TGFβRⅡ-siRNA表达质粒构建及干扰效应鉴定

摘要

目的通过构建转化生长因子βⅡ型受体小干扰RNA（TGFβRⅡ-siRNA）的表达质粒,观察其在肝星状细胞中对TGFβRⅡ的表达抑制效果,为研究其阻断肝纤维化作准备。方法根据Ambion公司网上设计软件设计二个siRNA作用靶点,体外合成的相应双链DNA被插入pSilencer2.1-U6质粒中,以脂质体Metafectene 2000转染HSC-T6细胞,利用RT-PCR法和western-blot分别检测对TGFβRⅡmRNA和蛋白干扰效果。结果表达针对TGFβRⅡ-siRNA的siRNA-a和siRNA-b二个质粒是成功构建;与对照组相比,其对TGFβRⅡmRNA表达分别下调到0.89±0.06和0.25±0.03,对TGFβRⅡ蛋白表达分别下调到0.86±0.05和0.23±0.02,转染siRNA-b质粒组显著抑制TGFβRⅡmRNA和蛋白表达（均P＜0.01）,siRNA-a质粒组无统计学意义（均P＞0.05）。结论 TGFRⅡ-siRNA能明显抑制TGFβRⅡ的表达。