表达条件

摘要： 克隆太平洋牡蛎精氨酸激酶(CG-AK)基因,导入大肠杆菌(BL21(DE3))中,然后筛选重组菌株.通过SDS-PAGE对重组菌株中太平洋牡蛎精氨酸激酶(CG-AK)的诱导表达条件进行探究,经Ni2+亲和层析柱纯化,通过SDS-PAGE、质谱(MALDI-TOF-MS)、圆二色(CD)光谱等方法从相对分子量、一级结构以及二级结构综合鉴定了重组CG-AK的准确性,同时使用SDS-PAGE和Western blot检测重组CG-AK的表达,并利用酶联免疫吸附(ELISA)对其免疫原性进行鉴定.成功克隆表达并鉴定了CG-AK,其最佳诱导表达条件为18°C诱导14h,具有良好的免疫原性.为国内过敏原的标准化生产提供理论支持,也为后续牡蛎过敏疾病的精准诊断、治疗及脱敏方法奠定了良好的分子生物学基础.

摘要： [目的]优化基因工程菌的诱导表达条件,以提高抗呋喃它酮代谢物衍生物单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达量.[方法]采用液体发酵法培养抗AMOZ衍生物单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白的基因工程菌,分别研究不同宿主菌、培养基、初始pH、诱导时期、诱导时间和蛋白诱导表达剂异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactopyranoside,IPTG)对融合蛋白表达量的影响,并通过蛋白质印迹法和直接竞争酶联免疫分析法对其活性进行鉴定.[结果]以E.coli BL21(DE3)作为宿主菌,在以初始pH为7.0的SB液体培养基作为发酵培养基,将含有目的蛋白的基因工程菌培养至OD600为0.6时,用浓度为0.6 mmol/L的诱导表达剂IPTG诱导表达9 h的条件下,抗AMOZ衍生物单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白的表达量由最初的7.94％增加到了11.45％,总体增加了约3.51％,且融合蛋白具有良好的生物活性.[结论]成功提高了抗AMOZ衍生物单链抗体在大肠杆菌中的可溶性表达量,为后期大规模生产抗AMOZ衍生物单链抗体奠定了一定的基础.

摘要： 为了研究重组谷氨酰胺转胺酶突变体(microbial transglutaminase mutant,MTG-MUT2)的分离纯化、糖基化和催化应用,将毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115用于高密度发酵表达MTG-MUT2.首先,通过毕赤酵母高密度发酵获得粗酶液,组氨酸标记亲和层析法分离纯化得到高纯度的MTG-MUT2,酶活力为12.3 U/mL.与粗酶比较,蛋白纯化2.7倍,回收率为87.4％.接着,采取分子筛分离MTG-MUT2的3种不同成分,研究糖基化对酶活性的影响.研究发现MTG-MUT2的酶活性主要由其糖基化蛋白决定,N282位点的糖基化对酶的活性起很大作用.最后,将该酶用于L-赖氨酸(660 mmol/L)和L-谷氨酰胺(600 mmol/L)的催化反应,反应产物(谷氨酰胺二肽)的拉曼散射光谱的特征峰比野生酶高20％.结果表明MTG-MUT2具有比野生酶更高的热稳定性和催化效率.

摘要： 为应用PET15b-GFP观察细胞内部结构等功能奠定基础,研究绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)的基因克隆及其在不同种培养基条件下不同种感受态大肠杆菌细胞中的表达状况,通过克隆提纯PET15b-GFP质粒,将已插入单链抗体3E3和152的重组质粒pET15b-3E3-GFP和pET15b-152-GFP,运用转化的方法将重组质粒分别导入感受态的大肠杆菌细胞中(BL21,B cell,K12),在不同培养条件下使用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导GFP基因进行表达,筛选出表达最好的并改良表达能力最弱表达条件.结果 表明:重组质粒pET15b-152GFP-BL21在液态LB培养基中30°C、0.4 mmol/L IPTG、180 r/min诱导条件下培养显色最显著,在固态富集酵母培养基中30°C,1 mmol/L诱导条件下培养显色最显著;表达能力最弱的重组质粒pET15b-152-GFP-B cell在富集酵母液体培养基中25°C、180 r/min、0.4 mmol/LIPTG的条件下诱导培养表达绿色荧光最显著;pET15b-152-GFP-B cell在0 mmol/L、0.1 mmol/L、0.4mmol/L和1 mmol/L IPTG的诱导条件下表达绿色荧光无显著差异.

摘要： 牡蛎的主要过敏原是Crag 1蛋白(属于一种原肌球蛋白),克隆牡蛎原肌球蛋白Crag 1基因,导入大肠杆菌(BL21)中,然后筛选重组菌株.通过SDS-PAGE探究了重组菌株中Crag 1蛋白的最佳诱导表达条件,15°C下诱导16h.然后通过Western印迹、SDS-PAGE、质谱(MALDI-TOF-MS)、圆二色(CD)光谱等方法从His-tag、相对分子量、肽段比对以及二级结构上综合鉴定了重组Crag 1蛋白的准确性.本实验成功重组表达并鉴定了牡蛎主要过敏原Crag 1蛋白,为接下来的牡蛎脱敏实验以及牡蛎过敏的临床诊断和治疗奠定了良好的生物学基础.

摘要： 将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在不同的诱导时机、诱导温度、IPTG的浓度和Mg2+浓度条件下培养大肠杆菌,通过SDS-PAGE和发光强度检测分析TAT-LUC的酶活性强度及表达量;将高活性的TAT-LUC与LUC对比检测ATP,通过发光强度分析 TAT-LUC的敏感性和可靠性.表明:在含Mg2+浓度为50 mmol/L的LB培养基中将大肠杆菌培养至 OD600为0.6时,加入终浓度为0.5 mmol/L的IPTG,22 °C诱导16 h可获得大量高活性的 TAT-LUC;相比LUC,TAT-LUC可以检测到小于10 nmol/L的ATP,发光强度与ATP含量呈强相关性(R2= 0.99);并且不用裂解细胞,TAT-LUC可直接检测至少40个细胞内ATP;穿膜肽标记的荧光素酶蛋白成功用于检测活细胞内的 ATP含量.%The recombinant plasmid is transformed into Escherichia coli BL 21(DE3),and Escherichia coli is cultivated under the conditions of different induction time,induction temperature,concentration of IPTG and Mg2+concentration. Through SDS-PAGE and luminescence intensity detection,the enzyme activity intensity and expression of TAT-LUC are analyzed.The high active TAT-LUC is compared with LUC to detect ATP,and through the luminous intensity,the sensitivity and reliability of TAT-LUC are analyzed.The results show that when the Escherichia coli in an LB medium with the concentration of Mg2+which is 50 mmol/L is cultivated from OD600 to 0.6,IPTG with a final concentration of 0.5 mmol/L is added and a large amount of the highly active TAT-LUC can be obtained after the 16 h induction at 22°C.In comparison with LUC,TAT-LUC can detect ATP of less than 10 nmol/L,and the intensity of luminescence is strongly correlated with the content of ATP(R2= 0.99).Without cracking cells,TAT-LUC can directly detect at least 40 intracellular ATPs.The luciferase protein labeled by membrane peptide has been successfully used to detect the content of ATP in living cells.

摘要： 通过PCR扩增得到酿酒酵母乙醛脱氢酶基因ALDH长约1.6 kb的开放阅读框(open reading frame,ORF)序列,并将该序列与pET30a(+)载体相连,得到pET30a-ALDH重组质粒,使其在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达;对含有pET30a-ALDH重组质粒的工程菌进行表达条件分析,发现当异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)浓度为1.0 mmol/L、诱导温度为28°C、诱导表达时间为6h时,ALDH酶相对活性达到最高,为30.2 U/mL.

摘要： α-氨基酸酯酰基转移酶(α-amino acid ester acyltransferase,AET)能够催化底物L-丙氨酸甲酯盐酸盐、L-谷氨酰胺合成L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(L-alanyl-L-glutamine,丙谷二肽).利用重组大肠杆菌saet-QC01表达α-氨基酸酯酰基转移酶,对其表达条件进行了优化,通过Ni-NTA亲和层析法分离纯化重组蛋白,并对其酶学性质、催化应用进行了研究.适合酶表达的诱导条件:温度20°C,诱导阶段(OD600=2.0-2.5),IPTG浓度0.6 mmol/L,诱导时间12h.α-氨基酸酯酰基转移酶的最适反应温度27°C,最适pH 8.5,在pH 7.0-8.0很稳定,在酸性条件下相对稳定,低浓度的Co2+、低浓度的EDTA对酶活有促进作用.在底物浓度丙氨酸甲酯盐酸盐600 mmol/L、谷氨酰胺480mmol/L,丙谷二肽的产量达到78.2 g/L,生产速率达到1.955 g/(L·min),转化率达到75.0％.α-氨基酸酯酰基转移酶具有良好的酸碱耐受性,催化效率高的优良特性,在工业生产中具有较好的应用潜力.

摘要： 以甲醇诱导型蛋清溶菌酶基因重组毕赤酵母(Pichia pastoris)NCY-2为研究菌株,选用麦芽汁为培养基,首先通过单因素试验,对培养基锥形瓶种类、原麦芽汁稀释度及外加氮源进行了优化,在此基础上,采用均匀设计试验,得到菌株NCY-2的最佳发酵工艺条件为发酵温度31°C、pH 5.5,转速220 r/min,接种量4%;蛋清溶菌酶最佳表达条件为诱导温度18°C、诱导pH 4.4、转速190 r/min、甲醇初始添加量为0.3%(之后每隔24 h分别添加体积分数1.0%、1.5%、2.0%,诱导72 h结束)。在此优化条件下,摇床水平发酵液中蛋清溶菌酶酶活力可达到962.4 U/m L。

摘要： 为提高HN蛋白在毕赤酵母中的表达水平，本研究从不同诱导时间、培养基不同pH、不同甲醇诱导剂量等因素对HN基因在毕赤酵母中的表达条件进行优化。按最适条件大量诱导表达，对表达产物进行纯化，并通过血凝试验检测其生物学活性。结果表明pPICZaA-HN/X-33在培养液pH6.0、2.0%甲醇浓度、诱导96h时为最优条件，HN蛋白的表达量最高，可达0.3mg/ml，并具有较好的生物学活性。

摘要： 通过在不同的温度、不同的诱导时间、不同的ＩＰＴＧ诱导浓度条件下，对重组大肠杆菌ＰＰＳＬＴ－ＩＩｅＢ表达的融合蛋白ＧＳＴ－ＳＬＴ－ＩＩｅＢ的分析，结果表明温度是影响表达的主要因素，重组大肠杆菌ＰＰＳＬＴ－ＩＩｅＢ在２８°Ｃ温度条件下，可以大量的表达融合蛋白ＧＳＴ－ＳＬＴ－ＩＩｅＢ。在ＩＰＴＧ为１ｍＭ浓度条件下，２ｈ的诱导即可获得满意表达。在所试几种ＩＰＴＧ诱导浓度下，通过５ｈ的诱导，均可获得满意的表达。至于ＩＰＴＧ诱导浓度的临界值，该试验中未作进一步分析。另外，该实验结果表明４００ｍｌ２Ｚ ＹＴＡ培养基产生的融合蛋白（ＧＳＴ－ＳＬＴ－ＩＩｅＢ）ｄ １．８ｍｇ以上。

摘要： Ｆ１菌毛在体外表达受到许多因素的影响。为了对菌Ｆ１毛的进一步研究，该试验以只产Ｆ１菌毛的菌株Ｃ６００为对象，从培养条件的限制极为显著，在ＭＤ－１肉肠（ｐＨ６．８－７．２）中、３７°Ｃ、静止培养４８ｈ可使Ｆ１菌毛获得较好表达；通入氧气将有利于Ｆ１菌毛的表达。

摘要： 本发明公开了一种在缺氧条件下诱导HPV16E6/E7基因表达的慢病毒表达载体，所述慢病毒表达载体含有缺氧反应元件、CMV‑最小启动子和HPV16E6/E7基因，所述慢病毒表达载体能够在缺氧条件下诱导造血干细胞定向分化为永生化的红系祖细胞，永生化的红系祖细胞又可以在正常供氧条件下继续分化为成熟红细胞。使用本发明提供的载体所诱导出的红细胞具有与正常成熟红细胞接近的变形性和结合、释放氧气的能力，血红蛋白含氧量可达28±2mmHg，并且其在输注小鼠体内后的10分钟至24小时直径开始变小，在第24小时细胞就显示出了成熟红细胞的形态，在机体内显示出很好的生存适应性。

摘要： 本发明涉及适用于盐胁迫条件下雪茄烟基因表达分析的内参基因及其应用。本发明通过geNorm、NormFinder和BestKeeper三个分析软件对RPL8、RPL14A、RPS16、UBC27、UBC28、UBC35、AC10、EIF2、PSAP和CPI十个候选内参基因在雪茄烟盐胁迫条件下的表达稳定性进行了分析。结果表明UBC28基因在雪茄烟不同条件盐处理组织中稳定表达，即UBC28基因能够作为qRT‑PCR的内参基因。本发明进一步提供了UBC28基因的qRT‑PCR引物，为雪茄烟盐胁迫条件下基因表达的精确定量分析奠定了基础。

摘要： 本发明公开了一种基于遗传‑随机常数的基因表达式编程的酸性天然气水合物生成条件预测方法。包括以下步骤：获取酸性天然气水合物生成的组分、压力、温度数据；计算摩尔质量、酸性因子贡献率；将原始数据划分为训练集和测试集；基于结合随机常数的基因表达式编程建立酸性天然气水合物生成温度和影响因素的动态公式预测模型；引入修正参数到公式模型中；基于遗传算法优化修正参数。本发明的有益效果在于基于遗传‑随机常数的基因表达式编程算法的新方法解决了传统遗传规划算法求解速度慢、单一树状结构限制的预测精度稍差的缺点。可以精准预测得动态预测15MPa、300K以下不同酸性天然气水合物的生成条件，保证含酸气田集输系统有序生产。

摘要： 本发明提供了一种条件性mTERT过表达的小鼠模型的构建方法及其应用。该构建方法包括：通过无缝克隆的技术构建打靶载体，该打靶载体包含3.3kb 5'同源臂、CAG启动子、loxp‑stop‑loxp、TERT‑3XFlag‑IRES‑EGFP‑WPRE‑polyA和3.3kb 3'同源臂；将Cas9 mRNA、gRNA和上述打靶载体显微注射到野生型小鼠的受精卵中，获得F0代小鼠，并鉴定出同源重组阳性F0代小鼠，回交后繁育获得F1代小鼠，即为条件性mTERT过表达的小鼠模型。本发明提供的构建方法构建的小鼠可以与不同的Cre工具鼠交配，实现在全身各种组织器官、细胞类型中的特异性过表达。该鼠可以用于研究胚胎和神经发育、衰老、创伤修复、肿瘤发生发展和治疗的多种转基因模型造模，且与CreERT工具鼠的交配可以通过他莫昔芬控制TERT过表达的时间。

摘要： 本发明公开了一种在缺氧条件下诱导HPV16E6/E7基因表达的慢病毒表达载体，所述慢病毒表达载体含有缺氧反应元件、CMV‑最小启动子和HPV16E6/E7基因，所述慢病毒表达载体能够在缺氧条件下诱导造血干细胞定向分化为永生化的红系祖细胞，永生化的红系祖细胞又可以在正常供氧条件下继续分化为成熟红细胞。使用本发明提供的载体所诱导出的红细胞具有与正常成熟红细胞接近的变形性和结合、释放氧气的能力，血红蛋白含氧量可达28±2mmHg，并且其在输注小鼠体内后的10分钟至24小时直径开始变小，在第24小时细胞就显示出了成熟红细胞的形态，在机体内显示出很好的生存适应性。

摘要： 本发明属于生物回路的设计及使用方法领域，具体涉及一种利用病毒RNA表达机制进行条件表达筛选、清除被病毒感染的细胞的方法。现有实验室中对感染病毒的细胞进行标记的方法需要对病毒进行基因重组或标记，本发明方法可以实现在不对病毒进行基因改造和标记的条件下实现对被某些野生型病毒感染的细胞的筛选；本发明利用病毒基因组复制表达机制令被病毒感染的细胞表达特定基因，应用此方法，可以在细胞群中特异性的使被病毒感染的细胞表达外源基因，并且不会影响细胞群中其他正常细胞的生命活动；本发明还通过设置不同的外源基因来实现不同的功能，例如可以设置荧光蛋白基因使被病毒感染的细胞显色，设置死亡基因来清除被病毒感染的细胞，表达出改造的病毒蛋白干扰病毒复制等。

摘要： 本发明实施例公开了一种基于条件表达式的医疗数据搜索方法及装置，该方法包括：获取条件表达式，其中，所述条件表达式包括一个或多个特殊字符以及一个或多个关键词；根据所述特殊字符、所述关键词或者所述特殊字符与所述关键词之间的位置信息确定搜索规则，根据所述关键词确定搜索索引；根据所述搜索规则、所述关键词和所述搜索索引确定所述条件表达式对应的搜索语句；基于所述条件表达式对应的搜索语句，确定所述条件表达式对应的医疗数据搜索结果。解决了现有临床数据搜索方法至少存在数据搜索灵活性较低的问题。

摘要： 本发明公开了一种表达场景属性条件的语言及其处理系统，为各种基于场景条件的智能应用和服务提供了通用的条件表达语言和处理技术组件，属于信息技术和智能交互环境领域。设计了该语言的核心元素集、规范的语法结构模型、扩展和集成机制、可视化的场景条件编辑器；实现了语言处理器引擎，包括语法表达验证器和条件结果解析器；集成这些技术组件而构建了场景条件云服务平台，作为共享的基础设施提供场景条件的定义、管理、解析和执行服务。该语言提供丰富的语言元素和广泛类别的操作功能和组合机制，支持以非编程、结构化和组合性的方式表达现实时空、虚拟及数字世界和各种传感器感知场景的属性条件，以控制目标资源的可访问性或自动化的智能交互。

摘要： 本发明公开了一种信息不完备条件下的网络空间安全态势表达方法及装置，该方法包括：从网络节点采集四模态缺省流量数据向量，利用深度多模态编码器，进行数据融合，得到联合特征向量集；对每个网络节点的联合特征向量进行处理，得到态势影响因子信息，进而得到网络节点的安全态势值；利用预设的网络整体安全态势模型，计算得到网络整体安全态势值；利用关联规则挖掘算法模型，得到网络漏洞预测信息。本发明通过深度多模态编码器，解决了信息不完备条件下部分流量特征数据缺省的问题，提高了态势计算及表达的效率，通过关联规则挖掘算法更好地识别未知漏洞，提高态势预测的准确度。

摘要： 本发明属于计算机技术领域，其公开了一种基于条件表达式的数据筛选方法和装置。数据筛选方法包括：接收数据筛选请求，所述数据筛选请求包含基于原子条件和组表达的数据筛选信息；响应于所述数据筛选请求，显示目标数据。装置包括：接收模块，用于接收数据筛选请求，所述数据筛选请求包含基于原子条件和组表达的数据筛选信息；显示模块，响应于所述数据筛选请求，显示目标数据。通过上述技术方案能够一次得到更多或更复杂的数据，更好的满足客户对数据的需求。