的影响,探究精氨酸对热应激奶牛小肠上皮细胞损伤的修复作用。首先以体外培养的奶牛原代小肠上皮细胞为模型,分为对照组(Con组,37°C)、试验组[42°C培养6 h后,更换成无精氨酸培养基(HS组)或者不同浓度(2、4、6、8、10 mmol·L^(-1))精氨酸的培养基在37°C培养12 h],采用CCK-8检测细胞活力,筛选出精氨酸最佳修复浓度。然后采用生长状态良好的奶牛原代小肠上皮细胞,分为对照组(Con组,37°C培养)、热应激组(HS组,42°C培养6 h后37°C培养12 h)、6 mmol·L^(-1)精氨酸组(6 mmol·L^(-1)L-Arg组,42°C培养6 h后更换6 mmol·L^(-1)精氨酸培养基37°C培养12 h),DAPI染色观察细胞形态变化,微板法检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,流式细胞仪检测细胞周期,实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测半胱氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-9(Caspase-9)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)以及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的mRNA和蛋白的相对表达量来研究精氨酸对热应激奶牛小肠上皮细胞增殖及凋亡的影响。结果表明:在2~6 mmol·L^(-1)范围内,与HS组相比,添加L-Arg可提高热应激小肠上皮细胞的活性,其中浓度为6 mmol·L^(-1)时活力最高(P<0.05)。故选用6 mmol·L^(-1)作为后续试验中L-Arg组的试验浓度。与Con组相比,HS组细胞核形态不规则,染色质浓缩,LDH的漏出量显著升高(P<0.05),S期细胞比率显著减低(P<0.05);促凋亡基因Bax、Caspase-9、Caspase-3的mRNA和蛋白相对表达量显著升高(P<0.05),而抑凋亡基因Bcl-2的蛋白含量显著降低(P<0.05)。上述结果表明,热应激促进了奶牛小肠上皮细胞的凋亡。与HS组相比,添加6 mmol·L^(-1)L-Arg后的奶牛小肠上皮细胞染色质浓缩减少,LDH漏出量显著降低(P<0.05),S期细胞比率显著升高(P<0.05);促凋亡基因Bax、Caspase-3、Caspase-9的mRNA和蛋白相对表达量显著降低(P<0.05),而抑凋亡基因Bcl-2的mRNA和蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。由此可见,6 mmol·L^(-1)精氨酸能够促进体外培养的热应激奶牛小肠上皮细胞增殖,减少细胞的凋亡,缓解热应激对奶牛小肠上皮细胞的损伤。

摘要： 猪只的肠道总面积大约有400 m^(2)左右,是动物最大的免疫器官和防御系统,肠道内淋巴组织构成了机体最大的免疫屏障,小肠上皮细胞内的T淋巴细胞可占全身体T淋巴细胞总量的60%多,肠道里边的第一层是黏膜层,表面有大量的肠绒毛,黏膜层的下面主要是T淋巴细胞和树突细胞,是胃肠道的屏障,能起到很好的保护作用。

摘要： 目的研究阿魏酸对电离辐射诱导的人小肠上皮细胞HIEC6炎症的抑制作用及其机制。方法(1)分别用Coγ射线4,6,8,10和14 Gy单次照射HIEC6细胞,24 h后CCK-8法检测细胞存活率,荧光探针DCFH-DA法检测细胞内活性氧水平。(2)设细胞对照组、照射组、照射+阿魏酸0.01,0.10和1.00μmol·L^(-1)组,各组培养12 h后,照射+阿魏酸组加入阿魏酸;继续培养12 h后,照射和照射+阿魏酸组以Coγ射线10 Gy单次照射。照射后24 h,ELISA检测细胞上清中白细胞介素1β(IL-1β)含量,免疫荧光法检测细胞Nod样受体家族蛋白3(NLRP3)蛋白表达水平,实时定量PCR和Western印迹法检测沉默信息调节因子1(Sirt1)、NLRP3、胱天蛋白酶1、活化胱天蛋白酶1及IL-1βmRNA和蛋白表达水平。结果(1)与细胞对照组比较,Coγ射线4,6,8,10和14 Gy照射后24 h,细胞存活率明显降低(P<0.01),细胞内活性氧水平显著升高(P<0.01),其中10 Gy最为明显。(2)与细胞对照组相比,照射组细胞上清IL-1β含量显著增加(P<0.01),NLRP3蛋白表达增强(P<0.05),Sirt1 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01),NLRP3、活化胱天蛋白酶1和IL-1βm RNA和蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01)。与照射组相比,照射+阿魏酸0.01,0.10和1.00μmol·L^(-1)组细胞上清中IL-1β含量显著减少(P<0.01),NLRP3蛋白表达明显降低(P<0.01),Sirt1mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01),NLRP3、活化胱天蛋白酶1和IL-1βmRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论阿魏酸可能通过激活Sirt1抑制NLRP3炎症小体表达,从而减轻电离辐射诱导的小肠上皮细胞HIEC6的炎症反应。

摘要： 目的在正常人小肠上皮细胞系FHs 74 Int中观察中脑星形胶质细胞源性神经营养因子(mesencephalic astrocyte-derived neurotrophic factor,MANF)对内质网(endoplasmic reticulum,ER)应激诱导的肠道上皮细胞损伤的保护作用。方法分别用ER应激诱导剂tunicmycin(TM)或TNF-α刺激FHs 74 Int细胞,观察内源性MANF的表达;将MANF-GFP质粒转染FHs 74 Int细胞,用免疫印迹法(Western blot)观察MANF对ER应激指标的影响;CCK8细胞增殖实验检测MANF对肠上皮细胞发生ER应激后增殖能力的影响;Western blot和流式细胞术(Flow cytometry)检测MANF对ER应激后细胞凋亡的影响。结果ER应激可以诱导小肠上皮细结论MANF通过抑制小肠上皮细胞内的ER应激,促进细胞增殖,减少细胞凋亡,从而发挥肠黏膜屏障保护作用。

摘要： 目的 探讨LncRNA-TUG1在脂多糖(LPS)诱导的小肠黏膜上皮细胞损伤中的作用和机制.方法 使用LPS处理HIEC-6人类小肠黏膜上皮细胞24h构建脓毒症损伤模型.全转录组RNA测序分析LPS处理后HIEC-6细胞中的mRNA、microRNA及lncRNA表达变化.实时荧光定量(qRT-PCR)及 western blot 检测 LncRNA-TUG1、microRNA-132-3p(miR-132-3p)、SIRT1 mRNA及SIRT1蛋白的表达在LPS处理后HIEC-6细胞中的表达变化.体外转染技术改变LncRNA-TUG1、microRNA-132-3p 及 SIRT1 的表达水平.qRT-PCR 及 western blot 分析 LncRNA-TUG1对miR-132-3p及SIRT1的表达调控.CCK-8及流式细胞术分析LncRNA-TUG1、miR-132-3p及SIRT1对HIEC-6细胞增殖和凋亡的影响.双荧光素酶报告分析验证LncRNA-TUG1、miR-132-3p及SIRT1之间的靶向关系.统计学分析采用SPSS 17.0进行,两组间的差异比较采用独立样本t检验.结果 RNA测序结果显示LPS处理后的HIEC-6细胞中出现LncRNA-TUG1及SIRT1表达降低(t=3.26,P＜0.05以及t=2.55,P＜0.05),但是 miR-132-3p 表达升高(t=4.12,P＜0.05).在体外细胞实验中,LPS处理后HIEC-6细胞后,LncRNA-TUG1及SIRT1表达降低(t=5.69,P＜0.05以及 t=5.712,P＜0.05),而 miR-132-3p 表达升高(t=3.88,P＜0.05).LncRNA-TUG1 过表达能够增加LPS处理后细胞的增殖率(t=6.55,P＜0.05)同时降低其凋亡率(t=3.94,P＜0.05).上调 LncRNA-TUG1 可以降低 miR-132-3p 的表达(t=4.66,P＜0.05),同时增加 SIRT1 mRNA(t=3.91,P＜0.05)及蛋白的水平.转染miR-132-3pmimic可以抑制SIRT1 mRNA(t=4.08,P＜0.05)及蛋白的水平.在LPS处理的细胞中,与仅转染pcDNA3.1-LncRNA-TUG的细胞相比,共转染miR-132-3pmimic和siRNA-SIRT1的细胞增殖率较低(t=4.55,P＜0.05以及 t=5.67,P＜0.05),凋亡率较高t=3.90,P＜0.05以及 t=4.22,P＜0.05).结论 lncRNA-TUG1 可能作为 ceRNA 调控 miR-132-3p/SIRT1 从而减轻 LPS 造成的 HIEC-6细胞损伤.干预 lncRNA-TUG1/microRNA-132-3p/SIRT1 调控通路可能成为防治脓毒症引起小肠损伤的潜在策略.

摘要： 为探究丙酸对山羊小肠上皮细胞(GIEC)糖异生途径关键基因表达是否有影响,试验分为2个部分:第1部分分为4个处理组,分别添加0、0.75、1.50和3.00 mmol/L丙酸培养GIEC,6h后收集细胞提取总RNA;第2个部分分为2个处理组,分别添加0和3.00 mmol/L丙酸培养GIEC,培养3、6、12和24 h时,收集细胞提取总RNA.通过qRT-PCR对糖异生途径关键基因的mRNA表达量进行测定.结果 表明,0.75和1.50 mmol/L丙酸对PC、FBP1和PGC1A的mRNA表达量无显著影响(P＞0.05);1.50 mmol/L丙酸可显著增加PCK2的mRNA表达量(P＜0.05);3.00 mmol/L丙酸可显著增加PCK2和PGC1A的mRNA表达量(P＜0.05),还可上调PC和FBP1 mRNA表达量但无差异(P＞0.05).与未处理组相比,3.00 mmol/L丙酸在6h时可极显著上调PCK2和PGC1A的mRNA表达量(P＜0.01),还可增加PC和FBP1的mRNA表达量(P＞0.05);在12～24 h对糖异生途径关键基因没有影响(P＞0.05).综上,丙酸可以在山羊小肠细胞中诱导糖异生途径关键基因PCK2、PC、FBP1和PGC1A的mRNA表达,并且PCK2在山羊小肠上皮细胞糖异生途径中发挥关键作用.

摘要： 本试验旨在建立鸽小肠上皮细胞体外分离培养和鉴定的方法体系,为研究鸽小肠上皮细胞的营养转运吸收、细胞增殖代谢等机制提供原代细胞模型.采用胶原酶消化法和组织块贴壁法分离鸽小肠上皮细胞,并通过相差消化法对其纯化,最后运用免疫荧光分析和基因表达分析鉴定鸽小肠上皮细胞.结果表明,2种方法均可成功分离培养鸽小肠上皮细胞,细胞呈铺路石状排列;细胞角蛋白8免疫荧光染色呈阳性;紧密连接蛋白基因CLDN-3和CLDN-4均有表达;细胞生长曲线呈"S"形.综上所述,本试验成功建立了鸽小肠上皮细胞体外分离培养体系,为后续开展雏鸽肠道营养研究提供了细胞模型.

摘要： 目的探讨晚期氧化蛋白产物(AOPPs)在小肠上皮细胞的上皮间质转化(EMT)中的作用,为研究炎症性肠病(IBD)患者小肠纤维化的发病机制提供依据。方法体外培养小鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6,采用次氯酸氧化修饰大鼠血清白蛋白(RSA)的方法体外制备AOPPs。将IEC-6细胞分为AOPPs组、RSA组和空白对照组。采用50、100、200、400μg/ml的AOPPs干预IEC-6细胞作为AOPPs组,50、100、200、400μg/ml的RSA干预IEC-6细胞作为RSA组,空白对照组不做任何干预。干预24 h后观察细胞形态并采用流式细胞术检测细胞凋亡,统计分析凋亡率最高时AOPPs的浓度。采用该浓度的AOPPs干预IEC-6细胞,流式细胞术检测48、72 h的细胞凋亡并统计分析不同时间点凋亡率的差异。荧光定量PCR检测AOPPs组、RSA组和空白对照组E-cadherin、纤维连接蛋白(Fibronectin)及参与调节细胞EMT过程的转录因子Snail、Slug的mRNA表达以及细胞外基质胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)的mRNA表达。结果AOPPs可以诱导IEC-6细胞的凋亡,并具有时间及浓度依赖效应(P<0.05);400μg/ml的AOPPs干预72 h细胞的凋亡率最高,达到(17.30±1.03)%。AOPPs明显下调IEC-6细胞E-cadherin的mRNA表达,而明显上调Fibronectin及CollagenⅠ的mRNA表达,同时转录因子Snail和Slug mRNA表达也明显增加(均P<0.05)。结论AOPPs通过诱导小肠上皮细胞凋亡,上调细胞的转录因子Snail和Slug的基因表达,抑制E-cadherin的转录,同时上调Fibronectin和CollagenⅠ基因表达,促进肠上皮细胞EMT,在IBD小肠纤维化中发挥一定作用。

摘要： 目的:研究缬沙坦对双氯芬酸钠相关小肠上皮细胞的保护作用,观察RAS中ACE2、AngⅡ、Ang(1-7)及Mas受体表达的变化,探讨缬沙坦保护作用的可能机制.rn 方法:研究分为空白对照组、模型组、缬沙坦组.空白对照组不予任何干预,模型组采用800μM双氯芬酸钠干预24小时,缬沙坦组用10μM缬沙坦在造模前1小时干预,后予造模剂量双氯芬酸钠共培养24小时.采用透射电镜观察细胞超微结构;RT-qPCR检测AC E2-mRNA、AngⅡ-mRNA及Mas-mRNA表达;Western Blot检测ACE2、AngⅡ、Mas及P-p38MAPK蛋白表达;免疫荧光定位细胞中Ang(1-7)表达。rn 结果:透射电镜可见空白对照组细胞间存在连接致密的带状结构，有微绒毛从细胞表面伸出，线粒体丰富，嵴清晰可见。模型组细胞表面微绒毛脱落，细胞间连接较松散，线粒体肿胀，嵴变短减少，胞质内可见较多空泡。缬沙坦组细胞间亦可见紧密连接，线粒体肿胀不明显，空泡较模型组明显减少。rn 结论:缬沙坦对双氯芬酸钠相关IEC-6细胞损伤具有保护作用，其机制可能与上调ACE2-Ang(l-7)-Mas轴，抑制AnyⅡ、p-p38MAPK等炎症因子表达，减轻炎症反应相关。

摘要： 取18日龄的SPF鸡胚,分别采用组织块培养法、胰蛋白酶、胶原酶Ⅰ和嗜热菌蛋白酶消化法分离和体外培养小肠上皮细胞.结果表明:组织块培养法所获得的上皮细胞纯度较低;胰蛋白酶消化后多为单细胞,细胞贴壁和生长能力较弱;胶原酶Ⅰ单独消化50min或嗜热菌蛋白酶单独消化110min以及胶原酶Ⅰ、嗜热菌蛋白酶联合消化后均可得到大量隐窝细胞团块,经低速离心去除单细胞、差速贴壁除去成纤维细胞,可获得较纯的上皮细胞.分离的细胞接种培养12～24h贴壁,48～72h细胞团中的细胞向四周蔓延,形成一群群的细胞集落,6～7d细胞汇合成片,成"铺路石样",细胞多呈扁平多角状,椭圆状,单层生长,边界清晰,互不重叠.经形态学观察、扫描电镜鉴定、碱性磷酸酶染色和免疫组化鉴定为上皮细胞.

摘要： 本试验以分离自仔猪空肠上皮的IPEC-1细胞为模型,探讨丙氨酰-谷氨酰胺二肽(Ala-Gln)对仔猪小肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin定位与表达的影响.试验选取同代IPEC-1细胞接种至6块6孔细胞培养板上,分别用含0(对照组)、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00mmol/L Ala-Gln的DMEM高糖培养基进行培养,待细胞生长融合达70％以上时,对occlu-din进行免疫荧光定位和蛋白质印迹(Western Blot)检测.结果表明:1)对照组细胞可见其胞质内存在团状的阳性荧光染色,而细胞间连接处阳性荧光染色不明显;随着Ala-Gln浓度的升高,细胞间连接处荧光信号逐渐增强,细胞轮廓更加清晰,而胞质内荧光信号逐渐减弱.2)各添加组IPEC-1细胞间occludin的相对表达量均极显著高于对照组(P＜0.01).随着Ala-Gln浓度的升高,occludin的相对表达量呈先增后减的趋势,添加量为2.00mmol/L时达到峰值,且极显著高于其他添加量(P＜0.01).由此可知,Ala-Gln可以上调仔猪小肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin的表达,促进细胞间紧密连接结构的形成,进而增强仔猪小肠黏膜的屏障功能.

摘要： 本试验旨在研究雌马酚对于鸡小肠上皮细胞(IEC)氧化应激模型的影响，为雌马酚对生产的实际应用提供参考。结果显示，加人双氧水的各处理组较对照组均显著降低细胞存活率(P0.05)，但是双氧水+SOOnM雌马酚组存活率较双氧水组略有提高。生化指标测定结果显示，雌马酚可以缓解双氧水引起的细胞MDA含量升高(P<0.05)，并能够显著提高细胞中SOD的活力(P<0.05)，其中双氧水+100 nM雌马酚组效果最佳。综合以上结果，推测雌马酚有一定缓解IEC氧化应激的作用，其中100 nM雌马酚效果最佳。

摘要： 本研究旨在以仔猪小肠上皮细胞系IPEC-1为模型,探讨丙氨酰-谷氨酰胺二肽(Ala-Gln)对仔猪小肠上皮细胞紧密连接蛋白Occludin定位与表达的影响,进而为揭示Ala-Gln促进仔猪小肠黏膜屏障功能的作用机制提供理论依据.试验选取同代IPEC-1细胞接种至6孔细胞培养板,用含0、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00mmol/L Ala-Gln的高糖DMEM进行培养,待细胞生长融合达70％以上时进行免疫荧光定位和Western blot.结果表明,(1)不含Ala-Gln的对照组细胞可见其胞质内团状的阳性荧光染色,而细胞间连接处阳性荧光染色不明显;随着Ala-Gln含量的增加,试验组细胞间连接处阳性荧光信号逐渐增强,细胞轮廓更加完整,而胞质内荧光信号逐渐减弱;(2)各Ala-Gln处理组IPEC-1细胞紧密连接蛋白Occludin的表达量均显著高于对照组(P＜0.01).随着Ala-Gln含量的升高,Occludin的表达量呈先增后减的趋势.添加量为2.00mmol/L时Occludin的表达量达到峰值,且显著高于其它处理组(P＜0.01).由此可知,Ala-Gln可以促进IPEC-1细胞紧密连接蛋白Occludin的表达,促进小肠上皮细胞间紧密连接结构的形成,进而维护仔猪小肠的屏障功能.

摘要： 目的:观察四君子汤多糖对小肠上皮IEC-6细胞迁移多胺信号通路钙离子调控的影响,探讨四君子汤促进胃肠黏膜损伤修复的作用机制.rn 方法:在IEC-6细胞实验中,设正常对照组,阳性对照组,四君子汤多糖低、中、高剂量组(40、80、160mg/L);负荷实验则设模型组(α-二氟甲基鸟氨酸,DFMO),各用药组在加受试药同时加入DFMO;划痕法制造细胞迁移模型;相差倒置显微镜观察细胞迁移情况;HPLC法测定细胞内多胺(精脒和精胺)含量;RT-qPCR和Western Blot法分别检测瞬时受体电位通道1(TRPC1)mRNA和蛋白表达;Western Blot法检测磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)蛋白表达;酶联免疫法检测三磷酸肌醇(IP3)含量;流式细胞仪检测细胞内游离钙离子浓度([Ca2]cyt);无钙培养条件是以不含钙离子的细胞培养液代替常规的含钙细胞培养液.rn 结果:与正常对照组比较,四君子汤多糖各剂量组可促进细胞迁移、增加细胞内精脒和精胺含量、提高TRPC1 mRNA及蛋白表达、提高PLC-γ1蛋白表达和IP3含量、增加[Ca2+]cyt(P＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,四君子汤多糖各剂量组可逆转DFMO所致的细胞迁移抑制、细胞多胺含量降低、TRPC1 mRNA和蛋白表达降低、PLC-γ1蛋白表达和IP3含量降低、[Ca2+]cyt降低(P＜0.05,P＜0.01);与正常对照组(含钙培养)比较,无钙培养可致细胞迁移抑制(P＜0.01);与正常对照组(无钙培养)比较,各剂量四君子汤多糖可改善无钙培养所致的细胞迁移抑制(P＜0.05,P＜0.01),但不能使细胞迁移恢复正常水平.rn 结论:四君子汤多糖促进细胞迁移与其作用于多胺调控信号通路有关,其中对Ca2+调控是其关键指标.

摘要： 目的:考察白术提取物(AMK)对小肠上皮IEC-6细胞迁移过程多胺介导信号通路中钙离子调控的影响,探讨白术促进胃肠黏膜损伤修复的作用机制。rn 方法:在刀片划痕法细胞迁移模型上观察白术提取物对细胞迁移的影响;流式细胞仪检测细胞质游离钙离子水平([Ca2+]cyt);荧光定量PCR法检测钙通道蛋白瞬时受体电位阳离子通道1(TRPC1) mRNA表达;Western Blot法检测TRPC1蛋白表达。rn 结果:①白术提取物(100mg/L和200mg/L,下同)能促进IEC-6细胞迁移、增加[Ca2+]cyt、提高TRPCl mRNA和蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01).②白术提取物可逆转多胺合成抑制剂(DFMO)所致的细胞迁移抑制、[Ca21cyt降低、TRPC1 mRNA和蛋白表达降低(P＜0.01).③若去除了细胞外的Ca2+(使用无Ca2+培养液),则不但空白对照组出现显著的细胞迁移抑制(P＜0.01),且白术提取物促进细胞迁移的作用程度也明显弱于使用含Ca2+培养液时(P＜0.01).rn 结论:白术提取物促进小肠上皮细胞迁移的作用与影响多胺介导信号通路中钙离子调控有关,主要作用途径可能是通过促进细胞外Ca2+内流而增加[Ca2+]cyt,另一较弱的作用途径可能是增加细胞内钙库释放Ca2+.

摘要： 目的:观察白术提取物对小肠上皮细胞(IEC-6)迁移及细胞内多胺(腐胺、精脒和精胺)含量的影响,探讨白术促进胃肠黏膜修复的作用机理.rn 方法:手术刀片划痕法建立IEC-6细胞损伤后迁移模型,柱前衍生高效液相色谱法测定细胞内多胺含量.观察白术提取物在DFMO存在或不存在情况下,对细胞迁移及细胞内多胺含量的影响.rn 结果:白术提取物(100μg/mL或200μg/mL)能促进IEC-6细胞迁移,能逆转由DFMO所致的细胞迁移抑制;白术提取物(100μg/mL或200 μg/mL)可提高细胞迁移过程中细胞内多胺含量,能逆转由DFMO所致的细胞内多胺含量降低作用.rn 结论:益气健脾中药白术对胃肠黏膜损伤的修复作用机理可能与其提高细胞多胺含量促进细胞迁移有关.

摘要： Endotoxemia is the crucial factor contributes to Alcoholic liver disease (ALD)，and the disruption of intestinal tight junction caused by alcohol is one of the main underlying mechanisms. Berberine is used wildly to treat gastrointestinal disorders and was reported that it could restore the gut permeability. This study aimed to investigate whether berberine could improve intestinal epithelial permeability increased by alcohol and the pathway. Caco-2 cells monolayer were treated with various concentration of alcohol to induce barrier damage, and the effect of berberine on tight junction was analyzed by measuring the transepithelial electrical resistance (TEER).Subcellular localization of tight junction protein ZO-1was observed by immuno?uorescence microscopy. The expression level of ZO-1, myosin light chain kinase (MLCK) and MLCK activation were analyzed by Western blot. And intracellular calcium influx was measured by flow cytometry. The results showed that berberine treatment could significantly down-regulate epithelial permeability increased by alcohol, up-regulate ZO-1protein expression, improve intracellular calcium influx, and inhibit phosphorylation of MLCK in intestinal epithelium. According to results, we concluded that berberine can ameliorate alcohol induced intestinal epithelial tight junction damage in vitro, and this function may be through inhibiting MLCK signaling pathway. So berberine may be one effective therapeutic agent to attenuate the endotoxemia in ALD.

摘要： 目的:观察甘草糖提取物对小肠上皮细胞（IEC-6）迁移及细胞内多胺（腐胺、精脒和精胺）含量的影响。rn 方法：划痕法造细胞损伤后迁移模型，柱前衍生-高效液相色谱法测定细胞内多胺含量。观察甘草糖提取物对细胞迁移及细胞内多胺含量的影响，对钾通道抑制剂4-氨基吡啶（4-AP）致细胞迁移抑制的影响，对多胺合成抑制剂二氟甲基鸟氨酸（DFMO）致细胞迁移抑制和多胺合成抑制的影响。rn 结果：甘草糖提取物能促进细胞迁移；可逆转由4-AP或DFMO所致的细胞迁移抑制；可提高细胞迁移过程中细胞内多胺（腐胺、精脒和精胺）含量；可逆转由DFMO所致的多胺含量降低。rn 结论：甘草对胃肠粘膜损伤的修复作用可能与其提高细胞多胺含量，促进细胞迁移有关。

摘要： 本发明属于生物技术领域，公开了一种用于体外细胞分化的混合胶，所述混合胶由基质胶和I型鼠尾胶原按照45%：55%的体积百分比混合得到，所述I型鼠尾胶原的浓度为1.1mg/mL。将制得的混合胶与胚胎肝内胆管上皮细胞混合，可用于定向分化为成熟的肝内胆管上皮细胞和胆管结构，该方法操作简单，耗时短，成本低，且构建获得的细胞模型稳定，可用于慢性、炎性及自身免疫性等胆管疾病的治疗及机制研究。

摘要： 本发明公开了坛紫菜多糖在健胃、预防或修复肠胃损伤中的应用。本发明公开了坛紫菜多糖能够对损伤的IEC‑6细胞起到增殖修复作用，能够有效增强IEC‑6细胞的黏附作用；并对IEC‑6细胞中Cdc‑42,Rac‑1,Par‑3,aPKC,PKCβII,paxillin,FAK和GAPDH等8种蛋白的表达上调。将其作为食品例如米稀的原料时，不仅能提高米稀的营养价值，丰富米稀的口感风味，还具备健胃、预防和修复肠胃损伤的效果。

摘要： 本发明提供一种功能性肝(前体)细胞或功能性小肠上皮(前体)细胞的制备方法，其包括在抗生素存在下培养包含肝(前体)细胞或者小肠上皮(前体)细胞的分离细胞群的步骤。另外，本发明还提供一种包含功能性肝前体细胞的实质上均匀的分离细胞群，其中，CYP3A4在所述功能性肝前体细胞中的表达水平与其在HepaRG(注册商标)细胞株中的表达水平相比至少增大5倍。

摘要： 本公开提供了促进多能干细胞分化成胸腺上皮细胞或胸腺上皮细胞祖细胞的方法，以及从所述方法获得的细胞，以及包含此类细胞的溶液、组合物和药物组合物。本公开还提供了将胸腺上皮细胞或胸腺上皮细胞祖细胞用于治疗和预防疾病、产生器官以及用于其他用途的方法，以及试剂盒。

摘要： 本发明的问题在于提供一种针对干眼症等与复层扁平上皮细胞相关的疾病有效的新的治疗剂。本发明是一种包含间充质干细胞的分泌物的复层扁平上皮细胞的正常分化‑成熟促进剂。优选地，上述分泌物不含动物血清，上述间充质干细胞为来源于脂肪的间充质干细胞、来源于脐带的间充质干细胞或来源于骨髓的间充质干细胞，上述复层扁平上皮细胞为选自由角膜上皮细胞、结膜上皮细胞、表皮角化细胞、口腔上皮细胞、会厌上皮细胞、食道上皮细胞、阴道上皮细胞、声带皱襞上皮细胞、鼻腔上皮细胞以及鼻前庭上皮细胞组成的群组中的至少一种。

摘要： 本发明公开了一种纯化子宫腔上皮细胞、腺上皮细胞和基质细胞的制备方法及其应用，该制备方法通过两种不同的细胞消化液对样品依次进行消化处理得到高纯度的子宫腔上皮细胞、腺上皮细胞和基质细胞。本发明中的制备方法克服了现有的技术问题，能高效制备高纯度的完全分离的子宫腔上皮细胞、腺上皮细胞以及基质细胞，而且所需的试剂仅包括消化酶，而且制备得到的细胞均为活细胞，可进一步应用于下游多种分子生物学和细胞生物学的研究。

摘要： 本发明属于生物技术领域，公开了一种用于体外细胞分化的混合胶，所述混合胶由基质胶和I型鼠尾胶原按照45%：55%的体积百分比混合得到，所述I型鼠尾胶原的浓度为1.1mg/mL。将制得的混合胶与胚胎肝内胆管上皮细胞混合，可用于定向分化为成熟的肝内胆管上皮细胞和胆管结构，该方法操作简单，耗时短，成本低，且构建获得的细胞模型稳定，可用于慢性、炎性及自身免疫性等胆管疾病的治疗及机制研究。

摘要： 本发明涉及一种，属于生物医药技术领域。本发明提供了一种诸葛菜碱D即OV16单体化合物在制备抑制小肠隐窝上皮细胞铁死亡药物中的应用，所述诸葛菜碱D OV16可以抑制Erastin诱导的大鼠小肠隐窝上皮细胞的铁死亡，是Erastin诱导的大鼠小肠隐窝上皮细胞铁死亡的有效抑制剂。经实验证实，所述OV16处理14.5Gy腹部照射钴源的小鼠C57品系，可以保护小鼠肠隐窝组织的辐射损伤，为今后诸葛菜碱D OV16治疗和预防肠辐射损伤的研究提供了理论基础。

摘要： 本发明提供了一种猪小肠上皮细胞表达的PGC启动子及其应用，该PGC启动子核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，本发明通过在线网站预测PGC可靠启动子区；化学合成方法合成引物；通过限制性酶切位点MluⅠ和NheⅠ，将PGC启动子序列插入pGL3‑Basic载体，得到PGC‑双荧光素酶重组质粒；转染大肠杆菌进行质粒扩增，提取质粒，测序验证；转染入猪小肠上皮细胞，发现猪源PGC启动子可在猪小肠上皮细胞中启动双荧光素酶基因表达，说明所述启动子能够调控下游基因在猪小肠上皮细胞中表达，有利于构建稳定高效的小肠转录调控元件，在制备转基因动物和小肠疾病基因治疗研究中具有应用价值。

摘要： 本发明属于引入外来遗传物质对细胞的修饰领域，具体涉及一种永生化荷斯坦公犊牛小肠上皮细胞系及其构建方法和应用。本发明的永生化荷斯坦公犊牛小肠上皮细胞系，其保藏号为CGMCC No.45029，于2021年12月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。本发明的永生化荷斯坦公犊牛小肠上皮细胞系具有以下特点：其一是筛选获得的细胞活力强，传代80代后仍能保持高的细胞活性及生物学特性，其二是由于采用非病毒转染思路，对细胞的影响较病毒转染更小，应用范围大，结果的评价性更加准确。