miR-16在葡萄膜黑色素瘤细胞中的表达变化及其对细胞增殖的影响

摘要

目的 观察miR-16在葡萄膜黑色素瘤细胞中的表达变化,及其对细胞增殖的影响.方法 培养葡萄膜黑色素瘤细胞系SP6.5及正常葡萄膜黑色素细胞系UM-U-95.采用实时定量PCR法检测SP6.5细胞、UM-U-95细胞中的miR-16.将SP6.5细胞分为miR-16组、对照组和miR-16抑制剂组.其中miR-16组转染miR-16 mimics,对照组转染scramble(阴性对照序列),miR-16抑制剂组转染miR-16抑制剂.分别于转染24、48、72 h采用MTT法测算各组相对活细胞百分比;转染72 h后采用克隆形成实验测算克隆形成率;转染72h后,采用Western blotting法检测各组细胞中的成纤维细胞生长因子2(FGF2)蛋白.结果 SP6.5细胞、UM-U-95细胞中miR-16相对表达量分别为0.22±0.02、1.0,SP6.5细胞中miR-16的相对表达量低于UM-U-95细胞(P<0.01).转染后48、72 h miR-16组相对活细胞百分比低于对照组,miR-16抑制剂组相对活细胞百分比高于对照组(P均<0.05).转染72 h后,miR-16组、对照组、miR-16抑制剂组克隆形成率分别为20.15%±2.53%、42.63%±4.42%、68.36%±6.25%,miR-16组克隆形成率低于对照组,miR-16抑制剂组克隆形成率高于对照组(P均<0.05).miR-16组、对照组、miR-16抑制剂组细胞中FGF2蛋白相对表达量分别为0.27±0.02、1.0、5.64±0.58,miR-16组FGF2蛋白相对表达量低于对照组,miR-16抑制剂组FGF2蛋白相对表达量高于对照组(P均<0.05).结论 miR-16在葡萄膜黑色素瘤细胞中表达下调.miR-16过表达可抑制葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、降低克隆形成率,抑制miR-16表达可增强葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖能力.miR-16对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖能力的影响可能与调节FGF2蛋白表达有关.