肠出血性大肠杆菌

摘要： 为明确西藏牦牛源肠出血大肠杆菌强毒力岛(HPI)基因以及ESBLs耐药基因携带情况,复壮笔者所在实验室保存的14株牦牛源肠出血性大肠杆菌,采用麦康凯培养基和伊红美蓝培养基进行筛选,镜检确定复壮成功后,应用PCR方法检测HPI携带情况,并对HPI相关毒力基因进行克隆与序列分析,测序结果同时采用K-B纸片法对被检菌株进行药敏试验和ESBLs表型检测,最后应用PCR方法进行ESBLs耐药基因检测。结果显示,14株被检菌株中HPI标志性基因fyuA的携带率最高,达42.86%(6/14),其次分别为ybtA、irp2和irp8基因,携带率均为21.43%(3/14),irp3携带率为14.2%(2/14),而未检测到irp5阳性基因。分离菌株对青霉素、苯唑西林、氨苄西林、头孢氨苄、头孢唑林、头孢拉定、阿米卡星的耐药率均≥57.14%,对派拉西林、羧苄西林、头孢他啶、环丙沙星耐药率均≥21.43%,并存在多种耐药现象,耐药谱集中在3~10耐,其中6耐菌株最多,有5株,其次为8耐3株、7耐2株,10耐、9耐、5耐和3耐均1株。对被检菌株进行14种ESBLs类基因检测,结果发现被检菌株只携带1种ESBLs类基因,为bla;基因,携带率21.43%(3/14)。综上,西藏牦牛源肠出血性大肠杆菌中存在HPI基因。对常用抗菌药产生较高的耐药性并存在多种耐药现象,但对ESBLs类药物具有较高的敏感性。

摘要： 为研究抗菌肽MPX(Mastoparan-X)对肠出血性大肠杆菌(EHEC)的体外抑菌作用及作用机理。本研究通过琼脂扩散法、最小抑菌浓度(MIC)的测定、杀菌曲线的绘制以及扫描电镜观察MPX对EHEC的抑菌效果,结果显示MPX对EHEC的抑菌圈直径为9.7 mm,大于抗菌肽PR39但小于恩诺沙星(Enro);其对EHEC的MIC为31.25μg/mL;杀菌曲线结果显示,4 MIC MPX作用6 h后,EHEC菌液OD值降至0.1,极显著低于阴性对照组(只加入ddHO的EHEC,下同)(P<0.01),活菌数量降至阴性对照的千分之一(P<0.05),且4 MIC MPX的抑菌效果优于抗菌肽PR39与Enro;电镜观察结果显示,MPX作用后的菌体明显变小,细菌内容物渗漏。MPX稳定性试验结果显示,酸、碱、温度、一价阳离子等对MPX的抑菌效果影响较小,二价阳离子极显著抑制MPX的抑菌活性(P<0.01)。上述结果表明,MPX在体外有较强的抑菌效果,且稳定性较强。采用BCA法测定不同浓度MPX(0.5 MIC、1 MIC、2 MIC)作用后的EHEC上清中的蛋白含量;采用SYTO 9/PI染色后经激光共聚焦显微镜观察上述不同浓度MPX作用后的EHEC菌体荧光颜色;采用苯基萘胺(NPN)探针、碘化丙啶(PI)染料和3,3-二丙基硫代二碳氰碘化物[DiSC3(5)]探针分别检测不同浓度MPX(1 MIC、2 MIC、4 MIC)作用后的EHEC菌液的荧光强度,以分析MPX对EHEC细胞膜通透性的影响。BCA结果显示,1 MIC及2 MIC MPX作用后的菌液上清蛋白含量均显著高于阴性对照组(P<0.05);激光共聚焦试验结果显示,与阴性对照组相比,只有2 MIC MPX作用后的EHEC中的红色荧光明显增多;NPN探针和DiSC3(5)探针检测结果显示,不同浓度MPX作用后(0~2 min)EHEC的荧光强度均明显增强,其后不再变化;PI染料检测结果显示,不同浓度MPX作用后(0~4 min)EHEC的荧光强度均明显增强,其后逐渐降低。上述结果表明,MPX可以破坏EHEC的外膜和细胞膜,使膜的通透性增加,进而导致细菌死亡,且该作用与MPX的浓度基本呈正相关。分别利用结晶紫染色法检测和电镜观察MPX对EHEC生物被膜(BF)形成的影响,结果显示,与阴性对照相比,1 MIC~4 MIC的MPX均极显著抑制EHEC BF的形成(P<0.01、P<0.001),且该抑制作用与MPX浓度呈正相关;电镜观察结果显示,与阴性对照组相比,1 MIC MPX作用后的EHEC BF结构松散且稀疏。以上结果表明,MPX可以通过抑制EHEC BF的形成而发挥抑菌作用。本研究为研发新型抗菌药物奠定了实验基础。

摘要： 目的 研究一起常州地区发生的不明原因感染性腹泻疫情的病原种类.方法 应用FilmArray多重PCR法及实时荧光定量PCR快速检测腹泻病例肛拭子标本.结果 18份病例标本中5份为肠出血性大肠杆菌(EHEC).结论 该起疫情由EHEC引起.

摘要： 大肠杆菌O157∶H7血清型是肠出血性大肠杆菌的代表菌株,为革兰氏染色阴性菌,具有较强的耐酸性,可产生大量的Vero毒素,是主要的致病因子,能引起人的出血性腹泻和肠炎,患者大多数急性起病,严重的感染者一周后可发生溶血性尿毒综合征,并可出现窦性心动过缓、惊厥和血小板减少性紫癜等并发症,可导致死亡。该病多发生于夏秋两季,主要以散发性为主。大肠杆菌O157∶H7的携带者可能是海鸥、羊、猪、马、鹿、鸽子、牛、鸡等动物,畜禽肉食品供应链中牛肉是主要的传播载体。

摘要： 研究建立了一种能快速检测沙门氏菌、肠出血性大肠杆菌和多杀性巴氏杆菌等三种细菌性病原的多重PCR方法,并应用于土壤样本感染情况调查.结果显示所构建的方法能特异性地扩增出目标条带,能鉴别死菌和活菌;灵敏度可达10-5;重复性好,满足临床检测需要.对林下鸡养殖环境土壤样本目标细菌性病原检测显示,被检养殖场沙门氏菌感染率最高,达89.47％;其次是大肠杆菌感染(68.42％);二者混感率为36.84％;所有样本均未检出多杀性巴氏杆菌.说明林下鸡养殖环境中沙门氏菌和肠出血性大肠杆菌感染情况严峻,急需构建和完善生物安全体系.

摘要： 为调查西藏地区牦牛源肠出血性大肠杆菌的流行情况,利用PCR检测和生物进化分析方法,对西藏林芝、拉萨不同地、市149株牦牛源大肠杆菌的肠出血性大肠杆菌相关毒力基因进行了研究.结果表明:牦牛源肠出血性大肠杆菌6对毒力基因中,只检出ehxA基因,检出率为9.40％;对检测到的14株牦牛源肠出血性大肠杆菌进行克隆测序,经系统发育分析发现牦牛源肠出血性大肠杆菌菌株内同源性达到99.9％左右,与GenBank中所录其他菌株的同源性达到99％.因此,西藏牦牛源肠出血性大肠杆菌基因确实存在,其毒力基因主要为ehxA基因;西藏林芝、阿里、日喀则、昌都均有分布,拉萨、山南和那曲地区未检出,应引起重视.西藏地区要根据各地实际情况需要加强监测肠出血性大肠杆菌引起的腹泻,建立流行毒株预警机制并合理用药.

摘要： 为了解石榴健胃丸、仁青芒觉、十五味黑药丸、仁青常觉等5种复合藏药对西藏牦牛源肠出血性大肠杆菌的抑菌情况.利用药敏试验的研究方法,对近几年来实验室分离保存的14株西藏牦牛源肠出血性大肠杆菌进行了药物敏感性检测的研究.结果 表明:14株牦牛源肠出血性大肠杆菌对仁青芒觉表现为中度敏感;对石榴健胃丸、十五味黑药丸、仁青二十五味马宝丸、仁青常觉均表现为耐药;14株牦牛源肠出血性大肠杆菌对常用抗生素均敏感.通过动物试验表明,只接种牦牛源肠出血性大肠杆菌没有注射仁青芒觉的分离菌株均能引起大多数小鼠死亡,均具有高致病性,致死率达到95％,而注射了仁青芒觉复合藏药的试验组,死亡情况明显降低.结论 提示:5种复合藏药中仁青芒觉对肠出血性大肠杆菌具有一定的治疗价值,目前对于肠出血性大肠杆菌的治疗没有有效的方法,特别是在耐药性泛滥的形势下,大肠杆菌病的治疗方面除了临床上常用的抗生素,复合藏药也是一个良好的选择.

摘要： 目的：调查温州市食品中肠出血性大肠杆菌0157∶H7的污染状况，了解肠出血性大肠杆菌0157∶H7毒力因子的携带与耐药情况。方法：采用随机抽样的方法，对从2008年-2011年收集的231份食品样品，用免疫磁珠富集法对大肠杆菌0157∶H7进行分离，对该分离株进行生化、血清学鉴定,以纸片法(K-B法)进行药敏试验；采用PCR方法检测0、H抗原基因和stx1、stx2、 eaeA、hlyA等4种毒力基因。结果：在231份样品中，分离出1株肠出血性大肠杆菌0157∶H7，检出率为0.43%；0157抗原和H7抗原的核酸检测结果阳性。结论:温州市食品中存在大肠杆菌0157∶H7的污染，检出率较低。

摘要： 肠出血性大肠杆菌O157∶H7是一种重要的食源性致病菌.本实验利用实验室制备的抗EHEC O157∶H7的单克隆抗体开展了O157∶H7胶体免疫层析检测试纸条的研究.采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,标记单克隆抗体1H3后喷涂于玻璃纤维膜样品垫部位,以另一株单克隆抗体6F4包被于硝酸纤维素膜检测线作为捕获抗体,以兔抗鼠IgG多克隆抗体包被质控线,利用双抗夹心法制成EHEC O157胶体金免疫层析检测试纸条.该试纸条与EHEC O157反应成阳性,检测敏感性为105 CFU/mL,且特异性良好,显色时间在15min以内.本研究成果为开展食品中肠出血性大肠杆菌O157∶H7的快速筛查提供了重要材料.

摘要： 目的：建立一种快速简便的多重PCR方法用于环境样品中霍乱弧菌和肠出血性大肠杆菌的快速检测。方法：针对霍乱弧菌肠毒素和肠出血性大肠杆菌志贺毒素基因(ctx、stxl和stx2)设计引物，扩增大小不同的特异性片段，优化反应条件，建立多重PCR方法，对人工污染的水样品进行模拟检测。结果：多重PCR扩增系统针对目的菌具有高度的特异性。敏感性试验证实，当多重PCR反应体系中模板含量在10CFU时仍能检出。模拟水样品多重PCR检测的敏感性试验显示，人工污染的河水直接集菌检测敏感性为100～1000CFU/mL，增菌培养后多重PCR检测敏感性可达1CFU/mL。结论：本研究首次于同一PCR体系检测霍乱弧茵和肠出血性大肠杆菌的毒素基因，可用于这两种致腹泻性病原菌的快速检测。

摘要： 肠出血性大肠杆菌0157∶H7是一种重要的人畜共患传染病病原菌。为建立一种特异、灵敏的0157∶H7新型检测技术,以0157抗原基因(rfbE基因)为模板设计特异性引物,利用叠氮溴化乙锭处理菌液,沸水浴法制备细菌裂解液,优化PCR条件,建立一种快速、有效的0157∶H7活菌EMA-PCR检测方法.结果显示,EMA-PCR可从rfbE基因阳性菌株CVCC248和两株临床分离菌株cd0912、cd0803中扩增出大小为495bp的特异性条带,检测灵敏度可达12CFU/ml。经EMA处理,从含有1％～100％0157∶H7CVCC248活菌混合悬液制备的DNA中均可扩增出目的片段。因此,成功建立了肠出血性大肠杆菌0157∶H7的EMA-PCR检测方法；该方法可避免因分析的样品中含有死细菌而造成的假阳性检测结果，检测的准确性和真实性较传统PCR大大提高。0157∶H7EMA-PCR技术的建立为0157∶H7的临床诊断提供了新的方法,具有重要的实际应用价值和良好的应用前景。

摘要： 德国近期的溶血性尿毒症(HUS)疫情引发关注，报告的有肠出血性大肠杆菌O104：H4感染的确诊或疑似病例2000余例，除德国外，奥地利、捷克、丹麦、法国、荷兰、挪威、西班牙、瑞典、瑞士、英国、美国等13个国家也报到了输入性肠出血性大肠杆菌感染病例或其严重并发症——溶血性尿毒综合征病例，全球数以百计的患者确诊感染，多名病例死亡。研究者发现，造成此次肠出血性大肠杆菌疫情的病菌“是常见的肠出血性大肠杆菌的一个非常远的远亲”。它大约80％的基因来自血清型为O104型的大肠杆菌，其余20％的基因来自另外一种大肠杆菌。这一新组合有利于病菌在肠细胞上附着，从而使其能在肠道内宿居更长时间，造成更大的破坏。此外，这种病菌还对抗生素具有很强的抗药性，研究人员已经发现该菌株携带氨基糖甙类、大环内酯类及磺胺类抗生素的耐药基因，对目前已知的绝大多数抗生素药物耐药，导致感染者几乎无药可医。肠出血性大肠杆菌感染疫情大规模蔓延的潜在危险给全球公共卫生事业和我国国境卫生检疫工作带来了巨大的威胁和挑战。如何正确的看待此次肠出血性大肠杆菌感染疫情带来的挑战，加强预警，防范于未然，进一步完善国境卫生检疫工作的手段，提高科技含量，满足《国际卫生条例(2005)》对卫生检疫核心能力建设提出的要求，力争做到对输入性病例包括肠出血性大肠杆菌在内的新发传染病早发现、早处置、早治疗、早隔离，保障国内人民身体健康，是值得每一个检疫工作者思考的问题。

摘要： 将肠出血性大肠杆菌特异性的O抗原编码基因进行克隆表达，并做初步纯化，为肠出血性大肠杆菌O157的免疫学检测提供基础。

摘要： 肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichiacoli，EHEC)O157：H7是一种重要的病原菌，可引起腹泻、出血性肠炎(Hemorrhagic enteritis，HC)，并容易继发溶血性尿毒综合症(HUS)等严重并发症。该菌进入宿主肠道后，黏附肠上皮细胞，并引起黏附、擦拭损伤(A／E损伤，attaching andeffacing lesions)。A／E损伤过程是EHEC O157：H7致病过程起始环节和必要步骤，已发现该过程由一系列EHEC毒力因子和宿主细胞蛋白参与介导。阐明A／E损伤形成的分子机制，对于EHEC O157：H7的致病机制和防治研究具有重要理论指导意义。

摘要： 本文对大肠杆菌O157∶H7及其危害进行了介绍,对我国牛肉肠出血性大肠杆菌O157∶H7食物中毒潜在的危害程度进行了分析,并提出了相应的牛肉O157∶H7食物中毒防控措施和建议.指出：应加强对牛肉食品中大肠杆菌0157:H7的监测，尽快建立一套对牛肉检验、监测大肠杆菌0157:H7的标准体系，在基层广泛推广应用。加强基础研究，了解大肠杆菌0157:H7的致病机理，采取切实有效的预防措施，从根本上控制大肠杆菌0157:H7的感染和蔓延传播。此外，可以继续完善修订牛肉产品商品标准，为生产安全合格的产品提供科学的、具有法律效力的依据。

摘要： 肠出血性大肠杆菌(EHEC)0157:H7是一种重要的食源性致病菌,可通过污染肉品造成人类食源性疾病发生.因此,加强肉品中0157:H7的检测具有重要的公共卫生学意义.本研究通过化学方法制备出稳定吸附DNA的氨基磁珠,探索出氨基磁珠提取猪肉中致病菌DNA的最佳条件,进而建立快速检测猪肉中EHEC 0157:H7的氨基磁珠-LAMP可视化检测方法.该方法检测猪肉样品无需增菌,从样品处理到结果判定仅需4.5h,检测人工污染猪肉样品的灵敏度可达60 CFU,特异性良好,为开展肉品中EHEC 0157:H7的监测和控制提供了技术手段.

摘要： 用颗粒为20nm的胶体金溶液标记纯化的羊抗鼠IgG，制备金标探针，喷涂于玻璃纤维膜上；将大肠杆菌O157：H7抗原和抗大肠杆菌O157：H7单克隆抗体F1分别包被于硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线，组装成鼠血清O157：H7抗体胶体金免疫层析检测试纸条。实验结果：该试纸条仅与O157：H7阳性鼠血清发生特异性反应；用该试纸条与常规间接ELISA平行比较检测O157：H7免疫鼠血清，抗体效价分别为106和105，两者的敏感度相当。该试纸条操作简便，10min可出结果，适用于调查与追溯鼠O157：H7感染状况时的现场检测。

摘要： 本发明涉及从自然界分离的并可以特异性地杀死肠出血性大肠杆菌菌株的肌尾噬菌体科噬菌体Esc‑CHP‑1，其具有由SEQ ID NO：1的核苷酸序列表示的基因组（登记号：KCTC 12660BP），以及使用包含所述噬菌体作为活性成分的组合物来预防和治疗肠出血性大肠杆菌感染的方法。

摘要： 本发明涉及生物制剂技术领域，公开了一种抗肠出血性大肠杆菌的格氏乳杆菌及制备的禽用复合益生菌制剂及应用。本发明提供的格氏乳杆菌（Lactobacillus gasseri）YD2‑2，保藏编号为CCTCC NO：M 2019340，特别是对肠出血性大肠杆菌具备高效抑菌性，将其与其他菌株混配后，可制备成抗肠出血性禽用复合益生菌制剂，该制剂能够促进动物的生长，改善动物肠道微生态环境，促进肠粘膜的发育，增加肠粘膜可溶性IgA含量和血清IgG的含量，减少抗生素作为预防和治疗动物疾病的作用在饲料中的长期亚治疗剂量和超高剂量添加，避免饲用抗生素滥用导致的细菌耐药性、抗生素药物残留和食品安全等方面的危害。

摘要： 本发明提供同时检测肠出血性大肠杆菌O45和O145的纳米PCR试剂盒及其应用，涉及出血性大肠杆菌的检测技术领域。该试剂盒，包括第一引物对和第二引物对，所述第一引物对包括序列如SEQ ID No：3和SEQ ID No：4所示的引物；所述第二引物对包括序列如SEQ ID No：7和SEQ ID No：8所示的引物。本发明还提供所述纳米PCR试剂盒在以非诊断为目的检测肠出血性大肠杆菌O45和O145中的应用。本发明纳米PCR试剂盒，能够快速、特异的同时检测样品中两种血清型的EHEC，具有很好的应用前景。

摘要： 本发明属于细菌检测技术领域，特别是涉及肠出血性大肠杆菌检测的引物组及其应用和试剂盒。本发明提供了肠出血性大肠杆菌检测的引物组，所述引物组包括如SEQ ID NO:1～14所示的引物。本发明提供的试剂盒具有时效性和灵敏性，还兼顾有极高的特异性。

摘要： 本发明涉及用于污水处理系统中高致病性肠出血性大肠杆菌O157的防控，属生物工程领域。提供了一株裂解污水处理系统中肠出血性大肠杆菌O157的新型噬菌体，命名为PE‑3(基因序列SEQ ID NO.1，GenBank Access no.KJ748011)。该噬菌体对肠出血性大肠杆菌O157具有强裂解效用，可有效防控肠出血性大肠杆菌O157的产生及传播，且具有较高的温度耐受性和较宽的酸碱耐受范围，有利于工业化的生产制备，该噬菌体可作为一种安全可靠高效的生物消毒剂，迅速高效的防治污水排放或回用引发的肠出血性大肠杆菌O157污染。

摘要： 本发明涉及从自然界分离的并可以特异性地杀死肠出血性大肠杆菌菌株的肌尾噬菌体科噬菌体Esc‑CHP‑1，其具有由SEQ ID NO：1的核苷酸序列表示的基因组（登记号：KCTC 12660BP），以及使用包含所述噬菌体作为活性成分的组合物来预防和治疗肠出血性大肠杆菌感染的方法。

摘要： 本发明涉及生物制剂技术领域，公开了一种抗肠出血性大肠杆菌的格氏乳杆菌及制备的禽用复合益生菌制剂及应用。本发明提供的格氏乳杆菌（Lactobacillus gasseri）YD2‑2，保藏编号为CCTCC NO：M 2019340，特别是对肠出血性大肠杆菌具备高效抑菌性，将其与其他菌株混配后，可制备成抗肠出血性禽用复合益生菌制剂，该制剂能够促进动物的生长，改善动物肠道微生态环境，促进肠粘膜的发育，增加肠粘膜可溶性IgA含量和血清IgG的含量，减少抗生素作为预防和治疗动物疾病的作用在饲料中的长期亚治疗剂量和超高剂量添加，避免饲用抗生素滥用导致的细菌耐药性、抗生素药物残留和食品安全等方面的危害。

摘要： 本发明公开了一种具有特异性杀伤肠出血性大肠杆菌的工程λ噬菌体及其构建方法和应用，其是一种可以在复杂微生物环境中特异性清除肠出血性大肠杆菌的工程λ噬菌体，该工程λ噬菌体的裂解酶基因被敲除并搭载CRISPR‑Cas3系统，利用工程λ噬菌体的溶源特性使CRISPR‑Cas3系统发挥高特异性杀伤肠出血性大肠杆菌的作用，进而有效克服抗生素和野生型噬菌体治疗的广谱杀菌的弊端。

摘要： 本发明公开了一种宽裂解谱肠出血性大肠杆菌噬菌体及其应用。所述噬菌体菌株保藏号为CCTCC NO：M 20211003，于2021年8月10日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，分类命名为肠出血性大肠杆菌O157:H7噬菌体vB_EcoM_SQ17，Enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7 phage vB_EcoM_SQ17；对肠出血性大肠杆菌具有高效杀菌能力，能够裂解肠出血性大肠杆菌O157:H7，也能裂解其他致病性大肠杆菌。本发明在全脂牛奶和脱脂牛奶中均对肠出血性大肠杆菌具有较好的抑菌效果。

摘要： 本发明属于微生物检测技术领域，尤其涉及一种利用LAMP技术快速检测肠出血性大肠杆菌的引物组、检测方法、试剂盒及应用。本发明选用大肠杆菌O157:H7毒力基因fliC(NC_013008.1)作为其特异性靶标，设计了4条能在62‑68°C下扩增该基因的特异性引物组，通过HNB染料指示检测结果，由紫罗兰色(阴性)变为天蓝色(阳性)，该方法检测金黄色葡萄球菌其特异性好、操作简单，无需昂贵仪器，且灵敏度比常规PCR高。本发明试剂盒可以快速、特异地检测肠出血性大肠杆菌O157:H7，最低可检测浓度为10‑5ng/μL的基因组核酸。其操作简单，结果易于判读，适合进出口检疫、食品卫生及临床样本检测。