二聚化

摘要： [目的]将嗜碱芽孢杆菌丙氨酸消旋酶OF4DadX的N-端结构域分别与多个不同种属的丙氨酸消旋酶C-端结构域重组,探究丙氨酸消旋酶C-端结构域功能.[方法]利用基因拼接构建丙氨酸消旋酶重组基因,通过镍亲和层析纯化酶蛋白,采用D-氨基酸氧化酶偶联法检测重组酶蛋白的酶学特性,借助分子筛和HPLC液相色谱分析其聚合状态及动力学参数.[结果]通过基因拼接构建了12个重组基因,经检测,表达、纯化获得的重组酶蛋白中只有OF4TtDadX240c具有催化活性,其活性仅为OF4DadX的60.54％,酶催化动力学结果显示OF4TtDadX240c催化反应速率Vmax/Km下降约10倍,但其稳定性大幅提高,半衰期比OF4DadX延长约5倍,耐热性提高较明显;聚合状态表明OF4DadX、OF4TMDadX226c和OF4TtDadX240c为二聚体结构,其他酶蛋白均为单体,但OF4TMDadX226c未检测到活性,推测可能是酶催化活性中心移位,未能形成质子转移而失去活性.[结论]丙氨酸消旋酶C-端折叠结构域对消旋酶低聚化、稳定性和酶催化功能具有重要作用.

摘要： 人表皮生长因子受体2(HER2)和HER3在与生长因子神经调节蛋白-1β(NRG1β)结合后,形成一种有效的致癌异基因复合物。在没有任何复合物结构的情况下,HER2和HER3相互作用的机制仍然未知。在一项研究中,研究人员分离了NRG1β结合的近全长HER2-HER3二聚体,并使用冷冻电镜重建了细胞外结构域模块,揭示了HER2-HER3二聚化界面意外的动力学过程。研究发现NRG1β结合的HER3的二聚化臂未被解析,因为载脂蛋白HER2单体没有经历建立HER3二聚化臂结合囊所需的配体诱导的构象变化。

摘要： 目的 原核表达、纯化由人表皮生长因子受体3 (HER3) 183-227aa肽段(HER3Ⅰ)和麻疹病毒蛋白288-302aa肽段(MVF)融合构建的重组肽(MVF-HER3Ⅰ),并制备其多克隆抗体.方法 将MVF与HER3Ⅰ融合构建重组肽MVF-HER3Ⅰ,用化学合成法合成重组肽基因,并将其与pET21b质粒和含有硫氧还蛋白(Trx)基因的pET32a质粒连接构建重组肽表达质粒,重组质粒用双酶切法鉴定.将重组质粒导入到大肠杆菌BL21 (DE3)并进行表达参数优化及诱导表达.融合蛋白依次经镍离子亲和层析、肠激酶酶切和再次镍离子亲和层析制备重组肽.表达和纯化过程中的样品纯度和相对分子质量用SDS-PAGE分析.以纯化的重组肽为抗原免疫大鼠制备多克隆抗体.用ELISA法测定抗重组肽多克隆抗体效价,免疫印迹和免疫沉淀法分析抗重组肽多克隆抗体对重组肽和非变性状态HER3的识别,激光共聚焦法分析抗重组肽多克隆抗体与MCF7细胞的结合,磺酰罗丹明B染色法测定在有无神经调节素刺激下抗重组肽多克隆抗体对高表达HER3的MCF7细胞的增殖抑制作用.结果 成功构建了重组肽的两种表达质粒,重组肽基因不能单独表达,但和Trx融合后可在37°C、0.2 mmol/L IPTG条件下呈可溶高表达.融合蛋白经亲和层析、酶切和再次亲和层析后得到重组肽.重组肽可刺激大鼠产生效价达1∶512 000的抗重组肽多克隆抗体.该抗体不仅可特异性识别重组肽,还可特异性沉淀非变性HER3和结合于MCF7细胞的细胞膜.不管有无神经调节素刺激,该抗体均呈浓度依赖性地抑制HER3高表达的MCF7细胞的增殖(P＜0.01).结论 成功进行了重组肽MVF-HER3Ⅰ的原核表达和纯化,制备并鉴定了抗MVF-HER3Ⅰ多克隆抗体,为在体内外深入研究该抗体对HER3信号通路的影响打下基础.

摘要： 2020年11月3日,我校李校堃院士团队黄志锋教授课题组的研究成果“Curtailing FGF19’s mitogenicity by suppressing its receptor dimerization ability”在国际著名学术期刊《美国国家科学院院刊》(PNAS)在线发表(https://doi.org/10.1073/pnas.2010984117)。该研究提出并验证了“FGF19代谢调控(胆汁酸和葡萄糖代谢)和致肝脏肿瘤双重生物学活性主要取决于其与肝脏受体FGFR4的结合力强弱,进而可通过调控这种结合力实现双重功能拆分”的理论猜想,并基于该理论猜想创新性提出了“受体阈值模型”,进而为安全性FGF19代谢调控新药物的设计和开发提供了新思路和新策略。

摘要： 在该研究中,研究人员报告了一种机制,即致癌的SOX2-GLI1转录复合物能够通过介导唾液酸转移酶ST3GAL1进而调控黑色素瘤的侵袭作用。进一步的研究显示,ST3GAL1能够驱动黑色素瘤的转移。沉默该酶可以抑制黑色素瘤的侵袭作用,并显著降低侵袭性黑色素瘤细胞进入血流,定植于远端器官,并在转移环境中生存的能力。糖基化蛋白分析结果显示,受体酪氨酸激酶AXL是ST3GAL1侵袭性功能的主要效应因子。ST3GAL1能够诱导AXL的二聚化和激活,进而促进黑色素瘤的浸润作用。

摘要： α1-肾上腺素受体(α1-ARs)属于G蛋白偶联受体,包含α1A 、α1B、α1D3种亚型.α1-ARs结构改变可导致其生理功能的改变.该文总结了α1-ARs羧基端截短、二聚化、别构效应和点突变的结构改变,导致其内吞、磷酸化、脱敏以及对激动剂的亲和力等生理功能的变化.

摘要： 为了重组斑马鱼(Danio rerio)双链RNA依赖的蛋白激酶(DrPKR)的双链RNA结合模体1(dsRBM1)和双链RNA结合模体3(dsRBM3)基因,并对重组基因表达的蛋白进行鉴定和功能分析,设计定向删除引物,应用PCR技术扩增DrPKR的dsRBM1和dsRBM3的基因片段,通过重叠PCR技术将dsRBM1和dsRBM3基因重组在一起得到dsRBM13基因,再将dsRBM13构建到原核表达质粒pET32a上并表达和纯化蛋白;通过表达蛋白的二聚化实验和pull down实验对重组蛋白dsRBM13进行体外功能分析.结果:DrPKR的dsRBM1和dsRBM3重组的蛋白dsRBM13可以进行二聚化和多聚化,且能结合Poly I:C(人工合成的dsRNA).因此,重组DrPKR蛋白模体dsRBM13仍然具有二聚化和dsRNA结合活性,提示串联了三个dsRBM的DrPKR激活过程中,串联两个dsRBM对DrPKR激活是必需的,并且在DrPKR结合dsRNA的激活过程中,因dsRNA的长短和空间结构的多样性,含有三个dsRBM的DrPKR可能存在更强和更多的结合方式,因此具有更强的抗病毒免疫反应功能.

摘要： 目的 探讨血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)在高糖诱导大鼠肾小管上皮细胞损伤中的作用及分子机制.方法 体外培养大鼠肾小管上皮细胞,分为正常对照组、高糖组、高糖+血管紧张素Ⅱ1型受体小干扰RNA组、高糖+小干扰RNA阴性对照组.采用免疫印迹法检测受体AT1R、脂联素受体1(AdipoR1),炎性因子核转录因子(NF-κB)、单核细胞趋化因子1(MCP-1)、巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1)及纤维化标记物α-肌动蛋白(α-SMA)、纤维结合蛋白(FN)的表达;采用免疫沉淀法检测AT1 R-AdipoR1二聚化在肾小管上皮细胞中的形成,共聚焦显微镜下观察AT1R、AdipoR1在肾小管上皮细胞中的共定位关系.结果 研究发现,在高糖刺激下,大鼠肾小管上皮细胞中AdipoR1表达无改变,AT1R表达明显增加(P＜0.05);炎性因子NF-κB、MCP-1、MIP-1α表达显著上调(均P＜0.05);纤维化标记物α-SMA、FN表达显著升高(均P＜ 0.01).研究还发现,大鼠正常肾小管上皮细胞中存在AdipoR1-AT1R二聚化,且在高糖刺激下AdipoR1-AT1R二聚体表达较正常对照组明显升高.在转染血管紧张素Ⅱ1型受体小干扰RNA后,AT1R-AdipoR1二聚化明显减少,且明显抑制AT1R表达(P＜0.05),并使肾小管上皮细胞炎性因子NF-κB、MCP-1、MIP-1α表达显著下调(均P＜0.05),使纤维化标记物α-SMA、FN表达明显降低(均P＜0.05).结论 高糖刺激下,AT1R通过促进AT1R-AdipoR1二聚化,介导肾小管上皮细胞炎性损伤及诱导肾小管上皮细胞凋亡,促进其纤维化的发生发展.

摘要： G蛋白偶联受体(G protcin-couple receptor，GPCR)是体内最大的G蛋白超家族膜表面受体，又称为7个a螺旋跨膜蛋白受体，是体内最大的蛋白家族。按GPCRs的一级结构的同源性主要分为A、B、C三族;按氨基酸序列的相似性以及与配基的结合情况GPCRs可以分为5个亚基，本文就GPCRs的结构、分类、GPCRs二聚化以及其固有活性、GPCRs与疾病等方面做了一些介绍。

摘要： 以黄连木油脂为原料,对预酯化和酯交换两步法制备生物柴油的工艺进行了研究.通过正交实验,得出预酯化最佳工艺条件为:醇油摩尔比8∶1、催化剂加入量为0.8%、反应时间为3 h;酯交换最优工艺为:催化剂用量为0.6%、醇油摩尔比6∶1、反应时间为2 h、反应温度为50°C;此条件下制备的生物柴油得率达到92.3%;通过二聚化反应,所得生物柴油的主要性能指标均达到了国家标准GB/T 20828-2007.

摘要： 本文利用标量场方法将哈密顿量对角化,研究了二聚化对形成能隙的影响,给出了零温和有限温度的结果.

摘要： 本文中提供了热化合物单体、热化合物二聚体、热化合物单体构建体、热化合物二聚复合体和相关的基因表达盒载体、细胞、表面装置、组合物方法和系统，其提供了适合于以温度调节方式控制目的载物部分的定位和/或结合的热生物开关。

摘要： 本发明提供一种多孔质成型体的制造方法，其具有下述工序：通过将包含AHCO

摘要： 本发明提供了一种具有优异的丙烯二聚化活性的丙烯二聚化用催化剂以及使用这种催化剂的4-甲基-1-戊烯的制备方法。该丙烯二聚化用催化剂包含一种过渡金属配位化合物[A1]和化合物[B1]，所述化合物[B1]是有机铝氧化合物(b1-2)。本发明提供使用了这种催化剂的丙烯二聚化方法。采用本发明的丙烯二聚化催化剂，可以高活性并高选择性地制备4-甲基-1-戊烯。

摘要： 本发明提供了一种具有优异的丙烯二聚化活性的丙烯二聚化用催化剂以及使用这种催化剂的4-甲基-1-戊烯的制备方法。该丙烯二聚化用催化剂包含一种过渡金属配位化合物[A]，根据需要，还含有选自有机金属化合物(b-1)、有机铝氧化合物(b-2)或与过渡金属配位化合物反应形成离子对的化合物(b-3)组成的组的至少一种化合物[B]。本发明提供使用了这种催化剂的丙烯二聚化方法。

摘要： 本申请描述了HER2二聚化抑制剂类别中第一种，帕妥珠单抗的用途和包含HER2二聚化抑制剂类别中第一种，帕妥珠单抗的制品。本申请描述了下述方法：延长HER2阳性乳腺癌患者群体中的无进展存活；组合两种HER2抗体来治疗HER2阳性癌症，而不增加心脏毒性；治疗早期HER2阳性乳腺癌；通过共施用来自同一静脉内袋的帕妥珠单抗和曲妥珠单抗的混合物来治疗HER2阳性癌症；治疗HER2阳性转移性胃癌；用帕妥珠单抗、曲妥珠单抗和长春瑞滨来治疗HER2阳性乳腺癌；用帕妥珠单抗、曲妥珠单抗和芳香酶抑制剂来治疗HER2阳性乳腺癌；及治疗低HER3卵巢癌、原发性腹膜癌或输卵管癌。

摘要： 本申请描述了HER2二聚化抑制剂类别中第一种，帕妥珠单抗的用途和包含HER2二聚化抑制剂类别中第一种，帕妥珠单抗的制品。本申请描述了下述方法：延长HER2阳性乳腺癌患者群体中的无进展存活；组合两种HER2抗体来治疗HER2阳性癌症，而不增加心脏毒性；治疗早期HER2阳性乳腺癌；通过共施用来自同一静脉内袋的帕妥珠单抗和曲妥珠单抗的混合物来治疗HER2阳性癌症；治疗HER2阳性转移性胃癌；用帕妥珠单抗、曲妥珠单抗和长春瑞滨来治疗HER2阳性乳腺癌；用帕妥珠单抗、曲妥珠单抗和芳香酶抑制剂来治疗HER2阳性乳腺癌；及治疗低HER3卵巢癌、原发性腹膜癌或输卵管癌。

摘要： 本申请描述了HER2二聚化抑制剂类别中第一种，帕妥珠单抗的用途和包含HER2二聚化抑制剂类别中第一种，帕妥珠单抗的制品。具体地，本申请描述了下述方法：延长HER2阳性乳腺癌患者群体中的无进展存活；组合两种HER2抗体来治疗HER2阳性癌症，而不增加心脏毒性；治疗早期HER2阳性乳腺癌；通过共施用来自同一静脉内袋的帕妥珠单抗和曲妥珠单抗的混合物来治疗HER2阳性癌症；治疗HER2阳性转移性胃癌；用帕妥珠单抗、曲妥珠单抗和长春瑞滨来治疗HER2阳性乳腺癌；用帕妥珠单抗、曲妥珠单抗和芳香酶抑制剂来治疗HER2阳性乳腺癌；及治疗低HER3卵巢癌、原发性腹膜癌或输卵管癌。还描述了一种制品，其包含其中有帕妥珠单抗的管形瓶和其上提供安全性和/或功效数据的包装插页；一种制备所述制品的方法；及一种确保与其相关的、帕妥珠单抗的安全和有效使用的方法。另外，本申请描述了一种静脉内(IV)袋，其含有适于对癌症患者施用的、帕妥珠单抗和曲妥珠单抗的稳定混合物。

摘要： 本发明提供了一种具有优异的丙烯二聚化活性的丙烯二聚化用催化剂以及使用这种催化剂的4-甲基-1-戊烯的制备方法。该丙烯二聚化用催化剂包含一种过渡金属配位化合物[A1]和化合物[B1]，所述化合物[B1]是有机铝氧化合物(b1-2)。本发明提供使用了这种催化剂的丙烯二聚化方法。采用本发明的丙烯二聚化催化剂，可以高活性并高选择性地制备4-甲基-1-戊烯。

摘要： 本发明提供了一种具有优异的丙烯二聚化活性的丙烯二聚化用催化剂以及使用这种催化剂的4－甲基－1－戊烯的制备方法。该丙烯二聚化用催化剂包含一种过渡金属配位化合物[A]，根据需要，还含有选自有机金属化合物(b－1)、有机铝氧化合物(b－2)或与过渡金属配位化合物反应形成离子对的化合物(b－3)组成的组的至少一种化合物[B]。本发明提供使用了这种催化剂的丙烯二聚化方法。

摘要： 本发明公开了一种利用RIP3分子二聚化/多聚化人工诱导细胞发生程序性坏死的方法。所述RIP3是介导细胞发生程序性坏死的开关蛋白。本发明人工构建了带有聚化接头的RIP3融合蛋白，表达此融合蛋白的细胞可以在聚化诱导剂的刺激下发生坏死性死亡。这种方法有望用于针对程序性坏死的抑制剂的筛选。