捕食线虫真菌

摘要： 微生物多样性的空间分布格局及驱动机制是微生态学研究的核心问题,从鸟类传播微生物的视角开展研究,可能有助于理解该问题,为此,在云南省大理州采集不同野生鸟类喙、脚趾和脚爪、翅下覆羽和尾下覆羽部位的棉拭子及粪便样品共379份,明确不同鸟类携带捕食线虫真菌(nematode-trapping fungi,NTF)的情况,探究不同鸟类传播NTF的可能性。本研究仅从鸟类脚趾和脚爪样品中检出1属(Arthrobotrys)4种9株NTF,检出率为8.7%。从迁徙状态看,迁徙途中候鸟的检出率为3.6%,已到达越冬地或繁殖地的候鸟检出率为15.0%,留鸟检出率为12.5%。从生态类群看,林鸟中主要在乔木灌丛间活动的鸟类检出率为0,在地面上活动的鸟类检出率为18.2%;水鸟中游禽检出率为10.7%,涉禽检出率为11.1%。研究表明鸟类能够通过脚趾和脚爪携带NTF,鸟类的生境选择决定其携带NTF的能力,NTF中的广布种更容易被鸟类携带和传播。鸟类对微生物的携带和传播作用,及其对微生物多样性空间格局的影响需要纳入相关研究范畴。

摘要： 火是森林生态系统常见的干扰因子,土壤微生物是森林生态系统的重要组成部分,火后土壤微生物的恢复直接影响地上生态系统的恢复,但对土壤微生物的火后即时恢复能力及不同土层微生物在火后土壤微生物群落恢复中的作用尚缺乏研究。本研究以火干扰后40 d的云南松火烧迹地为研究区域,以相邻的非火烧地为对照,分层采集土壤样本(0~10 cm、10~20 cm、20~30 cm),使用传统培养法分离捕食线虫真菌,结合形态和分子技术鉴定物种,分析火后捕食线虫真菌群落的即时恢复能力及不同土层中捕食线虫真菌在群落恢复中的作用。结果显示:火干扰40 d后捕食线虫真菌的生物量恢复迅速,但物种多样性明显降低;Dactylellina属真菌可能是火后恢复的关键类群;分布在土壤下层的捕食线虫真菌在火后群落恢复中发挥着重要的作用,可能是驱动火后土壤微生物群落快速恢复的关键生物因子。

摘要： 为探究微生物在流域中的水、陆分布差异和相互关系,对澜沧江两条支流捕食线虫真菌多样性水陆分布进行了调查研究。在枯水期,以澜沧江一级支流沘江和黑惠江为研究区域,系统布设12个采样点(水流交汇点),每个采样点采集水、陆对称样品各5份,共采集土样120份。结合传统分离纯化、形态学及分子生物学方法筛选和鉴定菌株,按照《Nematode-Trapping Fungi》进行分类,共获得2属13种88株捕食线虫真菌;其中,陆地样品中共分离到2属11种45株,水体底泥中分离出1属10种43株,检出率分别为41.67%和53.33%。结果表明,澜沧江两条支流捕食线虫真菌在物种、属、群落结构3个层面上均存在水陆差异,也相互联系;陆地土壤可能是流域内捕食线虫真菌多样性的源,水流是其重要的传播因子。在流域生态系统内,水陆间的扩散限制和水流的连通性都是维持微生物物种多样性的重要机制。

摘要： 以捕食线虫真菌少孢节丛孢Arthrobotrys oligospora YMF 1.03170为研究材料,通过优化sgRNA表达驱动体系tRNAGly,构建CRISPR/Cas9基因编辑系统,成功获得基因定点编辑菌株.将该CRISPR/Cas9系统与同源重组相结合,可精确地对两个目的 氨基酸编码基因同时进行定点置换.结合代谢图谱及前体化合物饲喂实验,发现6-甲基水杨酸合酶编码蛋白新的活性位点Arg17、Arg18、His33和His34.本研究将CRISPR/Cas9基因编辑系统应用在少孢节丛孢中,并成功建立基因编辑精细体系,为快速构建少孢节丛孢的遗传转化体系和研究该菌的基因功能提供有效方法.

摘要： A strain of nematode-trapping fungus WZ27,which could spontaneously produce conidial trap without any exogenous induction,was isolated from the burned field in Cangshan mountain,Dali,Yunnan Province.Based on morphological and molecular identification the strain was referred to Dactylellina parvicolla.The percentage of the spontaneously producing conidial trap was 18.3％,and the number of conidial trap can be significantly increased by induction of nematode and cow dung.Compared with the reference strain,the trapping device formation time of our strain was shorter (P＜0.001),and the nematode trapping efficiency was higher (P=0.003).%对云南省大理苍山火烧遗迹地土壤中的捕食线虫真菌资源进行调查过程中,发现一株能自发产生孢子捕食器官的捕食线虫真菌,编号WZ27,经形态和分子鉴定为细颈亚隔指孢Dactylellina parvicolla.该株菌的主要特征为不需要经过任何物质的诱导即可自发产生孢子捕食器,其自发形成孢子捕食器官的百分率达到18.3％,通过线虫与牛粪的诱导,孢子捕食器官的形成明显增加.同时与细颈亚隔指孢D.parvicolla参考菌株相比,捕食器官生成时间要更短(P＜0.001),且捕食率高于参考菌株(P=0.003).

摘要： 为探讨捕食性真菌Duddingtoniaflagrans在捕食线虫的过程中产生的细微变化,如捕食器的形成过程,捕获虫体前后的变化等,利用线虫三期幼虫作为诱导物,在玻片培养基中刺激捕食性真菌产生捕食器,然后对其捕食线虫过程进行了适时动态的观察.结果显示,接种有较强活力的线虫三期幼虫2h后捕食器,即菌环开始形成,而后联合形成菌网;4h后虫体被捕食器捕获,24h后线虫即被完全致死;5d后,虫体发生皱缩直至完全消解.D.flagrans还可以自发产生捕食器(菌环),显示了其较强的捕食线虫的效率和能力.本研究为阐明捕食性真菌捕食机制提供了重要的参考依据.

摘要： 目的:对大理白族自治州温泉中的捕食线虫真菌资源进行调查.方法:从大理市、祥云县、弥渡县、剑川县、漾濞县采集温泉底泥共105份,对捕食线虫真菌进行分离、纯化与鉴定.结果:共分离到2属14种捕食线虫真菌,发现一个新种(Arthrobotrys xiangyunensis sp.nov);Arthrobotrys musiformis是温泉捕食线虫真菌中的优势种,检出率为26.92％.在所分离到的捕食线虫真菌中,产黏性菌网的菌种占优势(86.54％).结论:大理温泉中存在丰富的捕食线虫真菌资源,产黏性菌网的捕食线虫真菌为温泉中捕食线虫真菌的优势种群.

摘要： 目的:对高黎贡山北段东、西坡的捕食线虫真菌进行调查,了解坡向对捕食线虫真菌空间分布的影响.方法:分别于东、西两坡进行土样采集,通过形态学和分子生物学进行鉴定,以物种丰富度和检出率作为生物学指标.结果:西坡较东坡存在更为丰富的捕食线虫真菌资源,东、西坡捕食线虫真菌的物种丰富度和检出率随着坡位升高均呈先上升后下降趋势.两个坡向的优势种均为Arthrobotrys thaumasium.结论:高黎贡山北段东、西坡捕食线虫真菌的分布存在异质性,温度和降雨量作为坡向的间接影响因子可能是造成异质性的主要因素.

摘要： 目的:对大理苍山火烧迹地、近火烧地和非火烧地土壤中的捕食线虫真菌进行调查,了解火烧对捕食线虫真菌群落结构的影响.方法:采集苍山北部鱼山、中部感通寺和南部江风寺火烧迹地、近火烧地以及中部兰峰非火烧地土壤样品共208份,采用传统分离方法分离和纯化捕食线虫真菌,结合形态学和分子生物学方法进行物种鉴定,按照新分类系统进行分类.结果:从208份土样中共分离出150株捕食线虫真菌,初步鉴定为3属18种(其中待定种1种).火烧迹地、近火烧地及非火烧地中,Dactylellina属、Drechslerella属和Arthrobotrys属真菌出现的频率依次为67.39％、20.65％、11.96％,52.94％、8.82％、38.24％,29.16％、0.00％、70.84％;优势种分别为Dactylellina ellipspspora(OF=36.59％),Dactylellina ellipspspora(OF=16.36％)和Dactylellina drechsleri(OF=16.36％),Arthrobotrys oligospora(OF=30.00％);多样性指数H′分别为2.05、2.35、1.82.结论:火烧会明显改变土壤中捕食线虫真菌的群落结构,促使捕食线虫真菌群落发生演替.

摘要： 利用线虫诱饵法从感染根结线虫的杂草根际土壤分离出一株捕食线虫真菌,用形态学和分子生物学方法进行了鉴定,测定了其对线虫的捕捉能力及与线虫的相互影响.结果表明:分离菌株经鉴定为Arthrobotrys thaumasia;在该菌菌落接种线虫24h,菌株对腐生线虫Panagrellus redivivus的平均捕食率达99.07％,对松材线虫和爪哇根结线虫的捕食率分别为45.31％和15.55％;接种线虫的菌落上会产生弯曲孢子.该菌对腐生线虫的捕食能力明显强于植物寄生线虫,线虫可诱导其产生变形孢子.

摘要： 本课题组通过同源重组的方法敲除了寡抱节丛孢一个细胞壁蛋白AoMad1，扫描电镜表面突变株的三维菌网上的粘性物质减少了。同时发现△AoMad1菌株和寡抱节丛抱野生型菌株产生捕食器官，而NaN03、尿素及酵母提取物等非优先氮源能够诱导野生菌株和△AoMad1菌株产生捕食器官，而且△AoMad1菌株产捕器的数量要显著高于野生菌株。细胞壁蛋白AoMad1通过影响硝酸盐进入细胞产生并积累胺而影响对捕食器官的诱导。综合以上的结果，AoMad1可以屏蔽一些非优先氮源的诱导信号，而线虫的诱导信号胺没有被屏蔽掉，因此认为它的存在使真菌识别宿主更加准确。

摘要： 捕食线虫真菌是一个广泛分布于陆地和水生生态系统的群体.这些真菌能够从营养菌丝中诱导特化出捕食器官,如粘性菌网、黏性球和收缩环等,捕捉线虫,然后从他们的猎物线虫中吸收营养物质.捕食线虫真菌的这种"食肉"阶段,被认为是在真菌进化中产生的一种在环境逆境中获取氮源的重要方式.本文开展了肌动蛋白细胞骨架相关蛋白Crnlp在寡孢节丛孢捕食器官形成中的作用的研究。通过肌动蛋白细胞骨架染色、肌动蛋白细胞骨架抑制药物LAT-B处理，以及RT-PCR的结果均提示，肌动蛋白细胞骨架及其相关的保守基因Crnlp均参与到捕食器官的形成过程。在寡孢节丛孢中，肌动蛋白细胞骨架参与捕食器官的形成过程。其中保守的肌动蛋白相关基因crn1p的缺失，影响actin patches结构的定位，从而抑制了捕器的分支过程，导致三维菌网不能正常形成。

摘要： 植物寄生线虫病是一类世界范围内普遍发生的植物病害,危害小麦、水稻、烟草、蔬菜、林木和中药材等几乎所有作物,是农业生产中重要限制因子之一.捕食线虫真菌是一类通过捕食器官捕食线虫的微生物,是自然界中线虫种群自然控制的重要因子.本文以寡孢节丛孢为出发菌株，初步探究了高等真菌子囊菌中特有的细胞器伏鲁宁体(woronin body)在寡孢节从孢生长发育过程中的功能。通过同源重组技术敲除了寡孢节丛孢中的HEX基因，与野生菌株相比较，突变菌株生长速率明显降低、气生菌丝不发达、产抱能力降低、不产三维菌网、完全丧失了捕食线虫的能力。研究结果初步证明了伏鲁宁体在寡孢节丛孢捕食器官形成过程中发挥一定作用，为进一步了解寡孢节丛孢产生捕食器官的分子机制奠定基础。

摘要： 捕食线虫真菌是一类重要的微生物类群,它们能通过菌丝特化形成多种类型的捕食器官捕捉线虫。寡孢节丛孢是研究捕食线虫真菌和线虫相互作用的模式真菌,它在线虫的诱导下能形成三维菌网捕捉线虫。在前期的研究中，基于寡孢节丛孢的基因组、蛋白质组学和Real time PCR分析结果，首次提出了寡孢节丛孢捕器形成的假说。最近，通过同源重组技术对该假说中的部分基因进行了基因敲除和突变菌株的表型分析，这些基因编码的蛋白包括粘附相关蛋白、过氧化物酶体蛋白和信号途径相关蛋白等。研究的初步结果表明，这些蛋白的编码基因被敲除以后，突变株的表型发生了显著的变化，其中有些基因的突变菌株不再产生捕食器官，而有些基因的突变菌株产生更多的捕食器官，对线虫的捕食能力增强。

摘要： 一种捕食线虫性真菌冻干制剂及其制备方法与应用，所述捕食线虫性真菌冻干制剂是将捕食线虫性真菌分离株进行厚垣孢子批量培养，然后0.04％～0.06％的灭菌吐温‑80洗脱、过滤制成0.3～0.6×106个/ml的孢子液，接着用10％～20％的β‑环状糊精洗脱保护，最后经预冻、真空冷冻干燥后制成。本发明还包括捕食线虫性真菌口服生物制剂及其制备方法与应用。本发明之捕食线虫性真菌冻干制剂不仅可口服，节约成本，方便实施，而且更能够在保存、运输等环节保持良好活性，对厚垣孢子起到很好的保护作用。本发明制备方法不仅适合于保存菌种，更适合于规模化生产冻干制剂。

摘要： 本发明属于应用微生物学领域，具体涉及一种基于捕食线虫真菌细胞膜破裂并且内体增多而产生捕食器官的方法。所述方法包括以下步骤：将捕食线虫真菌进行孢子培养；将培养得到的孢子接种到培养基中进行菌丝培养；待菌丝生长连成菌网以后，向固体培养基表面中加入可使细胞膜破裂和内体增多的试剂，置于20‑30°C环境中培养至少36h。本发明方法是将高浓度的氨水加入到捕食线虫真菌的菌丝中，使捕食线虫真菌的细胞膜发生破裂，意外发现在膜修复的过程中可产生大量捕食器官，本发明提供了一种新的促使捕食线虫真菌产生捕食器官的方法，为研究捕食器官形成的机制提供新思路，从而为高效生防制剂的开发奠定了基础。

摘要： 本发明涉及一种诱导捕食线虫真菌同步产生捕食器官的方法，属于应用微生物学领域。本发明方法包括线虫培养、线虫提取物制备，捕食线虫真菌培养和捕食器官诱导步骤。本发明通过培养线虫(秀丽隐杆线虫Caenorhabditis elegans)，利用超声波破碎和离心制备线虫提取物，利用线虫提取物诱导捕食线虫真菌同步产生大量捕食器官(106捕食器官/mg菌丝)。本发明操作简单易行，重复性好，可以获得大量同步的三维菌网，为进一步研究捕食线虫真菌捕食器官形成的分子机制提供了良好的实验材料。

摘要： 本发明公开了一种利用线虫细胞外囊泡诱导捕食线虫真菌产生捕食器官的方法，包括如下步骤：(1)线虫的培养；(2)线虫细胞外囊泡的获得及线虫细胞外囊泡表征分析；(3)捕食线虫真菌寡孢节丛孢Arthrobotrys oligospora的培养；(4)利用线虫细胞外囊泡诱导寡孢节丛孢捕食器官的产生。本发明通过提取秀丽隐杆线虫的细胞外囊泡(Extracellular vesicles，EVs)，并利用获得的EVs成功诱导寡孢节丛孢产生捕食器官，说明线虫分泌的EVs中包含有诱导捕食线虫真菌产生捕食器官的物质。这对于理解线虫与捕食线虫真菌的互作机制具有重要的意义，同时在线虫生物防治领域具有重要的应用价值。

摘要： 本发明属于应用微生物学领域，具体涉及一种基于捕食线虫真菌细胞膜破裂并且内体增多而产生捕食器官的方法。所述方法包括以下步骤：将捕食线虫真菌进行孢子培养；将培养得到的孢子接种到培养基中进行菌丝培养；待菌丝生长连成菌网以后，向固体培养基表面中加入可使细胞膜破裂和内体增多的试剂，置于20‑30°C环境中培养至少36h。本发明方法是将高浓度的氨水加入到捕食线虫真菌的菌丝中，使捕食线虫真菌的细胞膜发生破裂，意外发现在膜修复的过程中可产生大量捕食器官，本发明提供了一种新的促使捕食线虫真菌产生捕食器官的方法，为研究捕食器官形成的机制提供新思路，从而为高效生防制剂的开发奠定了基础。

摘要： 本发明涉及一种利用氨基酸诱导捕食线虫真菌产生捕食器官的方法，属于应用微生物学领域。本发明方法包括氨基酸溶液配制、捕食线虫真菌培养和孢子收集、氨基酸溶液浸泡孢子和捕食器官诱导步骤。其中：a.氨基酸溶液的配制中所用氨基酸为缬氨酸、亮氨酸或谷氨酸；b.捕食器官的诱导步骤中采用捕食线虫真菌的分生孢子，并通过氨基酸溶液进行浸泡的方式进行捕食器官的诱导。本发明的优点在于：通过培养和收集捕食线虫真菌的孢子，利用缬氨酸、亮氨酸或谷氨酸溶液进行侵泡，能够诱导捕食线虫真菌产生大量的捕食器官。本发明方法操作简单，重复性好，能够获得大量的捕食器官，为进一步研究捕食线虫真菌捕食器官形成的分子机制提供了良好的实验材料。

摘要： 本发明涉及一种诱导捕食线虫真菌同步产生捕食器官的方法，属于应用微生物学领域。本发明方法包括线虫培养、线虫提取物制备，捕食线虫真菌培养和捕食器官诱导步骤。本发明通过培养线虫(秀丽隐杆线虫Caenorhabditis elegans)，利用超声波破碎和离心制备线虫提取物，利用线虫提取物诱导捕食线虫真菌同步产生大量捕食器官(106捕食器官/mg菌丝)。本发明操作简单易行，重复性好，可以获得大量同步的三维菌网，为进一步研究捕食线虫真菌捕食器官形成的分子机制提供了良好的实验材料。

摘要： 本发明公开了捕食线虫真菌寡孢节丛孢的STR分子标记，具体涉及DNA分子标记技术领域，包括以下具体步骤：步骤一、寡孢节丛孢全基因组STR扫描及引物设计，步骤二、寡孢节丛孢基因组DNA的提取和检测，步骤三、STR引物的初筛和及产物检测，步骤四、基于STR数据的遗传多样性分析。本发明通过在已经获得寡孢节丛孢基因组数据的基础之上，利用常规生物信息学方法，在基因组水平上检测其STR的分布，进行引物设计，利用分离自不同生长环境的寡孢节丛孢菌株样品，选取部分引物进行初筛、复筛后，得到20个具有多态性的STR分子标记，且该分子标记具有多态性高，重复性好，检测方便快捷和使用成本低廉等优势。

摘要： 本发明公开了一种刺激树干上捕食线虫真菌生长的营养基质及其制备方法和用法，包括营养基质S或营养基质E包括，其中：营养基质S包括：灭菌土壤0.001‑100重量份；以及培养基1‑1000重量份；营养基质E包括：灭菌土壤浸出液0.001‑100重量份；以及培养基1‑1000重量份。本发明营养基质具有刺激树干上原有捕食线虫真菌生长的功能。

摘要： 本实用新型公开了一种测定捕食线虫真菌对植物寄生线虫捕食率的辅助装置，包括与培养皿大小、形状适配的盘体，盘体的上端面连接有用于切取培养基的切管，盘体的上端面设置有至少两个开设有内螺纹的通孔，每个通孔到切管的距离相同，通孔绕切管的中心轴均匀分布，通孔沿切管的周向均匀分布，每个通孔均螺纹连接有螺纹件，螺纹件沿通孔的长度方向上下移动；该测定捕食线虫真菌对植物寄生线虫捕食率的辅助装置可以很有效的在培养基中抠出培养基形成空白区以放置线虫，与此同时，还可以在空白区的周围开设有放置捕食线虫真菌的孔，且每个孔与空白区的距离一致，保证了位于这四个孔中的捕食线虫真菌对线虫的距离一致，十分的方便，有助于使得实验更加简便化。