细胞周期蛋白类

摘要： 目的 了解辛伐他汀对胆管癌细胞周期相关蛋白Cyclin D1、Cyclin E、CDK4及pRB的作用.方法 体外实验使用辛伐他汀处理胆管癌细胞EGI-124 h和48 h后,利用CCK-8试剂盒测定肿瘤细胞增殖情况,其后实时荧光定量PCR(qPCR)检测细胞周期相关基因Cyclin D1、Cyclin E、CDK4及pRB的mRNA,根据结果再用Western blotting验证相应蛋白的表达水平.体内实验使用EGI-1接种于12只NOD-SCID小鼠皮下,成瘤后随机分为实验组和对照组,每组6例.实验组每天按照20 mg/kg的辛伐他汀灌胃,对照组每天喂予同剂量的药物溶剂.24 d后取出移植瘤测量体积并进行免疫组织化学染色,明确上述蛋白的体内表达水平.结果 辛伐他汀处理对胆管癌细胞EGI-1有增殖抑制作用,呈现药物的浓度依赖性,其24 h及48 h的半抑制浓度数值分别为(8.27±0.77)μmol/L和(5.90±1.81)μmol/L.辛伐他汀处理48 h的EGI-1细胞内Cyclin D1、CDK4和pRB mRNA表达显著下调(P<0.05),而Cyclin E mRNA表达差异无统计学意义.相应地,EGI-1细胞内Cyclin D1、CDK4、pRB蛋白也被抑制,与mRNA的结果保持一致;同时随药物时间延长,抑制作用增强.体内实验显示,辛伐他汀可抑制小鼠移植瘤生长,免疫组织化学分析显示实验组小鼠移植瘤细胞Cyclin D1、CDK4、pRB蛋白下调(P<0.05).结论 辛伐他汀可通过下调细胞周期相关蛋白Cyclin D1、CDK4、pRB抑制胆管癌细胞增殖.

摘要： 目的探讨三氧化二砷(ATO)对体外人小肠癌HIC细胞增殖的作用及其机制。方法取处于对数生长期的人小肠癌HIC细胞,5个实验组分别用10、15、20、40及60μmol/L的ATO处理,用等量磷酸盐缓冲液(PBS)处理作为空白对照组,采用实时无标记细胞分析(RTCA)系统120 h连续监测各组人小肠癌HIC细胞的细胞指数(CI)值变化;取处于对数生长期的人小肠癌HIC细胞,4个实验组分别用10、15、20及40μmol/L ATO处理,等量PBS处理作为空白对照组,采用Western blot检测各组人小肠癌HIC细胞多克隆抗体糖原合成酶激酶-3(GSK-3β)、细胞周期蛋白B1(cyclin B1)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及骨髓细胞瘤病毒癌基因(c-Myc)的表达。结果实验组经过10、15、20、40及60μmol/L ATO处理后的人小肠癌HIC细胞CI值均较空白对照组明显下降,其下降趋势随着ATO浓度的增加更明显;10、15、20及40μmol/L ATO组人小肠癌HIC细胞GSK-3β、cyclin B1、cyclin D1及c-Myc等相关周期蛋白的表达水平均较空白对照组均下降(P<0.05),且随着ATO浓度的增高,周期相关蛋白的表达水平越低。结论 ATO可抑制体外小肠癌小肠癌HIC细胞的增殖,其机制可能与相关周期蛋白cyclin B1、cyclin D1、GSK-3β及c-Myc的表达下调有关。

摘要： 目的 探讨三氧化二砷(ATO)对体外人小肠癌HIC细胞增殖的作用及其机制.方法 取处于对数生长期的人小肠癌HIC细胞,5个实验组分别用10、15、20、40及60μmol/L的ATO处理,用等量磷酸盐缓冲液(PBS)处理作为空白对照组,采用实时无标记细胞分析(RTCA)系统120h连续监测各组人小肠癌HIC细胞的细胞指数(CI)值变化;取处于对数生长期的人小肠癌HIC细胞,4个实验组分别用10、15、20及40μmol/L ATO处理,等量PBS处理作为空白对照组,采用Western blot检测各组人小肠癌HIC细胞多克隆抗体糖原合成酶激酶-3(GSK-3β)、细胞周期蛋白B1(cyclin B1)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及骨髓细胞瘤病毒癌基因(c-Myc)的表达.结果 实验组经过10、15、20、40及60μmol/L ATO处理后的人小肠癌HIC细胞CI值均较空白对照组明显下降,其下降趋势随着ATO浓度的增加更明显;10、15、20及40μmol/L ATO组人小肠癌HIC细胞GSK-3β、cy-clin B1、cyclin D1及c-Myc等相关周期蛋白的表达水平均较空白对照组均下降(P<0.05),且随着ATO浓度的增高,周期相关蛋白的表达水平越低.结论 ATO可抑制体外小肠癌小肠癌HIC细胞的增殖,其机制可能与相关周期蛋白cyclin B1、cyclin D1、GSK-3β及c-Myc的表达下调有关.

摘要： 目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)CTB-147C22.8 调控下游蛋白对复发性呼吸道乳头状瘤细胞侵袭及细胞周期的影响。方法在前期高通量基因组表达谱芯片分析下游mRNA KLK6基因的基础上,复苏NP69-空白组、NP69-H145组、NP69-H6373组三组细胞系,采用Western blot技术检测转染CTB-147C22.8前、后人上皮细胞中细胞胞内及胞外E-钙黏素(E-cadherin)、β链蛋白(β-catenin)表达量,cyclin E、cyclin D1、cyclin A、CDK2表达量。结果 NP69-H6373组E-cadherin在细胞浆蛋白表达量较NP69-空白组和NP69-H145组增高且均有统计学意义(F=11.192,P=0.09);实验组β-catenin在细胞浆和细胞核表达量与其他两组比表达增高,且有统计学意义(F=2.33,P=0.037;F=2.16,P=0.048);NP69-H6373组cyclin E、CDK2表达量较NP69-空白组和NP69-H145组显著增加,且差异有统计学意义(F=4.132,P=0.043;F=3.981,P=0.037)。结论 lncRNA CTB-147C22.8-KLK6可调控其下游蛋白,E-cadherin、β-catenin及cyclin E、CDK2影响呼吸道乳头状瘤细胞的增殖、侵袭能力。

摘要： 目的 探讨高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染对膀胱癌患者染色体畸变及细胞周期蛋白表达的影响及其与膀胱癌发生的关系.方法 随机选择2017年1月至2019年12月本院收治的60例膀胱癌患者,按照HPV感染情况分为HPV阳性组及HPV阴性组,采用FISH方法检测两组患者的尿液脱落细胞染色体的畸变率,并采用免疫组化方法检测两组膀胱癌组织的细胞周期蛋白的表达情况.结果 60例膀胱癌患者中HPV阳性者39例,HPV感染率为65％.HPV阳性组中3号染色体与GLPp16的畸变率分别为79.49％(31/39)与82.05％(32/39),明显高于HPV阴性组的47.61％(10/21)与52.38％(11/21),差异有统计学意义(P＜0.05).HPV阳性组中7号与17号染色体的畸变率分别为74.36％(29/39)与66.67％(26/39),与HPV阴性组的61.90％(13/21)与71.43％(15/21)比较,差异无统计学意义(P＞0.05).HPV阳性组中的p16、Rb蛋白的阴性表达率分别为46.15％(18/39)与41.03％(16/39),显著高于HPV阴性组的28.57％(6/21)与23.81％(5/21),差异有统计学意义(P＜0.05).HPV阳性组中cy-clinD1的高表达率为56.41％(22/39),高于HPV阴性组的28.57％(6/21),差异有统计学意义(P＜0.05).而CDK4蛋白的高表达率在两组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论HPV感染能引起膀胱癌3号染色体与GLPp16染色体畸变率升高,引起细胞周期蛋白p16、Rb及cyclinD1蛋白表达紊乱,导致P16/CDK4/cyclinD1/Rb细胞周期调控通道的紊乱,其与膀胱癌的发生有着密切的关系.

摘要： 目的 研究细胞周期蛋白Y(CCNY)对肝癌患者病变程度的影响以及其与手术前后肝损伤的相关性.方法 回顾性分析2015年1月至2017年10月浙江省医疗健康集团杭州医院60例肝癌患者(肝癌组)、69例肝硬化患者(肝硬化组)的临床资料.肝硬化组Child-Pugh肝功能分级A级33例(肝硬化A级组),B级21例(肝硬化B级组),C级15例(肝硬化C级组).采用全自动生化分析仪检测血清总胆红素(TBIL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、白蛋白、胆碱酯酶、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)和总胆汁酸;采用WB法检测血清CCNY,并与40例健康体检者(健康对照组)进行比较.结果 与健康对照组比较,肝硬化A、B、C级组白蛋白和胆碱酯酶明显降低,ALT、TBIL、GGT、总胆汁酸和CCNY明显升高,且随着肝脏病变程度越重变化越明显,差异有统计学意义(P＜0.05).Pearson相关分析结果显示,肝癌患者CCNY与TBIL、ALT、总胆汁酸和GGT呈正相关(r=0.544、0.612、0.553和0.539,P＜0.05),CCNY与白蛋白和胆碱酯酶呈负相关(r=-0.478和-0.620,P＜0.05).肝癌患者术前及术后1、2、7 d CCNY分别为3.01±1.10、7.24±2.57、6.29±1.78和4.01±1.52,ALT分别为(98.74±16.79)、(430.55±197.62)、(255.73±26.77)和(121.89±20.42)U/L;术后1和2d CCNY和ALT明显高于术前,术后2d明显低于术后1d,术后7d明显低于术后2d,差异均有统计学意义(P＜0.05);术后7d与术前比较差异无统计学意义(P＞0.05).肝癌患者血清CCNY的表达与术前、术后1d、术后2d和术后7 d ALT呈正相关(r=0.669、0.821、0.663、0.642,P＜0.01).结论 肝癌患者的肝脏病变程度越重患者血清CCNY越高,且CCNY的表达越高肝癌患者因手术肝损伤程度越重,其与肝损伤指标呈正相关.

摘要： 目的 探讨血浆miR-16与冠心病的关系,并阐明该miR对血管平滑肌细胞增殖表型的调控作用.方法 随机选取冠心病患者43例及健康对照49例,通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测血浆miR-16的表达强度.将miR-16类似物转染人血管平滑肌细胞,通过CCK-8实验检测细胞的增殖活力,通过蛋白印迹检测细胞周期蛋白(cyclin)D1、D2和E1的表达.结果 冠心病患者血浆miR-16表达水平显著低于对照组(P<0.05).过表达miR-16可显著抑制血管平滑肌细胞的增殖,并下调cyclin D1、D2和E1的表达.结论 miR-16在冠心病患者血浆中表达降低,该miR可能通过靶向抑制细胞周期蛋白cyclinD1、D2和E1的表达抑制血管平滑肌细胞增殖.

摘要： 目的 研究小白菊内酯(PN)对胃癌细胞BGC-823的抑制作用及其机制.方法 将BGC-823细胞分为DMSO组和PN组,DMSO组常规进行细胞培养,PN组则采用不同浓度的PN处理细胞.两组细胞采用CCK-8技术检测不同时间点细胞活力的变化,采用克隆形成实验检测细胞增殖能力的变化,采用流式细胞术检测细胞不同周期比例及凋亡水平,采用荧光实验检测细胞内活性氧簇(ROS)生成水平,采用Western Blot方法检测细胞周期及凋亡相关蛋白水平的变化.结果 与DMSO组比较,随着PN浓度的增加BGC-823细胞的活力及增殖能力均下降(F=283.80、312.60,P＜0.01).24 h时,PN组的总凋亡比例与DMSO组相比明显升高(t=27.57,P＜0.01),且随着处理时间的延长凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)8、caspase9和caspase3剪切型的表达明显增加(F=228.10～2 024.00,P＜0.01).与DMSO组相比较,PN组细胞周期被阻滞在G1期(t=4.22、7.44,P＜0.05);而且随着处理时间的延长,细胞周期蛋白(Cyclin) D1及CyclinE1水平明显下降(F=159.40、25.40,P＜0.01),P53及P21蛋白表达水平明显升高(F=53.74、73.03,P＜0.01).24 h时,PN组细胞内ROS生成水平较DMSO组明显升高(t=10.92,P＜0.01);而且随着处理时间的延长,细胞核内c-Myc基因、转录因子E2F1、核因子κB(NF-κB)以及磷酸化的信号传导及转录激活因子3(p-STAT3)蛋白的表达水平明显下降(F=306.90、1 067.00,t=8.72、9.15,P＜0.01).结论 PN对BGC-823细胞增殖能力呈剂量依赖性抑制,对细胞周期产生阻滞并诱导细胞凋亡,这种抗肿瘤作用可能是通过抑制STAT3-c-Myc-E2F1发挥作用的.

摘要： 目的研究鼻咽癌干细胞的增殖特征并初步探讨其分子机制。方法采用无血清悬浮培养法从鼻咽癌细胞CNE2和5-8F获得鼻咽癌干细胞CNE2-SC、5-8F-SC,分别采用细胞存活率分析计数器、细胞平板克隆形成试验观察鼻咽癌干细胞的增殖特性和克隆形成能力,Western blot法检测细胞周期相关蛋白表达水平。结果鼻咽癌干细胞比其来源的鼻咽癌细胞增殖速度显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。鼻咽癌干细胞克隆形成率显著高于其来源鼻咽癌细胞(P<0.01),但肿瘤干细胞克隆显著小于其来源细胞。与普通鼻咽癌细胞比较,鼻咽癌干细胞的细胞周期蛋白CylinD1、CylinD3及细胞周期调控蛋白CDK2、CDK4、CDK6的表达水平显著下调(P<0.01)。结论鼻咽癌干细胞比其来源的鼻咽癌细胞生长增殖缓慢,可能与其细胞周期蛋白和周期蛋白依赖激酶表达水平下调有关。

摘要： 用于治疗癌症的CDK4/6抑制剂和mTOR抑制剂的组合。

摘要： 本发明涉及药物化学领域，具体涉及β-咔啉类生物碱(I)、它们的制备方法、含有这些化合物的药用组合物以及它们的医疗用途，特别是作为细胞周期蛋白依赖性激酶2抑制剂的用途。

摘要： 本发明涉及用于蛋白表达的真核细胞，所述真核细胞包含：(a)编码细胞周期蛋白D基因产物的插入的核酸片段和(b)编码目的蛋白的插入的核酸片段，其中所述细胞周期蛋白D基因产物和所述目的蛋白在所述细胞中被表达。本发明还涉及生产目的蛋白的方法，所述方法包括(a)将编码细胞周期蛋白D基因产物的核酸和编码目的蛋白的核酸插入到真核细胞中；和(b)在允许表达所述目的蛋白的条件下培养所述细胞；和(c)分离所述目的蛋白。所述细胞最好是哺乳动物细胞，而CHO细为最优选的。所述细胞周期蛋白D基因产物最好是人源的。合适的目的蛋白包括促红细胞生成素(EPO)、骨原细胞生成素(OPG)、OPG-Fc、leptin、Fc-leptin和新红细胞发生刺激蛋白(NESP)。

摘要： 本发明公开了斑节对虾细胞周期蛋白依赖性激酶8基因及其编码的蛋白，本发明提供的基因不仅为研究斑节对虾细胞周期蛋白依赖性激酶8在卵巢发育中的作用奠定基础，而且可以为斑节对虾养殖过程中所出现的性腺发育参差不齐的情况从分子层面提供理论基础；其技术要点，该基因序列如SEQ ID NO:1所示；编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；属于生物基因技术领域。

摘要： 用于治疗癌症的CDK4/6抑制剂和mTOR抑制剂的组合。

摘要： 本发明涉及药物化学领域，具体涉及N-(4-取代苯基)-1H-3-吡唑甲酰胺类化合物、它们的制备方法、含有这些化合物的药用组合物以及它们的医疗用途，特别是作为细胞周期蛋白依赖性激酶2抑制剂的用途。

摘要： 本发明涉及药物化学领域，具体涉及1，3，6-三取代-β-咔啉类生物碱、它们的制备方法、含有这些化合物的药用组合物以及它们的医疗用途，特别是作为细胞周期蛋白依赖性激酶2抑制剂的用途。

摘要： 本发明涉及药物化学领域，具体涉及1，6-二取代-β-咔啉类生物碱、它们的制备方法、含有这些化合物的药用组合物以及它们的医疗用途，特别是作为细胞周期蛋白依赖性激酶2/raf激酶双重抑制剂的用途。

摘要： 本发明涉及药物化学领域，具体涉及β－咔啉类生物碱(I)、它们的制备方法、含有这些化合物的药用组合物以及它们的医疗用途，特别是作为细胞周期蛋白依赖性激酶2抑制剂的用途。

摘要： 本发明涉及用于蛋白表达的真核细胞,所述真核细胞包含:(a)编码细胞周期蛋白D基因产物的插入的核酸片段和(b)编码目的蛋白的插入的核酸片段,其中所述细胞周期蛋白D基因产物和所述目的蛋白在所述细胞中被表达。本发明还涉及生产目的蛋白的方法,所述方法包括(a)将编码细胞周期蛋白D基因产物的核酸和编码目的蛋白的核酸插入到真核细胞中;和(b)在允许表达所述目的蛋白的条件下培养所述细胞;和(c)分离所述目的蛋白。所述细胞最好是哺乳动物细胞,而CHO细为最优选的。所述细胞周期蛋白D基因产物最好是人源的。合适的目的蛋白包括促红细胞生成素(EPO)、骨原细胞生成素(OPG)、OPG－Fc、leptin、Fc－leptin和新红细胞发生刺激蛋白(NESP)。