S100β基因单核苷酸多态性对miRNA靶向调控的影响

摘要

目的 探讨中枢神经特异蛋白(S100β)基因单核苷酸多态性对微小RNA(miRNA)靶向调控的影响.方法 利用TargetScan在线软件,寻找调控S100β基因的miRNA及其配对结合位点.构建S100β基因rs9722位点不同基因型载体并鉴定.将构建的S100β基因rs9722位点不同基因型载体(S100β-rs9722C、S100β-rs9722T、S100β-rs9722C-mut)与miRNA模拟物(miRNA mimics、miR-340-3p、miR-593-3p、miR-6827-3p)两两组合共转染293T细胞,采用双荧光素酶报告基因实验检测各组合培养液上清荧光素酶活性.取对数生长期人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,分别转染miRNA mimics、miR-340-3p、miR-593-3p、miR-6827-3p,采用实时荧光定量PCR法检测相应miRNA表达,采用Western blotting法检测S100β 表达.结果 miR-340-3p、miR-6827-3p的5′-CUCUGCC-3′序列与S100β 基因3′非编码区(3′UTR)的5′-GAGACGG-3′序列完全互补,而miR-593-3p的5′-GUCUCUG-3′序列与S100β 基因3′UTR的5′-CA-GAGAC-3′序列完全互补.经鉴定,构建的S100β基因rs9722位点S100β-rs9722C、S100β-rs9722T、S100β-rs9722C-mut序列双酶切片段大小与目的基因序列片段大小一致.双荧光素酶报告基因实验显示,miR-340-3p、miR-6827-3p可靶向调控S100β基因rs9722C位点的3′UTR,而对S100β基因rs9722T、rs9722C-mut位点的3′UTR无靶向调控作用;miR-593-3p对S100β基因rs9722C、rs9722T、rs9722C-mut位点的3′UTR均无靶向调控作用.miR-340-3p组、miR-593-3p组、miR-6827-3p组相应miRNA相对表达量均高于其对应miRNA NC组(P均0.05).结论 miRNA对S100β基因转录后调控效率存在基因型差异,miR-6827-3p可能通过靶向结合S100β基因rs9722C基因型mRNA,从而调控S100β表达.