鸭疫里默氏菌DnaK、OmpA和OmpA-DnaK蛋白的免疫原性

摘要

【背景】鸭疫里默氏菌(Riemerella anatipestifer,RA)可引起鸭等多种禽类败血症和浆膜炎,给禽养殖业造成严重经济损失。蛋白疫苗是预防RA感染的重要策略之一。目前,有关RA重组蛋白免疫原性报道较少,且其应用也受到单一蛋白抗原诱导的特异性免疫反应不足的限制。【目的】探究分子伴侣DnaK、外膜蛋白A(outer membrane protein A,OmpA)和OmpA-DnaK蛋白疫苗在鸭体内诱导的免疫应答,评估其免疫原性,为RA疫苗抗原研发提供依据。【方法】克隆DnaK和OmpA基因并分别与pET-32a(+)载体相连,利用限制性酶切位点Nco I和BamH I将OmpA连接至DnaK基因上游,经原核表达和纯化制得重组蛋白DnaK、OmpA和OmpA-DnaK。3种重组蛋白分别皮下免疫雏鸭2次,检测其血清抗体滴度、淋巴细胞增殖和细胞因子(IL-2和IL-4)水平;以RA-GH5肌肉注射攻毒,检查其组织病理学变化及免疫保护率。【结果】成功表达了DnaK、OmpA和OmpA-DnaK重组蛋白,分子量分别约为90、60和130 kDa。3种蛋白疫苗均能诱导宿主产生体液和细胞免疫应答,并且诱导的免疫保护反应减轻了RA引起的组织病理学损伤。与单独DnaK或OmpA免疫相比,OmpA-DnaK显著提高了血清抗体滴度、淋巴细胞增殖指数,以及IL-2和IL-4细胞因子水平。OmpA-DnaK对鸭的免疫保护率为50%,DnaK和OmpA均为30%。【结论】RA重组OmpA、DnaK和OmpA-DnaK蛋白疫苗均能诱导鸭免疫反应,并且DnaK与OmpA融合表达可引起更强的体液免疫和细胞免疫应答。