布鲁菌

摘要： [目的]探索重组布鲁菌Omp19蛋白的制备方法,评价其在实验动物中的免疫原性,为中试工艺放大奠定基础。[方法]利用摇瓶培养对重组Omp19蛋白进行原核诱导表达,对培养基类型、诱导剂浓度、诱导温度、诱导时间、诱导时的菌体密度等条件进行筛选;利用阳离子交换层析、疏水层析和阴离子交换层析对重组Omp19蛋白进行纯化制备;利用SDS-PAGE和分子排阻高效液相色谱法(SEC-HPLC)对重组Omp19蛋白的纯度进行鉴定;利用动物实验评价制备的重组Omp19蛋白的免疫原性。[结果]摇瓶培养试验表明,重组布鲁菌Omp19蛋白较优的表达条件为:使用LB培养基,在菌密度OD600 nm值为0.6~1.0时加入0.5 mmol/L的IPTG,于28°C诱导5 h;经3步纯化后,获得了高纯度的重组Omp19蛋白;免疫原性研究表明,经方法优化后制备的重组Omp19蛋白联合佐剂可以较好地刺激BALB/c小鼠产生特异性抗体。[结论]优化了重组布鲁菌外膜蛋白Omp19的制备方法,评价了其在小鼠中的免疫原性,为重组布鲁菌疫苗的研发提供了实验基础。

摘要： 神经型布氏杆菌病是布鲁菌感染引起的乙类人畜共患病。临床特征多样,实验室检查及影像学检查特征不明显,脑脊液改变在发病初期类似病毒性脑膜炎,后期酷似结核性脑膜炎。现报道1例我院收治的神经型布氏杆菌病患者长达半年的诊疗过程(先后8次腰穿),以提醒广大临床医师对本病的认识,指导临床诊治。

摘要： 目的观察分析在人布鲁菌病抗体中进行虎红平板凝集试验以及试管凝集试验检测效果。方法选择我疾控中心于2014年至2019年内收到的80例人布鲁菌病患者血清样品为研究对象,将所有样品按照检测方法的不同,分为对照组(40例,进行试管凝集试验检测)和观察组(40例,进行虎红平板凝集试验检测)。对两组样品在检测完成后的效果进行收集和分析。并对两组的敏感度、准确度、阳性率、阴性率以及布鲁菌检出率。结果对照组进行试管凝集试验检测后敏感度80%,准确度为82.50%,观察组进行虎红平板凝集试验检测后敏感度为100%,准确度为97.50%。观察组进行虎红平板凝聚试验检测后敏感性以及准确性明显高于对照组进行试管凝集试验检测后准确性以及敏感性(P<0.05);对照组进行试管凝集试验检测后阳性36(90.00%)例,阴性4(10.00%)例,观察组进行虎红平板凝集试验检测后阳性40(100.00%)例,阴性0例,观察组进行虎红平板凝集试验检测后检测效果明显优于对照组进行试管凝集试验检测后检测效果(P<0.05)。在布鲁菌结果方面上,观察组布鲁菌检出率为95.00%;对照组布鲁菌检出率为77.50%;观察组数据相比较对照组较高(P<0.05)。结论在人布鲁菌病抗体中采用虎红平板凝集试验检测能够提高敏感性和准确性,具有明显检测效果,在实际工作中为保证精确度,往往采用虎红平板凝集和试管凝集试验相结合检测。

摘要： 布鲁菌(Brucella)是革兰阴性小杆菌,主要引起的布鲁菌病(Brucellosis),属于动物源性的人畜共患疾病[1]。该疾病临床表现多样,初期往往不典型症状较多,容易误诊。随着自动化血培养仪器以及质谱仪鉴定仪的普及和应用,布鲁菌检出率较以往有所提升,为临床诊治提供了有价值的诊断依据,在一些非牧区或者布鲁菌病的非流行区,均有报道[2-3]。近年来,三门峡市中心医院将检出的布鲁菌引起感染的散在病例,按照《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病,上报至本市疾病预防控制中心。现将1例以多关节肿痛为首发症状的布鲁菌感染患者的临床资料报告如下。

摘要： 目的分析布鲁菌病并发胸腔积液患者的临床特征,为临床诊治提供参考。方法分析2013年1月—2020年12月呼伦贝尔市人民医院确诊收治的4例布鲁菌病并发胸腔积液患者的病历资料,采用回顾性方法分析一般资料、流行病学史、临床特征、实验室检查以及疗效情况。结果4例布鲁菌病并发胸腔积液患者均为男性,年龄最小22岁,最大62岁。所有患者均有发热、乏力,可伴有寒战、多汗、腰痛、背部伴双侧肋部疼痛、咳嗽、咳痰、胸闷、气短、呼吸困难等症状。所有患者血清和胸腔积液虎红平板凝集试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)均为阳性,1例患者血和胸腔积液均培养出布鲁菌。所有患者均出现C反应蛋白和红细胞沉降率增高,结核菌素试验均为阴性或弱阳性。行胸腔穿刺术抽出胸腔积液黄色液体3例,抽出脓性1例,积液均在中等量及以上,均为渗出液。患者给予12周及以上足疗程联合抗菌药物治疗后,近期疗效有效率达100%。结论布鲁菌病并发胸腔积液发病率较低,当患者出现发热、乏力、多汗以及呼吸系统不适时,临床医生应详细询问患者流行病学接触史,考虑布鲁菌病可能,早诊断、早治疗,可预后良好。

摘要： 目的对江西省近几年分离的布鲁菌进行鉴定和分型,同时检测rpoB基因的携带情况并分析其遗传多态性。方法利用BCSP31-PCR对分离的菌株进行布鲁菌鉴定,利用AMOS-PCR对布鲁菌进行种型分析,利用普通PCR对rpoB基因进行检测,将rpoB基因的PCR扩增产物进行测序并用MEGA6.0软件进行多态性分析。结果经鉴定32株布鲁菌全部为羊种布鲁菌,通过对rpoB基因的PCR扩增产物序列分析显示羊种布鲁菌rpoB基因同源性较高。结论江西省近年人感染的布鲁菌均为羊种布鲁菌,且近几年人感染的羊种布鲁菌rpoB基因高度同源。

摘要： wbkD基因在布鲁菌中编码一种糖基转移酶,参与合成布鲁菌LPS的O侧链。为探究wbkD基因与布鲁菌LPS合成和毒力之间的关系,本研究利用同源重组技术构建猪种布鲁菌wbkD基因缺失株。通过吖啶黄凝集试验、结晶紫染色、细菌LPS银染分析比较亲本株和缺失株之间LPS合成能力的差异,并利用小鼠巨噬细胞感染试验和小鼠感染模型,分析wbkD基因缺失对细菌毒力的影响。结果显示,wbkD基因缺失导致布鲁菌由光滑表型转变为粗糙表型,感染后48 h和72 h,ΔwbkD的细胞内存活能力显著弱于亲本株(P<0.001),小鼠感染试验进一步证实,在相同的感染剂量下,感染后1周和4周ΔwbkD在小鼠脾脏和肝脏载菌量均显著低于亲本株(P<0.001)。wbkD基因是布鲁菌合成LPS过程中的关键基因,wbkD基因缺失导致布鲁菌毒力致弱,本研究可为进一步筛选布病疫苗分子修饰靶点提供参考。

摘要： 病例1,男,21岁,餐厅职工,因“头痛伴间断低热1周”于2021年6月17日入新疆维吾尔自治区人民医院。患者于入院1周前受凉后出现头痛,呈头部胀痛不适,主要于夜间出现,持续数小时不缓解,伴午后及夜间低热,体温波动在37.5°C左右,伴乏力、恶心,偶伴右下肢关节疼痛不适,就诊于当地医院,诊断考虑脑膜炎,给予积极对症治疗后体温未见下降,入院前3天出现胡言乱语、答非所问,故转至我院。病程中患者饮食睡眠差,大小便正常,体重无明显变化。

摘要： 布鲁菌病,简称布病,也称“波状热”,是布鲁杆菌感染引起的一种人畜共患传染病,属自然疫源性疾病,感染人以及牛、羊、猪、犬等动物。临床上主要表现为病情轻重不一的发热、多汗、关节痛和肝、脾、淋巴结肿大等。该病是我国《传染病防治法》规定的乙类传染病,可造成严重的健康和社会经济损失。21世纪以后,中国布鲁菌病疫情强势走高,疫区范围逐年扩大。实验室获得性布鲁菌病(LAB)也是实验室感染最常见的疾病之一[1]。

摘要： 布鲁氏菌病(以下简称“布病”)是由布鲁氏菌引起的人畜共患性传染病,又称“波浪热”,是我国重点防控的人畜共患传染病之一。一、流行特点该病为全球性疾病。大多数动物都可感染布病,但以羊、猪、牛最为易感,人也可感染布鲁菌,以羊布鲁菌的感染力最强,危害最严重,其次是牛布鲁菌。在春末夏初为发病高峰,在流行区呈点状流行。

摘要： 由布鲁菌感染引起的布鲁菌病是一种重要的人畜共患病,该病严重影响畜牧业生产和人类健康.细菌通过甲硫氨酸代谢(Activated methionine cycle,AMC)产生的一碳基团广泛参与蛋白质、嘌呤和嘧啶等的合成以及作为体内各种化合物甲基化的甲基来源,AMC对细菌具有重要的调控作用.Bru-SahH Pse-SahH能分别催化mmoVLSAH生成38.0和47.0μM的HCY，而APEC的pfs和LuxS蛋白能催化相同浓度的SAH产生401μM的HCY。运用哈维弧菌BB170对上述底物的AI-2括性检测结果表明，只有同时采用AEPC的pfs和LuxS蛋白催化SAH能形成有活性的AI-2分子。

摘要： 根据GenBank中登录的布鲁菌(Brucella)omp31、bp26、omp10外膜蛋白基因序列,针对同一种病原,各设计合成了一对特异性引物,通过优化引物浓度组合,建立了检测布鲁菌 472 bp、290 bp、162 bp片段的多重PCR快速检测方法.通过对该方法的特异性、敏感性和重复性试验,结果显示,该方法从布鲁菌标准菌株中扩增出了特异性的目的片段,而对大肠埃希菌等细菌的扩增结果均为阴性.经过对10倍倍比稀释的模板进行检测,多重PCR的敏感度为最低可检出1.1×10-3ng的DNA,在感染布鲁菌病奶牛乳汁模拟标本中最低可检出细菌数为80 cfu/mL.不同人员用该方法重复检测,结果均一致,表明重复性好.应用该方法对88份临床疑似布鲁菌感染的奶牛乳样进行了检测,结果检出17份阳性,阳性检出率约为19.3%.检测结果表明,该方法具有特异、敏感、重复性好等优点,可用于奶牛布鲁菌病的临床检测及流行病学监测等.

摘要： 用设计的1对特异性引物对羊布鲁菌16M总DNA进行外膜蛋白基因omp10的PCR扩增,得到了一个片段大小为330bp的目的基因(去掉17个氨基酸编码的信号肽),测序证实它与国外报道的羊布鲁菌omp10基因完全一致。将其克隆到表达载体PET-30a中,经酶切、PCR扩增和测序分析,表明重组表达载体构建成功。将此重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,该基因以包涵体的形式在大肠杆菌中表达,经过包涵体的变性、复性和亲和层析纯化,成功获得大小为14.2ku的融合蛋白,与理论推测的蛋白分子质量一致;Western-blot和间接ELISA试验证明,纯化之后的OMP10重组蛋白可以被布鲁菌阳性血清识别。

摘要： 目的:旨在通过布鲁菌分离株及对应的患者血液样本验证不同引物扩增的特异性及其敏感性,为将PCR方法应用于人布鲁菌病临床诊断提供实验室参考依据。方法:布鲁菌传统分离培养方法,根据表型对分离株鉴定分型;血清学实验方法:玻片凝集试验(PAT)和试管凝集试验(SAT);PCR方法:应用不同布鲁菌属引物B4／B5、BP26以及羊、牛和猪种引物对布鲁菌分离株进行鉴定,同时对其血液模板进行PCR检测。结果:从急性发热患者血液分离到24株布鲁菌,经表型鉴定均为羊种,其中15株为羊3型,9株为羊1型；对分离株进行PCR鉴定,布鲁菌属引物B4／B5、BP26及羊种引物在分离株中均扩增到目的条带;应用不同引物PCR方法对血液模板检测的阳性率依次为B4／B5(79.17％),羊种(66.67％)和BP26(25.00％);B4／B5和羊种引物扩增同为刚性的符合率为41.67％,B4／B5或羊种引物扩增为阳性的符合率为91.67％。结论:在有布鲁菌分离培养阳性证据的血液样本中,应用单一引物PCR进行人布鲁菌病诊断的敏感性较低,将布鲁菌属B4／B5和地方流行种引物结合可提高PCR检测方法的敏感性和特异性。

摘要： 本发明涉及基因工程领域，本发明公开了5种质粒、质粒的构建以及在布鲁菌表达外源基因研究中的应用。本发明共包含5种质粒：pTM1‑Cm、pTM2‑Amp和pTM3‑Km是分别带有氯霉素抗性基因、氨苄霉素抗性基因和卡那霉素抗性基因的质粒，用于布鲁菌缺失基因的功能回补；pGH‑6×His是基于pTM1‑Cm质粒构建的、用于在布鲁菌中持续高效表达外源基因的质粒；pZT‑6×His是基于pTM1‑Cm质粒构建的、用于在布鲁菌中诱导表达外源基因的质粒。本发明系列质粒的使用将为布鲁菌基因功能研究提供重要工具。

摘要： 本发明提供了一种检测布鲁菌感染的方法，即血清血细胞同步检测法。该检测法包括血清样本检测与活的血细胞样本检测两种操作步骤和一个配套试剂盒。此试剂盒可用于临床体外检测布鲁菌的血液样本前处理。血清血细胞同步检测法可用于布鲁菌感染早期临床快速诊断和治疗过程中指导用药，还可用于预后判定和布病流行病学调查等方面。本发明还可用于其他胞内寄生菌感染的早期临床快速诊断。

摘要： 本发明公开一种检测布鲁菌的LAMP核酸试纸条试剂盒及应用。该试剂盒包含核苷酸序列如SEQ ID NO.1～6所示的引物组和核酸检测试纸条。该试剂盒的使用方法如下：首先配制LAMP反应体系，包含1倍反应缓冲液、链置换DNA聚合酶、dNTP混合物、甜菜碱、MgSO

摘要： 羊种布鲁菌16M LPS的制备方法及其单克隆抗体的筛选鉴定方法和应用，涉及单克隆抗体制备领域。本发明用酚水法提取羊种布鲁菌16M的LPS，纯化后用其免疫Balb/c小鼠；将免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合；间接ELISA方法筛选出两株阳性杂交瘤细胞株；制备两株羊种布鲁菌16M LPS单克隆抗体，亚型为IgG3和IgG1，轻链类型为κ型，浓度为1.02和2.10mg/ml，亲和常数为1.12×109和1.11×109，效价为1：6400和1：12800，其纯度和效价高，亲和性好，结合能力强，特异性和敏感性好，抗体包被10分钟便可与布鲁菌发生特异性结合，免疫荧光试验可观察到现明显的荧光。

摘要： 本发明公开了布鲁菌减毒活疫苗液体气溶胶肺递送免疫小鼠模型。本发明基于布鲁菌104M疫苗株，以BALB/c小鼠为研究对象，构建了一种新的小鼠免疫模型，对布鲁菌104M疫苗株在小鼠体内的安全性及保护力进行研究与评估，用BALB/c小鼠验证了布鲁菌104M疫苗株作为疫苗的免疫原性和效力。结果表明：布鲁菌液体气溶胶肺递送途径是一种有效的免疫途径，10

摘要： 本发明提供了一种检测布鲁菌感染的方法，即血清血细胞同步检测法。该检测法包括血清样本检测与活的血细胞样本检测两种操作步骤和一个配套试剂盒。此试剂盒可用于临床体外检测布鲁菌的血液样本前处理。血清血细胞同步检测法可用于布鲁菌感染早期临床快速诊断和治疗过程中指导用药，还可用于预后判定和布病流行病学调查等方面。本发明还可用于其他胞内寄生菌感染的早期临床快速诊断。

摘要： 本发明涉及基因工程领域，本发明公开了5种质粒、质粒的构建以及在布鲁菌表达外源基因研究中的应用。本发明共包含5种质粒：pTM1-Cm、pTM2-Amp和pTM3-Km是分别带有氯霉素抗性基因、氨苄霉素抗性基因和卡那霉素抗性基因的质粒，用于布鲁菌缺失基因的功能回补；pGH-6×His是基于pTM1-Cm质粒构建的、用于在布鲁菌中持续高效表达外源基因的质粒；pZT-6×His是基于pTM1-Cm质粒构建的、用于在布鲁菌中诱导表达外源基因的质粒。本发明系列质粒的使用将为布鲁菌基因功能研究提供重要工具。

摘要： 本发明提供了布鲁菌L7/L12蛋白用于制备牛外周血γ-干扰素体外释放试验特异性刺激剂的新用途。本发明的L7/L12蛋白作为牛外周血γ-干扰素体外释放试验刺激原的检测效果好于其它4种布鲁菌抗原蛋白，与布鲁菌病cELISA抗体检测试剂盒的阳性和阴性检测符合率分别为75.0%和90.7%，总符合率达到89.0%，显示出其作为牛布鲁菌病外周血γ-干扰素体外释放试验刺激原的应用价值。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体提供了一种布鲁菌外膜蛋白抗体检测ELISA试剂盒。所述ELISA试剂盒以大肠杆菌表达的布鲁菌外膜蛋白OMP28作为抗原包被酶标板，用布鲁菌标准阳性血清和阴性血清分别作为阳性对照和阴性对照，以HRP标记的羊抗牛IgG作为酶标抗体，配以稀释液、洗涤液、底物溶液A、底物溶液B和终止液组装而成。本发明布鲁菌外膜蛋白抗体检测ELISA试剂盒具有安全、敏感、特异、简单、快速、稳定的优点，可满足我国对牛群中布鲁菌的抗体进行检测监测的防疫要求。

摘要： 本发明公开了一种牛布鲁菌(Bovine brucellosis)外膜蛋白Omp22基因与制备方法及其应用，涉及一种基因，尤其是涉及一种在牛布鲁菌外膜上表达的外膜蛋白Omp22基因与制备方法及其用途。提供一种牛布鲁菌外膜蛋白Omp22及其编码基因，它是编码所述外膜蛋白Omp22的核苷酸序列和氨基酸序列；提供利用重组技术制备所述Omp22基因的方法，其步骤为将编码具有所述Omp22活性多肽的纯化的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成所述Omp22表达载体，将表达载体转入宿主细胞，形成、所述外膜蛋白Omp22的重组细胞；培养重组细胞；提供牛布鲁菌外膜蛋白Omp22及编码序列的应用。