摘要:WHO已经确认,H5N1亚型高致病性禽流感病毒HPAIV已经跨越种间屏障,可以使人类感染发病甚至死亡.为给人类该病毒感染建立动物模型,本研究应用经SPF鸡胚增殖的虎源HPAIVA/Tiger/Harbin/01/2003(H5N1)株,其对MDCK细胞的TCID50为10-8/0.1ml.分别经气管和鼻腔接种家猫和小鼠,进行该病毒的家猫和小鼠的初步人工感染实验.实验于BSLⅢ动物实验室中进行,观察期为21天.实验结果如下:1、家猫人工感染实验:选取对该病毒HI抗体小于1∶2的3月龄健康家猫6只,随机分为A、B两组,每组3只.A组为实验组,每猫气管内注射该病毒的稀释液1ml,含毒量为106个TCID50;B组为对照组,每猫气管内注射PBS1ml.2、小鼠人工感染实验结果:取18-20克普通1级雄性昆明小鼠55只,随机分成11组,每组5只,第1-10组为实验组,经乙醚麻醉后,分别滴鼻接种10-1-10-10的该病毒稀释液50ul/只,于P3实验室的负压隔离器中隔离饲养观察.结果:第1-6组实验小鼠,从实验的第2-3天,开始出现食欲减少,体重下降,至第5-6天出现死亡;第7、8组实验小鼠部分死亡,体重下降不明显,第9-10组小鼠无1例死亡,体重持续增加.死亡小组用Reed-Muench法计算,其LD50为10-7.25/0.05ml;尸检第1-7组实验小鼠肺炎病变严重,肺指数(肺重/体重)达2-3﹪,病理组织学光镜观察,肺泡间隔增宽,肺泡腔内有较多量的炎性细胞和蛋白样浆液渗出:用H5N1亚型HPAIV单克隆抗体和生物素标山羊抗小鼠二抗做死亡小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑免疫组织化学染色,结果发现其表达与肺炎病变呈正相关.在肺的超薄切片标本中,在透射电子显微镜下,于小鼠肺泡扁平上皮细胞表面和肺泡腔中发现流感病毒样颗粒.用SPF鸡胚从死亡小鼠的肺、脑标本中分离到了所接种的HPAIV;在第7、8组耐过小鼠和第9-10组小鼠血清中,检出1∶2-8的该病毒HI抗体.对照组小鼠始终未见异常,体重持续增加,血清HI抗体均小于1∶2.上述试验初步表明,H5N1亚型HPAIV可感染家猫和小鼠,这两种动物可用于该病毒的动物模型研究.